博落回的性狀及其飲片品質特征

陳志琳， 杜洪志， 伍莎莎， 張 靜， 李 瑋

(貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025)

博落回為罌粟科植物博落回〔Macleayacordata(Willd.) R.Br.〕的干燥全草，其性味苦、寒、大毒，具有清熱解毒，活血散瘀，殺蟲止癢的功效，用于風濕痹痛，跌打損傷，癰腫瘡毒，下肢潰瘍，頑癬，陰癢。使用方法主要是外用，搗爛敷，煎水熏洗，乙醇浸漬液涂搽[1]。其主要活性成分為生物堿，至今已被分離鑒定的生物堿達74個，其含量最高且活性較強的為苯胼異喹啉類生物堿，主要包括血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿等[2-4]。博落回具有抗菌消炎、殺蟲止癢、改善肝功能、增強免疫功能、抗腫瘤等藥理作用[5-10]。博落回為貴州省特色民族藥，因其具有良好的抗菌消炎、散淤止痛之功，在少數民族地區應用廣泛。2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》中僅對其植物的性狀、薄層鑒別、功能主治等進行簡要描述，其質量控制指標不完善，不能全面、有效控制該藥材質量。

近年來，博落回在養豬業、養禽業和水產養殖業方面均有良好應用效果[11]，且還作為原料制備相關醫藥制劑[12]，開發前景良好。目前，有關博落回質量標準的研究較少。為進一步保障博落回質量及相關制劑安全有效、穩定可控，以博落回為研究對象，采用薄層色譜法和高效液相色譜法，建立博落回的薄層鑒別方法和血根堿的含量測定方法，參照2015年版《中國藥典》(4部)要求，測定博落回飲片的水分、灰分、浸出物含量，并初步建立博落回飲片質量標準，以期為博落回更好地開發利用及其藥材的質量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

對照品：血根堿(批號：510001-201101，純度：99.3%)，中國食品藥品檢定研究院。

博落回樣品：共10批，分別采自貴州黔東南州凱里市雷山縣西江鎮和廣西壯族自治區全州縣安和鎮等地，其樣品信息見表1。經貴州中醫藥大學生藥教研室鑒定為罌粟科博落回屬植物博落回的帶根全草，藥材根切厚片，莖切短段，葉于60℃烘箱烘干，備用。

表1 10批博落回飲片信息Table 1 Information on 10 batches of M. cordata decoction pieces

儀器：LC-20 AT型高效液相色譜儀，日本島津；色譜柱Sino Chrom ODS-BP C18(4.6 mm×250 mm)，上海月旭科技股份有限公司；TU-1810PC型紫外可見分光光度計，上海元析儀器有限公司；AUW220D型全自動電子分析天平，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；BX41顯微鏡、DP顯像系統日本OLYMPUS公司。

試劑：乙腈，天津市科密歐化學試劑有限公司；磷酸(色譜純)，天津市科密歐化學試劑有限公司；水為娃哈哈純凈水；水合氯醛(分析純批號20161121)，天津市大茂化學試劑廠；甘油(分析純批號20161113)，天津市瑞金特化學品有限公司；冰醋酸(批號20160701)，重慶川東化工集團有限公司，其余試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 藥材性狀鑒定 對采集的10批博落回全草的大小、顏色、形狀、斷面、質地等特征進行對比觀察和描述。

1.2.2 顯微鑒別 對采集的10批博落回樣品粉末用水合氯醛透化制片，應用光學顯微鏡對其組織結構、細胞形態等進行觀察、測量和描述，并對有代表性的特征進行拍照記錄。

1.2.3 薄層色譜鑒別 對照藥材及供試品藥材的制備。精密稱定博落回對照品約1.0 g，置于100 mL圓底燒瓶中，精密加入80%乙醇40 mL，靜置1 h，稱定重量，回流提取1 h，放冷，補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。同法制得供試品溶液。按照2015年版《中國藥典》4部薄層色譜法(通則0502)試驗，分別取對照品和供試品溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-石油醚-丙酮(15∶10∶1)為展開劑，置氨蒸汽飽和的展開缸內飽和20 min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.4 水分、灰分、浸出物的測定 水分測定按照2015年版《中國藥典》(4部，通則 0832)水分測定法第2法烘干法測定，灰分測定按照2015年版《中國藥典》(4部，通則2302)灰分測定法測定，浸出物按照2015年版《中國藥典》(4部，通則2201)浸出物測定法采用熱浸法測定，50%乙醇作為提取溶劑。每批樣品平行測定3份。

