動物膽汁及膽汁酸的合成、測定及藥理作用的研究進展

王鑫 陳曉 時海波 楊恒 張新笑 徐為民 鄒燁 王道營 苗穎

摘要：動物膽汁作為藥物使用已有幾千年的歷史，伴隨科學技術的進步，動物膽汁中活性成分膽汁酸的研究也逐步深入，本文介紹了不同動物膽汁的主要膽汁酸成分，尤其是鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸及其藥理作用。就膽汁酸的分離提純方法、理化性質及測定方法展開討論，并對鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸的藥理作用展開綜述。

關鍵詞：膽汁酸;鵝去氧膽酸;熊去氧膽酸;制備與提純;藥理作用

中圖分類號： R284;R285文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）18-0036-08

收稿日期：2019-09-06

基金項目：國家現代農業（肉雞）產業技術體系建設專項（編號：CARS-41）;國家自然科學基金（編號：31901612）;江蘇省農業科技自主創新資金[編號：CX（18）1006];江蘇省自然科學基金（編號：BK20180300）。

作者簡介：王?鑫（1994—），男，江蘇南通人，碩士研究生，研究方向為動物源副產物綜合利用及高值化開發。E-mail：937411786@qq.com。

通信作者：鄒?燁，博士，副研究員，研究方向為動物源副產物綜合利用及高值化開發。E-mail：zouye@jaas.ac.cn。

膽汁味苦黏稠，pH值約為7.4，具有明目、消腫、清熱解毒等功效[1]。動物膽汁作為藥物使用已有數千年，《中華本草》和《本草綱目》中都記錄了幾十種動物膽汁，包含畜類動物豬、牛、羊，禽類動物雞，及其他動物如熊、蛇、兔等的膽汁。不同動物的膽汁化學成分不同，其主要成分是50%～70%的膽汁酸，除膽汁酸外還含有一些膽色素、脂類、黏蛋白、無機物、氨基酸、常量元素及微量元素。膽汁的主要生理功能來自于膽汁酸，為了更好地利用動物膽汁的藥用價值，國內外研究者對其化學成分及藥理作用做了大量的研究[2]。近年來膽汁酸被充分應用于醫療食品等行業，消費者對膽汁酸制品的需求也越來越大。因此，動物膽汁酸的分離提純方法及藥理作用的研究就顯得格外重要，如何高效廉價地得到動物膽汁酸也是相關科研人員一直研究的問題。

1?動物膽汁研究

膽汁在傳統中醫藥的應用有很長的歷史，其主要應用于預防疾病。研究人員為了充分利用現有的動物膽汁資源，對不同動物膽汁中的膽汁酸和膽紅素等物質進行化學分析，相關科研人員對于膽汁的藥理活性研究也在逐步加深。

目前對于禽類動物膽汁研究最為廣泛的是雞膽汁。雞膽汁呈墨綠色，有一定的黏性，能夠溶于水。臨床上雞膽汁具有瀉肺火利肺氣、清熱解毒明目、溶解膽結石、促進消化吸收的功能，也可用于治療瘧疾、百日咳。雞膽汁的主要成分為膽汁酸（膽酸、去氧膽酸、鵝去氧膽酸等），另外雞膽汁中還含有鉀、鈉、鈣、鎂等金屬元素，以及一些氨基酸[3]。

畜類動物膽汁中對豬膽、羊膽、牛膽研究較多。豬膽是豬科動物的膽汁，豬膽汁性苦味寒，具有止咳平喘、清肝膽熱、通便解毒的功能，通常用于導腸通便，清肝明目[4]。以豬膽汁作為原料經過干燥等加工過程而生產的豬膽粉的主要成分是豬去氧膽酸。羊膽汁是綿羊或者山羊的膽汁，具有清肝明目、清熱解毒、潤肺抗菌的作用。現代化學分析表明，羊膽汁中含有膽酸鹽、水分、色素、無機鹽、蛋白質等[5]。現代醫學通常將羊膽汁臨床應用于抗炎、抑菌、治療肺結核，也用于治療喉頭紅腫、肝熱目赤、黃疸等疾病。牛膽汁是常見牛科動物水牛或者黃牛的膽汁。它具有解毒消腫、利膽通腸、清肝明目的作用，臨床應用于治療消化不良及便秘，促進脂肪消化，鎮靜或麻醉中樞神經系統、呼吸系統和循環系統。經過研究發現，水分、色素、無機鹽、膽固醇、脂肪和膽酸鹽是牛膽汁的主要成分[6]。

