湘西北某規模化豬場母豬子宮內膜炎金黃色葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性分析

李淑紅 吳夢婷 彭敬 王京仁

摘要：為查明湘西北某規?；i場母豬子宮內膜炎的主要病原菌，對8頭患病母豬子宮化膿性分泌物中病原菌采用培養、鑒別、純化、革蘭氏染色和生化試驗等方法進行分離與鑒定;并對分離菌采用藥物紙片瓊脂擴散法進行藥敏試驗。結果表明，分離出8株金黃色葡萄球菌。28種抗菌藥中金黃色葡萄球菌對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物表現為中介，中介率為10.71%，金黃色葡萄球菌對其他25種藥物均產生耐藥性，耐藥率為89.29%。說明金黃色葡萄球菌是引起該場母豬子宮內膜炎化膿感染的主要致病菌之一，臨床上金黃色葡萄球菌對多種抗菌藥產生了耐藥性，應引起高度重視。

關鍵詞：母豬子宮內膜炎;金黃色葡萄球菌;分離鑒定;耐藥性;藥敏試驗

中圖分類號： S855.1文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）18-0175-02

收稿日期：2019-11-22

基金項目：常德市農業生物大分子研究中心資助項目;湖南省科技廳科技特派員項目（編號：2015NK2116）。

作者簡介：李淑紅（1964—），女，山東禹城人，碩士，教授，主要從事動物病癥防治與保健方面的教學與研究。E-mail：752635080@qq.com。

母豬子宮內膜炎是母豬繁殖障礙最主要的細菌感染性疾病之一，主要由致病微生物入侵母豬子宮黏膜表層或深層，引起子宮黏膜發生黏液性或化膿性炎癥[1]，如不及時治療和控制會給養豬場造成較大的經濟損失。湘西北某規?；i場發生多頭母豬子宮內膜炎病情，為查明引起該豬場母豬子宮內膜炎化膿感染的主要病原菌，對患有子宮內膜炎的母豬子宮化膿性分泌物進行細菌的分離鑒定和藥敏試驗，分析病因，以期為該豬場母豬子宮內膜炎提供防治方案。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

1.1.1?病料來源

湘西北某規?；i場患有子宮內膜炎化膿癥狀明顯的8頭母豬。

1.1.2?試劑

營養肉湯（NB）、營養瓊脂（NA）、甘露醇氯化鈉瓊脂、血液營養瓊脂、麥康凱培養基（MAC）、伊紅-美蘭培養基（EMB）、SS瓊脂培養基、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、葡萄菌屬細菌生化鑒定管，結晶紫、番紅、碘液、香柏油、95%乙醇等，均由杭州天和微生物試劑有限公司生產。

1.1.3?藥敏紙片

環丙沙星、米諾環素、氧氟沙星、氨芐西林、慶大霉素、四環素、紅霉素、丁胺卡那、頭孢他定、頭孢哌酮、萬古霉素、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢唑啉、復方新諾明、諾氟沙星、麥迪霉素、新霉素、羧芐西林、青霉素、頭孢拉定、苯唑西林、克林霉素、多西環素、哌拉西林、頭孢氨芐、卡那霉素、多黏菌素B等28種常見藥敏試紙，均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.4?主要儀器

電子天平（BS223S），購自北京賽多利斯儀器系統有限公司;凈化工作臺（JH-1），購自北京科偉永興儀器有限公司;立式壓力蒸汽滅菌器（BXM-30R），購自上海博迅醫療生物儀器股份有限公司;生化培養箱（LRH-150），購自上海一恒科學儀器有限公司等。

1.2?試驗方法

1.2.1?病料的采集

選取患病癥狀明顯的8頭母豬，對外陰消毒后采用無菌棉拭子插入病豬陰道，旋轉取其膿汁，迅速放入裝有滅菌營養肉湯的8支試管內，封蓋貼標簽，帶回實驗室放入37 ℃恒溫箱中培養18～24 h。

1.2.2?細菌的分離培養

取少量用營養肉湯培養基培養24 h的菌液，分別接種于營養瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂、血液營養瓊脂、麥康凱培養基、伊紅-美蘭培養基、SS瓊脂培養基、亞硫酸鉍瓊脂等培養基中，置于 37 ℃ 恒溫箱中培養18～24 h，觀察細菌生長結果及形態特征。