1.2.5 血根堿的含量測定

1) 對照品溶液的配制。將血根堿對照品置于五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h，精密稱取血根堿對照品12.1 mg，置于50 mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解至刻度，制成0.420 mg/mL的血根堿對照品。

2) 供試品溶液的制備。精密稱定博落回樣品粉末(過4號篩)約1.0 g，置于100 mL圓底燒瓶中，精密加入80%乙醇40 mL，靜置1 h，稱定重量，回流提取1 h，放冷，補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

3) 色譜條件。色譜柱，SinoChrom ODS-BP C18(4.6 mm×250 mm×5 μm)；流動相，乙腈-0.3%磷酸(29∶71)；檢測波長285 nm，流速1.2 mL/min；進樣量10 μL，柱溫30℃。

4) 陰性對照及系統適應性試驗。以乙醇為陰性對照溶液。取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，按色譜條件進行測定。理論塔板數以血根堿計應不小于6 000，分離度大于1.5。

5) 繪制標準曲線。精密吸取血根堿對照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL和25 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以質量為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)，求回歸線性方程。

6) 精密度試驗。精密吸取血根堿對照品溶液10 μL注入色譜儀，重復進樣6次，每次10 μL，記錄峰面積，計算RSD值。

7) 穩定性試驗。取同一供試品溶液，在 0 h、3 h、6 h、9 h、12 h，分別進樣10 μL，計算血根堿含量和RSD值。

8) 重復性試驗。精密稱取同一批號的博落回粉末(過4號篩)，共6份，每份約1 g，供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，計算血根堿含量和RSD值。

9) 加樣回收率試驗。精密稱取博落回粉末約0.5 g，共6份，加入適量血根堿對照品，按供試品溶液的制備方法制備，分別進樣10 μL，測平均回收率和RSD值。

2 結果與分析

2.1 博落回的性狀特征

博落回根粗壯，棕褐色，有縱溝紋。莖圓柱形，直徑2～4 cm，中空，淺綠色，被白色粉霜，上部有分枝。單葉互生，具長柄；葉片皺縮，完整葉片展平后呈寬卵形或近圓形，5～9淺裂，裂片邊緣具不規則波狀齒，上表面淺綠色或灰綠色，下表面被白霜及細密茸毛。圓錐花序多頂生，殘存小花白色或淡紅色，易脫落。氣微，味苦。

2.2 博落回飲片粉末特征

博落回飲片粉末薄壁細胞中見草酸鈣簇晶，直徑為20～44 μm，有黃棕色團塊，有淀粉粒，單粒類圓形，直徑2～10 μm，導管有網紋導管，梯紋導管，具緣紋導管，孔紋導管，非腺毛1～6個細胞，直徑6～28 μm，長55～297 μm(圖1)。

2.3 博落回飲片的薄層色譜圖

從圖2可知，10批博落回樣品的薄層色譜斑點清晰，分離度好，Rf值適當。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。

2.4 博落回的水分、灰分及浸出物含量

從表2可知，不同產區10批博落回飲片的水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量有一定差異，水分含量在10.42%～12.66%，平均為10.86%，其中，貴州凱里市西江鎮最高，貴陽市紅楓湖鎮最低；總灰分含量在5.08%～9.27%，平均為6.65%，其中，桂林市鳳凰鎮最高，貴州凱里市西江鎮最低；酸不溶性灰分含量在0.20%～1.55%，其中，貴陽市青巖鎮最高，桂林市安和鎮最低；水溶性浸出物含量在16.28%～29.59%，平均19.97%，其中，貴州凱里市西江鎮最高，貴陽市青巖鎮最低；醇溶性浸出物含量在18.35%～26.48%，平均為21.16%，其中，貴州凱里市西江鎮最高，桂林市安和鎮最低。