文獻表明，科研人員對熊、蛇、兔等其他動物的膽汁也有相關的研究。熊膽汁是除了畜類、禽類膽汁外被科研人員研究最多的膽汁，是熊科動物黑熊或棕熊的膽汁。熊膽作為藥源最早記錄于唐朝的《新修本草》中，是我國四大珍稀動物藥材之首。經過研究發現，熊膽汁中主要有效成分是熊去氧膽酸，此外熊膽汁中還含有膽酸、鵝去氧膽酸、膽固醇、膽紅素和許多無機鹽離子[7]。蛇膽汁的主要成分是膽汁酸、膽色素、膽固醇、氨基酸、無機鹽和磷等。根據研究發現，蛇膽的多種藥理效應和生理功能來源于膽汁酸，牛磺膽酸是大多數蛇膽的主要成分[8]。近年來，我國兔子養殖行業發展迅速，產生了大量的兔膽汁。這些兔膽資源通常作為廢料被丟棄從而造成巨大的浪費，同時對環境造成了一定的污染，為了實現資源的有效利用，降低對環境的污染，許多研究人員將注意力轉向兔膽汁的利用與開發。經研究表明，兔膽汁的主要成分為膽酸、去氧膽酸、鵝去氧膽酸、膽色素等[9]。

2?膽汁酸研究

膽汁酸的結構是以膽烷酸為母核，根據膽烷酸取代基位置和數目的不同構成了不同結構的膽汁酸[10]。膽汁酸對動物的代謝有很大作用[11]，在動物體內通常以鈉鹽或者鉀鹽的形式存在，按其結構可以分為兩大類：游離型膽汁酸和結合型膽汁酸[12]。結合型膽汁酸的形成是由于氨基化合物與膽酸結合在一起，主要是甘氨酸（Gly）和牛磺酸（Tau）與游離型膽汁酸結合而形成的。而根據來源的不同膽汁酸又可以分為初級膽汁酸、次級膽汁酸和三級膽汁酸。初級膽汁酸（primary bile acid）由膽固醇直接合成，包含膽酸、鵝去氧膽酸以及相應的結合型膽汁酸;次級膽汁酸（secondary bile acids）是初級膽汁酸經過腸道菌酶的催化，脫去羥基轉化而成，次級膽汁酸包括去氧膽酸和石膽酸;三級膽汁酸（tertiary bile acid）是次級膽汁酸經過肝臟和腸道的重吸收作用后所得的產物，熊去氧膽酸就是典型的三級膽汁酸。膽汁酸的結構通式見圖1、表1。膽汁酸有很多種，其中較為重要的是膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸等。在動物膽汁中，鵝去氧膽酸通常不以游離態存在，而是與牛磺酸和甘氨酸形成結合物而存在。當人或動物的肝發生病變時，體內以結合態存在的鵝去氧膽酸會轉化為游離態[13]。大多數動物膽汁內都不含有熊去氧膽酸，但其良好的生物活性及藥理作用吸引了眾多研究者的關注。下面著重介紹一下鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸的研究進展。

2.1?鵝去氧膽酸

2.1.1?鵝去氧膽酸的理化性質

鵝去氧膽酸，化學名為3α，7α-二羥基-5-β-膽烷酸，分子式 C24H40O4，其結構見圖2。鵝去氧膽酸的分子量為 392.56，味苦，無臭，呈白色針狀結晶，屬于酸性化合物。鵝去氧膽酸幾乎不溶于水、石油醚和苯等，微溶于三氯甲烷，易溶于甲醇、乙醇、冰乙酸，熔點為 167～171 ℃，比旋光度為10°～13°，是大多數動物膽汁的主要膽汁酸。鵝去氧膽酸是一種甾體化合物，包含一個剛性的甾環和一個5碳的脂肪側鏈，共24個碳原子，順式稠合甾核的A環和B環而形成一個凹腔，位于3位和7位上的一個α羥基都指向凹面，與側鏈上的羥基組合形成α面，從而表現出親水性;而3個疏水的甲基則指向另一面，形成了憎水的β面，由此產生了水/脂雙親特性[14]。

