對生活飲用水中總大腸菌群三種檢測方法對比研究

劉麗敏

(黑龍江省第六地質勘查院實驗室，黑龍江 佳木斯 154000)

近些年，水資源污染問題成為社會各界關注的焦點，尤其是生活飲用水質量直接關系著人體健康，備受人們重視。總大腸菌群檢測是評價生活飲用水衛生質量的重要指標之一，所以切實做好總大腸菌群的檢測工作具有重要的現實意義。

1 檢測材料

為了更好地剖析常見的三種總大腸菌群檢測方法的優缺點，使其得到更為有效的應用，隨機選取120份生活飲用水，其中包括40份自來水、40份深井水、40份二次供水，并嚴格按照國標規范的相關要求進行操作，使其成為本次實驗的檢測樣品。

在檢測試劑與材料的選擇上，主要包括0.85%的生理鹽水、單料乳糖蛋白胨培養液、腦心浸出液、煌綠乳糖膽鹽培養液、營養瓊脂培養液、品紅亞硫酸鈉培養基、伊紅美藍瓊脂培養基、雙料乳糖蛋白胨培養液、革蘭染色液、恒溫培養箱、水過濾裝置、生物顯微鏡、一次性膜杯套裝。

2 三種檢測方法

第一，多管發酵法。根據在適宜的溫度下大腸菌群能夠發酵乳糖、產酸產氣的基本原理，實驗過程中將無菌取出的10 mL水樣加至10 mL的雙料乳糖蛋白胨培養液中，再將無菌取出的1 mL水樣以及按照1∶10比例稀釋的稀釋液1 mL加至10 mL單料乳糖蛋白胨的培養液中，每一稀釋度都要進行接種，總計接種5管即可。將所有的培養管放入培養箱24 h，培養箱的溫度控制在37℃。若24 h以后培養管沒有出現產酸產氣現象，則可以報告總大腸菌群陰性，若發生了產酸產氣現象，則繼續按照步驟予以實驗。即：將發生變化的培養管分別置于伊紅美蘭培養基上進行接種，觀察菌落的實際形態，培養時間為24 h，培養箱的溫度不變。24 h后要對可疑的菌落進行革蘭氏染色、鏡檢及證實實驗，經過染色鏡檢結果為革蘭陰性無芽孢桿菌的，需要再加至乳糖蛋白胨的培養管中進行接種，培養24 h后，產酸產氣則可以證實其存在總大腸菌群。

第二，煌綠乳糖膽鹽培養液法。實驗過程中，將無菌取出的10 mL水樣加至10 mL的雙料乳糖蛋白胨培養液中。將無菌取出的水樣1 mL以及按照1∶10比例稀釋的稀釋液1 mL加至10 mL單料乳糖蛋白胨的培養液中，每一稀釋度都要進行接種，總計接種5管即可。將所有的培養管均放入培養箱中24 h，培養箱溫度控制在37℃。若24 h后培養管沒有出現產酸產氣現象，則可以報告總大腸菌群陰性，若發生了產酸產氣現象，則繼續按照步驟予以實驗。即：將發生變化的培養管在煌綠乳糖膽鹽培養液中接種24 h，培養箱的溫度不變。24 h后，培養管若產酸產氣，那么則可以證實其存在總大腸菌群。

第三，濾膜法。實驗過程中，將無菌取出的100 mL無菌水樣置于孔徑為0.45 μm的濾膜上進行過濾，借助無菌鑷子將細菌面朝上的濾膜轉移到品紅亞硫酸鈉平板上，并確保其完全貼合于培養基上，將平皿倒置，于培養箱中培養24 h，培養箱溫度控制在37℃。24 h后對可疑的菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，經過染色鏡檢結果為革蘭陰性無芽孢桿菌的，需要在乳糖蛋白胨的培養管中進行接種，培養24 h以后，產酸產氣則可以證實其存在總大腸菌群。

3 實驗結果

在統計學處理上，實驗利用SPSS 18.0統計學軟件，用%來表示計數資料，χ2檢驗，P<0.05則差異具有統計學意義。

在生活飲用水總大腸菌群檢測過程中使用多管發酵法、煌綠乳糖膽鹽培養液法及濾膜法，分別檢測120份無菌取出的水樣，其中多管發酵法與煌綠乳糖膽鹽培養液法得到了相同的陽性率。對三種檢測方法得到的陽性率進行比較，P>0.05，差異不具備統計學意義，如表1所示。但是，從實際的檢驗時間上來看，煌綠乳糖膽鹽培養液法所用的時間最少，檢測時間明顯縮短了24 h。

表1 三種檢測方法檢測生活飲用水總大腸菌群的結果Tab.1 Results of three testing methods in testing total coliform group in domestic drinking water

而在不同水樣的總大腸菌群檢測上，利用三種檢測方法得出的結果如表2所示。其中，在自來水的檢測上使用濾膜法得到的陽性率要明顯高于其他兩種檢測方法，但是在三種檢測方法的陽性率比較上，P>0.05，差異仍不具備統計學意義。

表2 三種檢測方法檢測不同水樣總大腸菌群的結果Tab.2 Results of three testing methods in testing total coliform group in different water samples

4 結論

多管發酵法的最大優勢在于實驗成本相對較低，對檢測設備沒有較高的要求，且對操作人員本身的專業素養要求較低，只要經過微生物學的基本培訓即可開展操作，可以用于濁度相對較大的水樣檢測中。但是多管發酵法的實驗周期較長，檢驗工作量較大，需要通過MPN表檢索、計算，方可得到實驗結果。若總大腸桿菌的實際數量相對較少，那么很有可能造成漏檢問題，精確性一般，在自來水的檢測上不太適用。

煌綠乳糖膽鹽培養液法的優勢在于檢測范圍較大，實驗周期較短，操作較為簡單，可對大量的樣本進行批量快速檢測，缺點是實驗成本偏高。

濾膜法適合應用在自來水等相對濁度較低的水樣中進行檢測，其最大優勢是可定量計算，能夠對大批量的樣品實施檢測。缺點是實驗過程中必須要具備抽濾設備，且操作人員必須在無菌環境下開展作業，對于那些容易造成濾孔堵塞、濁度雜質較大的水樣不適用，所獲得的結果也極易受到非大腸菌群細菌的影響，所以檢測結果需要進一步確定。確認結果通常需要2～3 d，不適合應用于突發性的公共衛生事件。

可見，深井水等濁度較高的水樣中適用多管發酵法與煌綠乳糖膽鹽培養液法，自來水等濁度較低的水樣則適用濾膜法。煌綠乳糖膽鹽培養液法更適合應用于突發公共衛生事件。為了最大限度保證總大腸菌群的準確性，還應該結合水樣的實際情況，選擇最為適宜的檢測方法。