2019年新疆部分地區(qū)規(guī)模化豬場豬瘟病毒抗體檢測與分析

張家瑞，阿麗亞·買買提依明，屈勇剛，谷思穎，魏 其，吳圓圓，李 靜，常軍帥，李 巖

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.新疆石河子市石河子鎮(zhèn)農(nóng)林牧辦，石河子 832000；3.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團畜牧獸醫(yī)工作總站，烏魯木齊 830063）

豬瘟（CSF）是家豬和野豬最具破壞性的病毒性傳染病之一，在世界范圍內(nèi)具有重大的經(jīng)濟和社會影響，豬瘟也在世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須上報動物疫病之列[1]。CSF在我國也屬于一類動物傳染病，當(dāng)前豬瘟疫情多呈現(xiàn)散發(fā)且缺乏一定的規(guī)律性。CSF隱蔽性強，導(dǎo)致飼養(yǎng)主和衛(wèi)生防疫部門在日常生產(chǎn)中不能及時發(fā)現(xiàn)疫情，再加上對于預(yù)防豬瘟疫情的忽視，最終將會因暴發(fā)豬瘟疫情而持續(xù)影響經(jīng)濟效益[2]。自新疆開始將豬瘟納入強制免疫計劃中以來，暴發(fā)性豬瘟疫情已經(jīng)基本得到控制，但依然會存在免疫效果不佳等因素，所導(dǎo)致潛伏感染型非典型豬瘟的長期存在，嚴重影響了新疆當(dāng)?shù)仞B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[3]。疫苗免疫依然是預(yù)防豬瘟的重要手段，抗體檢測可以為控制當(dāng)?shù)匾卟×餍刑峁﹨⒖肌Ｊ关i群長期保持較高的群體免疫水平，是一種規(guī)模化豬場防控潛伏感染型CSF的有效措施[4]。為了解2019年全年新疆部分地區(qū)CSF的免疫抗體水平，本試驗選擇巴州、伊犁、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子6個地區(qū)的6個規(guī)模化豬場進行分析，以期為新疆地區(qū)豬瘟防疫工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

樣品是從2019年1月至2020年1月分批次采自新疆巴州、伊犁、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子6個地區(qū)，共594份血清樣品。其中，哺乳仔豬血清81份，保育豬血清49份，后備豬血清63份，肥育豬血清35份，經(jīng)產(chǎn)母豬血清279份，種公豬血清87份，共594份血清樣品。

1.2 診斷試劑盒和儀器

診斷用豬瘟病毒（CSFV）ELISA抗體檢測試劑盒（北京愛德士元亨生物科技有限公司），自動酶標儀（美國BioTek公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 采集樣品 選擇有代表性的規(guī)模化豬場，按照3～5 mL/頭的標準，一次性從豬前腔靜脈進行血液采集，經(jīng)無菌保存至石河子大學(xué)實驗室待處理，隨后經(jīng)過30 min左右的室溫靜置，待血清析出后，逐管吸取1 mL血清于滅菌的1.5 mL EP管中，分組編碼標記，以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，直接進行ELISA檢測，也可保存于-20℃條件下備用。

1.3.2 間接ELISA檢測法 按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書進行操作。按要求取出CSFV抗原包被板，不做任何前期處理，直接在包被板中將樣品血清、陽性對照、陰性對照與稀釋液按照50 μL樣品血清或?qū)φ赵噭┘?0 μL稀釋液進行1∶1比例稀釋，混勻后置于恒溫保濕條件下進行2 h孵育，經(jīng)過3次洗滌后加入酶標抗體（抗CSFV辣根過氧化物酶標記物），置于恒溫保濕條件下進行30 min孵育，再次洗滌3次后加入TMB底物溶液，置于恒溫保濕的避光條件下放置10 min（第1孔開始反應(yīng)即可計時），加入終止液終止反應(yīng)并在10 min內(nèi)用酶標儀以450 nm波長測定各反應(yīng)孔中的OD450值，據(jù)OD450值對抗體水平進行判定。