2.1.2?鵝去氧膽酸的制備與提純

目前市場上的鵝去氧膽酸來源有以下2種，一是從動物膽汁中提取，二是化學合成。可用于直接提取鵝去氧膽酸的動物膽汁有豬膽汁、雞膽汁和鴨膽汁，但絕大部分從動物膽汁中提取的鵝去氧膽酸都是以雞膽汁為原料[15]。提取方法主要是樹脂法、超臨界萃取法、有機溶劑提取法和沉淀法。化學合成法通常以膽酸、去氧膽酸和豬去氧膽酸為原料。

樹脂法是一種利用大孔樹脂來提取鵝去氧膽酸的方法。Wan等通過使用大孔樹脂吸附層析法分離純化出鵝去氧膽酸，首先將鴨膽汁用氫氧化鈉皂化，再加入氯化鈣使膽汁中的鵝去氧膽酸形成鵝去氧膽酸的鈣鹽，使用碳酸鈉沉淀鈣離子，得到了游離的鵝去氧膽酸[15]。通過大孔樹脂HZ-802純化，用50%和60%的乙醇梯度洗脫，最終得到了純度為99%、熔點為160～170 ℃的鵝去氧膽酸。該方法因為具有經濟環保等優點已經用于工業化生產。席曉志等使用價格便宜、能重復利用且對鵝去氧膽酸有強吸附力的大孔樹脂D101優化了鵝去氧膽酸的提取和純化工藝，使用活性炭將鵝去氧膽酸粗提物回流脫色2 h，45%乙醇溶解上樣，用55%和75%的乙醇洗脫得到鵝去氧膽酸[16]。

超臨界萃取是一種新技術，因它具有選擇性好、清潔、高效等優點而被使用到鵝去氧膽酸的提取分離。該方法不但有效地保存了原料中的活性成分，且綠色環保無污染[17]。由于超臨界萃取法提取鵝去氧膽酸全程不適用有機溶劑，因此得到的鵝去氧膽酸不會產生有機溶劑的殘留，防止了提取過程中對人體有害物質的滯留和對環境的污染。Scalia等以牛膽汁為原料，利用超臨界CO2萃取技術，增加了去氧膽酸的溶解性，去除了脂肪酸膽固醇等雜質，實現了膽汁酸的提取和分離[18]。

有機溶劑提取法獲得鵝去氧膽酸的原理是使用活性炭脫色，再用有機溶劑加熱提取，再經過濾得到鵝去氧膽酸。我國研究人員曾利用乙醇作為有機溶劑，后有研究者開始使用三氯甲烷。馮娜使用鴨膽膏為原料，使用乙酸乙酯作為提取溶劑，溫度為78 ℃，濃縮固液比為3.5，時間為1 h，獲得了提取率為80.2%的鵝去氧膽酸[19]。此方法工藝簡單，制取時間短，但試驗過程中會使用大量有機溶劑，成本較高且會造成一定的環境污染。若使用有機溶劑循環應用技術則能在一定程度上降低生產成本以滿足工業化生產的需要。

沉淀法提取鵝去氧膽酸的原理是利用其與金屬陽離子相結合會形成沉淀，通常是鈣鹽或鋇鹽。但鋇鹽含有毒性對人體有害，不利于工業化生產，因此使用氯化鈣代替氯化鋇。曹榮安等用氯化鈣提取法從豬膽汁中提取了鵝去氧膽酸，為動物膽汁的提取純化及加工生產開辟了一條切實可行的新途徑[20]。Hu等用鴨膽膏來代替傳統方法的雞膽汁為原料，研究了鈣鹽法提取鵝去氧膽酸的新工藝，采用正交試驗確定了每100 g鴨膽膏配以甲醇 1 000 mL，20%氯化鈣500 mL，過氧化氫520 mL，60%冰乙酸600 mL的最佳提取條件，所得鵝去氧膽酸的收率為30%[21]。該工藝簡單，適合工業化生產，能提高畜禽副產品的利用率。