表2 10批博落回飲片樣品中的水分、灰分及浸出物測含量Table 2 Content of moisture, ash and extract in 10 batches of M. cordata decoction pieces %

2.5 博落回飲片中的血根堿含量

2.5.1 對照品及樣品色譜圖 從圖3看出，血根堿對照品和博落回樣品的相對保留時間基本一致，且成分分離良好，分離度大于1.5，均達到有效分離。

2.5.2 線性方程 根據試驗結果，血根堿的線性方程為Y=52 010 048.78X+31 107.370 73，r=0.999 7，表明血根堿在進樣含量為0.083～1.043 μg的范圍內線性關系良好。

2.5.3 精密度、重復性和穩定性 根據精密度試驗，血根堿的RSD為2.87%，表明測定儀器的精密度良好。根據重復性試驗，血根堿的平均含量為0.61%，RSD為1.85%，表明測定血根堿方法的重復性良好。根據穩定性試驗血根堿的RSD為3.0%，表明樣品在12 h內穩定性良好。

2.5.4 加樣回收率 從表3可知，血根堿的平均回收率為102.24%，RSD為2.43%，說明測定方法準確性良好。

表3 血根堿的加樣回收率(n=6)Table 3 Recovery of sanguinarine(n=6)

2.5.5 10批博落回樣品中的血根堿含量 從表4可知，貴州、廣西不同地區博落回中均能檢測出血根堿，且各成分含量存在一定差異。血根堿含量為0.27%～0.71%，平均為0.43%，以貴州凱里市雷山縣西江鎮的最高，為0.712 6%。

表4 10批博落回樣品中的血根堿的含量Table 4 Content of sanguinarine in 10 batches of M. cordata decoction pieces %

3 結論與討論

研究表明，在乙腈-0.3%磷酸水溶液(29∶71)梯度洗脫，流速為1.2 mL/min ，進樣量為10 μL，柱溫為30℃，檢測波長為285 nm條件下檢測所得色譜峰的峰形對稱、分離度高。通過方法的研究及系統方法學考察，所建立的含量測定方法專屬性強、合理可行。

經測定，10批博落回樣品的的水分含量為10.42%～12.66%，平均10.86%；總灰分含量為5.08～9.27%，平均6.66%；酸不溶性灰分含量為0.20%～1.57%，平均0.61%；醇溶性浸出物含量為18.35%～26.48%，平均21.16%，水溶性浸出物含量為16.42%～29.59%，平均19.97%；血根堿含量為0.27%～0.71%，平均0.43%。

初步擬定水分、總灰分、酸不溶性灰分檢查項按平均值的120%設限，建議擬定標準為水分≤13.0%，總灰分≤8.0%，酸不溶性灰分≤0.70%。浸出物以平均值的80%為限，擬定浸出物≥17.0%。血根堿的含量以平均值的80%設限，為0.20%，故擬定按干燥品計算，含血根堿(C20H14NO4)≥0.20%。

在建立薄層色譜鑒別方法時，以血根堿為對照，不僅專屬性強，且能夠多成分全面反映其質量。在進行展開劑考察時發現，氯仿-石油醚-丙酮不加甲醇展開斑點較多，且比較清晰，但分離效果不理想，加入極性較小的石油醚調極性后分離度得到很大改善；考察不同比例得出以氯仿-石油醚-丙酮(15∶10∶1)為展開劑展開斑點清晰可見，Rf值適當。

博落回藥材藥效成分主要以異喹啉類生物堿為主，故可按烘干法測定水分。生物堿類成分易溶于乙醇，控制醇浸出物含量，對確保藥材樣品質量穩定具有重要意義。檢測博落回藥材樣品總灰分和酸不溶性灰分含量，可控制藥材樣品中泥土、砂石等外來無機物的量，對確保藥材樣品凈度具有重要意義。

血根堿是博落回有效成分之一，現代藥理研究表明，血根堿具有抑制血管平滑肌收縮、抑腫瘤、抗真菌的作用[10-12]。將血根堿作為博落回飲片質量控制指標對保證博落回飲片質量具有重要意義，研究采用HPLC測定血根堿含量，方法簡便快捷，可用于博落回中血根堿的含量測定。