1.2.3?革蘭氏染色

挑取培養基上黃色單菌落涂片，革蘭氏染色后，在顯微鏡下觀察菌體大小、染色特征等。

1.2.4?生化試驗

將疑似金黃色葡萄球菌接種至葡萄菌屬細菌生化鑒定管中，37 ℃恒溫箱培養18～24 h，觀察并記錄結果。

1.2.5?藥敏試驗

選28種藥物敏感試紙，采用紙片瓊脂擴散法進行藥物敏感性試驗[2]，記錄結果?？咕幖埰N類、含藥量及判定標準均參照文獻，藥物敏感性判定標準分為3級，分別為敏感（S）、中介（I）和耐藥（R）[3]。

2?結果與分析

根據細菌在各培養基上的形態特征、生化反應及革蘭氏染色結果[4-5]，初步判斷該豬場8頭母豬病樣分離的細菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、綠膿桿菌等4種。其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率為100.0%，沙門氏菌的檢出率為40.0%，綠膿桿菌檢出率為12.5%。

2.1?金黃色葡萄球菌分離鑒定結果

疑似金黃色葡萄球菌在營養瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂和血液營養瓊脂平板上均長出表面濕潤、圓形突起、光滑的黃色菌落，在血液營養瓊脂平板上有溶血現象。菌株生化反應結果顯示，細菌對蕈糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、硝酸鹽等的反應均為陽性，對尿素、木糖等的反應均為陰性。顯微鏡下觀察呈紫色，成單、成雙、多數呈葡萄串狀排列，為革蘭氏陽性球菌，結合文獻[4-5]符合金黃色葡萄球菌的特征。

2.2?藥敏試驗結果

由表1可知，金黃色葡萄球菌對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物的敏感性為中介，中介率為10.71%，在臨床中可加大使用劑量;青霉素等其他25種藥物對金黃色葡萄球菌產生耐藥性，耐藥率為89.29%。

3?討論

金黃色葡萄球菌是自然界中常見的革蘭氏陽性菌，主要引起局部組織化膿性感染、敗血癥、心內膜炎等全身感染，也是引起母豬子宮內膜炎的主要致病菌[6]。

本次試驗在化膿癥狀明顯的8頭母豬中均分離檢測到金黃色葡萄球菌，檢出率為100.0%，說明金黃色葡萄球菌是引起該規?；i場母豬子宮內膜炎化膿感染的主要致病菌之一。近年來，由于抗菌藥物在豬場廣泛應用，導致金黃色葡萄球菌耐藥性逐年增加，菌株耐藥性惡化，致使金黃色葡萄球菌導致的病害預防和治療難度加大[7]。試驗選用的28種藥物敏感性試驗結果表明，分離出的8株金黃色葡萄球菌對25種抗菌藥產生耐藥性，只對頭孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3種藥物為中度敏感，這與孫龍等報道藥敏試驗結果[6，8]存在差異。據調查該豬場長期使用青霉素類、頭孢類及喹諾酮類等抗菌藥用于防治母豬子宮內膜炎，隨時間推移，療效不佳，通過試驗可知該豬場病豬分離的金黃色葡萄球菌對多種抗菌藥物產生耐藥性，且耐藥率高達89.29%，應在獸醫臨床引起高度重視。在依靠抗菌藥物治療患子宮內膜炎的病豬時一定不能盲目用藥，應分離病原菌做藥物敏感性試驗，篩選敏感藥物，做到選藥準確，藥物劑量和療程達到標準。另外，在母豬生產中使用藥物進行產后保健時應避免長期使用某一種抗菌藥物，遵循交叉用藥、輪換用藥和配伍用藥的原則，盡量減少細菌耐藥性的產生[6]， 也可選用有抗菌消炎作用的中草藥用于母豬的生產保健提高抗病性，這樣才能更有效地預防和治療規?；i場母豬子宮內膜炎，提高豬場的經濟效益。

參考文獻：

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[2]李淑紅，王京仁，成?鋼，等. 常德市某規?；膛瞿膛＞G膿桿菌的分離鑒定及藥物敏感性分析[J]. 黑龍江畜牧獸醫，2019（5）：98-100.

[3]美國臨床和實驗室標準化委員會. 抗微生物藥物敏感性試驗執行標準：第14版信息增刊M100-S14[S]. 2004.

[4]陸承平. 動物微生物學[M]. 5版.北京：中國農業出版社，2012.

[5]周庭銀. 臨床微生物學診斷與圖解[M]. 2版.上海：上海科學技術出版社，2007.

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[8]鄭立棟，孫紅祥，季君策，等. 母豬子宮內膜炎病原檢測與藥敏試驗[J]. 養豬，2001（2）：40-41.