化學合成鵝去氧膽酸通常是利用還原12位羰基或C11烯烴加氫的方法制備鵝去氧膽酸。以膽酸甲酯為原料，通過Fieser法氧化為羰基化合物，再與對甲苯磺酰肼反應后用NaBH4還原水解后得到鵝去氧膽酸。張飛等利用豬去氧膽酸為原料，經甲酯化、消去、Oppenauer氧化、6，7位脫氫、環氧化、催化氫化、3位選擇性還原等反應得到鵝去氧膽酸，總產率26%，有較高的應用價值[22]。

樹脂法、超臨界萃取、有機溶劑萃取、沉淀法等直接從動物膽汁中提取鵝去氧膽酸的方法使得鵝去氧膽酸制備方法更加多樣。有機溶劑提取法和沉淀法在生產過程中可能會產生毒性物質而對于環境產生污染，也會造成生產成本的提高，如需工業化生產，須要進一步研究。而超臨界萃取和樹脂法具有經濟、高效、環保的優點，更適用于工業化生產。化學合成法的發明解決了動物的膽汁來源有限、難以滿足醫療需求的問題，應用價值較高。

2.2?熊去氧膽酸

2.2.1?熊去氧膽酸的理化性質

熊去氧膽酸，化學名3α，7β-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，分子式C24H40O4，分子量392.57，是鵝去氧膽酸的同分異構體，其結構見圖3。熊去氧膽酸呈白色粉末，味苦、無臭，不溶于水、三氯甲烷，易溶于冰乙酸、乙醇、氫氧化鈉等。熔點為200～201 ℃，比旋光度為59～62°。熊去氧膽酸的主要特征在3位α羥基、5位β氫和7位β羥基，其中7位β羥基是區分熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸的唯一特征。

2.2.2?熊去氧膽酸的制備與提純

熊去氧膽酸的制備方法有3種：從熊膽汁中提取、化學合成和生物轉化法[23]。最初，我國制備熊去氧膽酸的途徑是從黑熊的膽汁中分離出熊去氧膽酸，主要是人工養殖的黑熊，利用活熊膽汁引流法，現已使用無管引流。但是此方法步驟繁雜，制備周期長且來源有限，無法滿足工業生產的需要，而且熊是國家二級保護動物，不利于野生珍稀動物物種的延續。所以現研究人員已把目光轉向化學合成和生物轉化法。

化學合成法是現在工業生產鵝去氧膽酸的主要方式，通常以膽酸、豬膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸和一些非膽酸類甾體化合物為原料。Ferrari等將膽酸甲酯化乙酰化3位和7位羥基后得到3α，7α- 二乙酰-12α-羥基膽酸甲酯、氧化12位羥基還原酮基，水解3，7，24位酯基得到鵝去氧膽酸，再氧化7位羥基還原7位酮基得到了熊去氧膽酸[24]。He等以廉價易得的膽酸為原料合成熊去氧膽酸，同時研究了甲磺酸酯類化合物的關鍵消元反應條件，確定了最佳溶劑、堿和反應溫度。豬去氧膽酸具有價格便宜、來源廣泛等優點，具備很大的研發前景[25]。王鐘麟等使用豬膽汁中的豬膽酸為原料，經過甲酯化反應、3，6，7位羥基三乙酰化反應、選擇性水解、Jones氧化、碳酸氫鈉水解得到 6α- 羥基-3，7-二酮基-5β膽酸烷甲酯，再經甲磺酰氯反應、碘化鈉-鋅粉還原、鋰-液氨得到了熊去氧膽酸[26]。豬去氧膽酸與熊去氧膽酸的差異僅在6，7位羥基，且豬去氧膽酸廉價易得，因此竇倩等以豬去氧膽酸為原料，經過酯化反應、選擇性氧化、環氧化和脫保護等過程，以夏皮羅（Shapiro）反應為關鍵步驟合成了熊去氧膽酸，產率為258%[27]。然后又對該方法進行優化，使用硅基保護、Rubuttom氧化、Clemmensen還原縮短了反應過程，最終產率288%。鵝去氧膽酸也是化學法合成熊去氧膽酸的重要原料，盧茂芳等利用鵝去氧膽酸，經過氧化和還原反應得到了熊去氧膽酸，并對其工藝進行改進，在氧化過程以N-溴琥珀酰亞胺（NBS）為氧化劑使用次氯酸鈉代替Jounes試劑后減少了毒性，簡化了后處理且提高了熊去氧膽酸的收率[28]。除了膽酸類物質，一些非膽酸類甾體化合物也能夠合成熊去氧膽酸，韓興春等以黃酮體為原料，經過乙酰化反應、NBS加溴并消除得到6，7位脫氫物，再以單過氧鄰苯二甲酸氧化雙鍵環、鈀碳催化加氫、硼氫化鈉還原、Wittig反應、二氧化鉑催化加氫7步反應合成鵝去氧膽酸區，再經氧化和還原反應合成了熊去氧膽酸[29]。

近年來，利用生物轉化法合成熊去氧膽酸的報道越來越多。酶法和微生物發酵等方法均可用于熊去氧膽酸的制備。隨著固定化細胞技術的發展，研究人員開始將生物法制備熊去氧膽酸的研究方向從單酶系統轉向多酶系統。伴隨著帶有輔酶的多酶系統細胞包埋技術的突破，使固定化細胞合成熊去氧膽酸的設想成為可能。來自梭狀芽孢桿菌的7α羥基類固醇脫氫酶（7α-HSDHs）、7β羥基固醇脫氫酶（7β-HSDHs）、12α羥基類固醇脫氫酶（12α-HSDH）等脫氫酶能夠參與到鵝去氧膽酸的酶法合成中，有報道首次利用Clostridium absonum固定化細胞得到了熊去氧膽酸，膽酸轉化率不高[30-31]。到目前為止，微生物或酶法合成熊去氧膽酸的工藝還不成熟，生產成本高，還未能實現工業化生產。

這3種制備方法，從熊膽汁中提取熊去氧膽酸來源稀少，難以滿足市場的需求且有違對動物的保護，逐漸被淘汰。化學合成法主要以動物膽酸為原料，但這些方法中存在著反應試劑昂貴、操作不便、分離困難、步驟多及收率較低等問題，今后應該著重研究使用廉價易得的動物膽酸為原料，步驟簡單、收率高的合成路線。生物轉化法的發展，使得許多研究人員把它和化學合成法相結合，目前有把酶法、微生物發酵法與化學合成法結合的趨勢。

3?膽汁酸物性的測定方法

膽汁酸常用的測定方法有紫外可見分光光度法（UV-vis）、紅外光譜法（IR）、薄層色譜法（TLC）、核磁共振氫譜（1HNMR）、高效液相色譜（HPLC）、質譜法（MS）等[32]。

3.1?紫外分光光度法

用UV-vis測定膽汁酸，該方法儀器使用簡單、成本較低、操作簡便，但樣品處理時間較長。劉永貴等使用UV-vis法在605 nm處測定蛇膽中膽酸的含量，并且以此作為判斷蛇膽品質的優劣指標，此方法簡便有效[33]。趙啟苗等用UV-vis法，以膽南星中的鵝去氧膽酸為指標，檢測波長379 nm，建立了膽南星總膽酸含量的測定方法。此方法操作簡便、重復性好、準確度高，適用于評價膽南星的質量[34]。

3.2?紅外光譜法

紅外光譜法是一種快速無損檢測技術，但是定量分析有較大誤差。李文龍等利用近紅外漫反射光譜分析了熊膽粉的提取物，比較不同光譜的預處理對建模結果的影響，確定了模型所用的最佳潛變量個數[35]。用此方法建立了鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸含量的定量校正模型，通過此模型可以對熊膽粉提取物進行快速準確的定性定量分析。Li等利用近紅外光譜建立了一種熊膽粉水解過程的監測方法，在水解過程中使用近紅外光譜儀對樣品進行采集和測定，建立了TUDCA、TCDCA、UDCA、CDCA的定量校準模型，可快速測定新批次的樣品[36]。此方法大大減少了樣品分析的工作量，能快速分析出結果，有利于對熊膽粉水解過程的理解與控制。

3.3?薄層色譜法

TLC能檢測膽汁酸的含量及鑒別雜質，佟愛東等使用TLC法建立熊去氧膽酸相關物質檢查方法[37]。此方法能較好地分離鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸，熊去氧膽酸可能含有的各種相關物質的斑點清晰可見，適用于熊去氧膽酸的質量控制。陳蓉等將甲醇作為提取溶劑，用硅膠高效薄層板（G）、顯色劑10%硫酸乙醇溶液、展開劑異辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（體積比15 ∶7 ∶6），于460 nm處進行薄層定量掃描，建立了同時測定珠黃散中膽酸、去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸含量的方法。此方法重復性好、專屬性強、測定結果精確[38]。范艷美等運用TLC法對從豬膽粉中提取的豬去氧膽酸進行薄層分析，確定了提取物中含有豬去氧膽酸，此方法準確有效，重復性好[39]。

3.4?核磁共振氫譜

1HNMR可以識別出參與分子間相互作用的特定質子，此方法具有無損性，不會破壞樣品的性質和結構，試驗方法多樣，適合研究樣品中的復雜成分。Matsuok等利用核磁共振氫譜從分子間相互作用的角度對牛磺脫氧膽酸鈉（NaTDC）、牛磺熊脫氧膽酸鈉（NaTUDC）、牛磺鵝膽酸鈉（NaTCDC）、牛磺膽酸鈉（NaTC）4種膽汁酸鹽形成的膠束進行了比較和測定，研究表明NaTC和其他3種膽汁酸鹽不同，其膠束在溶液中仍然是小的初級結構[40]。劉雙等用核磁共振氫譜圖測定了由豬去氧膽酸合成的異熊去氧膽酸結構，確定了所合成化合物的結構與異熊去氧膽酸結構一致[41]。

3.5?質譜與高效液相色譜

MS被廣泛應用于復雜組分的分離與鑒定，有很高的靈敏度，是生物樣品研究的有效工具。HPLC具有強大的分離能力，因分離效率高時間短、柱效高、檢測靈敏度短、流動相可控等優點而被廣泛應用于物質含量的測定。Mostafa等用高效液相色譜法同時測定熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸混合物及片劑中熊去氧膽酸的含量[42]。Wang等用高效液相色譜法對7種膽汁酸樣品和膽汁酸進行化學成分分析及體外細胞毒性的測定，證明了牛膽汁可能是肝癌治療中熊膽的潛在替代品[43]。高旭等采用HPLC-MS/MS法同時測定了牛黃提取物及不同來源所得牛黃提取物中的膽酸、甘氨膽酸、甘氨石膽酸、石膽酸、牛磺脫氧膽酸鈉5種膽酸的含量，比較了不同提取方法對這5種膽汁酸含量的影響[44]。

除上述方法外，還有光學顯微鏡、掃描電鏡、熔點測定等用于測定膽汁酸。

4?藥理作用及臨床應用

4.1?鵝去氧膽酸的藥理作用及臨床應用

鵝去氧膽酸在各種不同動物的膽汁中廣泛存在，是雞、鴨、鵝等家禽膽汁的主要成分。鵝去氧膽酸能抑制3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-COA）還原酶的活性，擴大膽汁酸池以便于膽固醇通過微膠粒狀態溶解，減少膽固醇的合成，抑制膽固醇的排泄和降低小腸中膽固醇的重吸收作用而達到溶解膽固醇型結石的功效[45]。魏松以100位膽結石患者為研究對象，對觀察組病患的常規治療藥物搭配鵝去氧膽酸治療，觀察對照組及觀察組B超結果的變化及臨床反應，結果發現搭配鵝去氧膽酸治療的觀察組的總治療率為92.0%，顯著高于僅用常規藥物治療的對照組[46]。

鵝去氧膽酸能夠減少全身血液和組織中的NO含量，抑制炎癥的加劇。NO會導致毛細血管的擴張，使滲透性增加，從而導致炎癥。鵝去氧膽酸可增加小鼠皮膚毛細血管通透性、對小鼠耳殼炎癥和甲醛性足腫脹等表現出了很好的抗炎作用，鵝去氧膽酸能夠抑制絕大多數急慢性炎癥。

鵝去氧膽酸也能夠增加器官組織中環磷酸腺苷（cAMP）的含量，松弛氣管平滑肌，擴張支氣管，從而達到鎮咳、平喘、祛痰的作用。趙紅霞按 0.15 g/kg 和0.225 g/kg的劑量對小鼠進行灌胃，利用競爭性蛋白質結合分析法進行檢測，灌胃給藥鵝去氧膽酸后的小鼠器官組織中的cAMP含量顯著提高，產生了極顯著的鎮咳、平喘、祛痰的作用[47]。

鵝去氧膽酸對革蘭氏陽性菌有明顯的抑菌作用，但對格蘭氏陰性菌抑菌效果不明顯。錢桂敏等構建了膽道內源膽汁酸缺乏的大鼠模型，給模型大鼠灌服鵝去氧膽酸，發現鵝去氧膽酸能顯著降低腸道內芽孢桿菌屬、丹毒菌屬及紅椿菌屬的含量[48]。Shi等研究了鵝去氧膽酸對大腸桿菌的殺滅效果，培養3個月的處理組相比對照組有很好的抑制效果，表明鵝去氧膽酸能夠很好地抑制大腸桿菌活性[49]。經研究，鵝去氧膽酸還可以顯著增加熱應激小鼠肝臟的抗氧化能力，緩解熱應激小鼠的肝臟氧化損傷[50]。

目前鵝去氧膽酸的應用主要集中在溶解膽固醇型結石上，對其分子水平的研究及其他藥效的應用較少[51]。目前為止，關于鵝去氧膽酸作用機理的研究還不多，須要相關科研人員進一步研究。

4.2?熊去氧膽酸的藥理作用及臨床應用

熊去氧膽酸能增加膽汁酸的分泌，促進肝腸循環[52]，改變膽汁的成分，降低膽汁中膽固醇酯及膽固醇的含量，使結石中的膽固醇逐漸溶解，因此醫學上用熊去氧膽酸來溶解膽結石中的膽固醇，預防肝硬化。劉彤等以2014—2017年的243例膽囊結石病患為樣本，按數字隨機表分為對照組和觀察組，對觀察組的病人除給予常規治療外口服熊去氧膽酸膠囊。結果表明，觀察組92.62%的總有效率明顯高于對照組的81.82%[53]。因此，熊去氧膽酸能有效緩解膽固醇型結石的癥狀，縮小結石的直徑。

熊去氧膽酸還能激活蛋白激酶C和鈣離子形成的信號網絡以及有分裂活性的蛋白激酶，以此來增強膽汁淤積于肝細胞時的分泌能力，降低血液和肝細胞中內源性疏水膽酸的濃度，防止膽汁在肝膽淤積。張瑩等利用熊去氧膽酸對重度妊娠期肝內膽汁淤積患者進行治療，顯著改善了患者肝功能及膽汁淤積所致的臨床癥狀[54]。

體外研究表明，熊去氧膽酸能夠顯著減弱乙醇對肝細胞的毒性，且能夠改善非乙醇性肝病的患者的血清指標[55]。熊去氧膽酸是一種無毒的親水性膽汁酸，能通過競爭性抑制的方式減少回腸內毒性內源性膽酸的吸收。熊去氧膽酸還能通過競爭方式取代細胞器和細胞膜上的毒性膽酸分子，防止膽管和肝細胞受到毒性膽酸的損害。

熊去氧膽酸因其藥理作用被廣泛應用于原發性膽汁肝硬化（PBC）、膽囊纖維化肝病（CF）、妊娠期肝內膽汁淤積癥（ICP）、原發性硬化性膽囊炎（PSC）及非乙醇性脂肪肝（NAFLD）等疾病，有極高的臨床使用價值。

5?結束語

膽汁酸因其良好的生理活性越來越受到人們的關注，鵝去氧膽酸和熊去氧膽酸因其溶解膽結石、保護肝臟、止咳平喘、消炎抗菌等功效被廣泛應用于醫療食品等工業。然而還有一些問題尚未解決，目前的研究主要集中在膽汁酸制備提純技術的優化上，膽汁酸的微生物合成方法技術還不成熟，如需工業化生產需降低成本，如何以廉價易得的原料制得膽汁酸需要相關研究人員進一步研究。紫外分光光度法、薄層色譜法、紅外光譜法、核磁共振氫譜、高效液相色譜和質譜等均可用于膽汁酸物性的測定，應根據樣品的實際情況選擇合適的測定方法。伴隨著新技術的不斷突破，相信會有更多的新技術應用于膽汁酸的定性定量測量，為膽汁酸的研究提供技術支撐。

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