1.3.3 結(jié)果判定 試驗有效判定為NCx（陰性對照的 OD450值）＞0.500，PCx（陽性對照的 OD450值）阻斷率%≥50%；樣品阻斷率（%）=100%×[NCxA（450）-樣品 A（450）]/NCxA（450）。若被檢樣品的阻斷率≤30%，該樣品為陰性（無CSFV抗體）；若被檢樣品的阻斷率≥40%，該樣品為陽性（有CSFV抗體）；若被檢樣品的阻斷率在30%～40%之間，該樣品判為可疑，需要對其重新檢測。計算變異系數(shù)（CV）=（標準差/平均數(shù)）×100%。若CV≤40%，則抗體水平整齊，免疫效果良好；若40%＜CV≤60%，則抗體水平一般；若CV＞60%，則抗體水平不整齊，免疫效果不好。

1.3.4 試驗數(shù)據(jù)分析 使用SPSS 20軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)規(guī)模化豬場豬瘟抗體水平

6家規(guī)模化豬場共594份豬血清，豬瘟病毒抗體平均陽性率為85.02%，平均阻斷率為（67.77±24.00）%，離散度為 37.05%。6家規(guī)模化豬場（A、B、C、D、E、F） 的抗體陽性率分別為 92.28%、92.00%、93.75%、85.96%、90.36%和 66.89%。A、B、C、D、E 5個規(guī)模化豬場的豬瘟病毒抗體陽性率均高于國家規(guī)定水平（＞70%），且上述豬場的離散度較小。F場的豬瘟病毒抗體陽性率（66.89%）較低于國家規(guī)定水平且抗體水平差異性較大。使用SPSS軟件進行單因素方差分析顯示各豬場豬瘟病毒抗體水平差異顯著（P＜0.05），結(jié)果見表 1。

表1 新疆部分地區(qū)6個規(guī)模化豬場豬瘟病毒抗體檢測結(jié)果

2.2 不同類別豬群的豬瘟抗體水平

哺乳仔豬、保育豬、后備豬、肥育豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為75.00%、65.31%、90.48%、85.71%、92.11%和91.95%。不同類別豬群的豬瘟抗體水平存在較大差異。其中，后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的抗體陽性率高達90%以上，保育豬的抗體陽性率最低為65.31%。哺乳仔豬、保育豬、后備豬、肥育豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體阻斷率分別為（58.89±28.37）%、（46.91±28.10）%、（76.28±19.03）%、（59.51±20.50）%、（73.37±20.95）%和（69.45±20.29）%。結(jié)果見表2。

表2 不同類別豬群豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果

3 討論

試驗結(jié)果表明，2019年新疆巴州、伊犁、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子6個地區(qū)的6個規(guī)模化豬場中有5個豬場的豬瘟抗體陽性率在國家規(guī)定水平（70%）以上，只有1個豬場的豬瘟抗體陽性率低于70%，造成該豬場抗體水平較低的原因有很多，如豬場飼養(yǎng)環(huán)境、免疫方法等相關(guān)導(dǎo)致免疫失敗的因素都會影響豬瘟免疫的效果，應(yīng)結(jié)合豬場的實際生產(chǎn)情況來調(diào)整免疫程序。根據(jù)劉鴿等[5]研究報道，規(guī)模化豬場豬瘟抗體合格率達到89.89%，北疆地區(qū)所檢測的規(guī)模化豬場中有87.5%（14/16）的豬場豬瘟抗體陽性率達國家規(guī)定水平（70%）以上，其結(jié)果在一定程度上說明新疆北疆地區(qū)的豬場豬瘟抗體水平較高。根據(jù)覃紹敏等[6]研究報道，離散度的理論數(shù)值偏小時（≤40%），也能說明豬場散發(fā)豬瘟的危險度小。A、B、C、D、E 豬場的離散度均≤40%，抗體整齊度好，表明其免疫效果良好。僅F豬場的離散度介于40%～60%間，抗體水平整齊度一般，且抗體平均陽性率未達到國家標準，表明其免疫效果較差，建議加強豬瘟免疫防控。

不同類別豬群豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果表明，哺乳仔豬陽性率為75.00%，但保育豬的抗體水平較低（65.31%），表明該類別的豬群免疫效果不好，需要調(diào)整為更合理的免疫程序。后備豬、肥育豬、種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率分別為90.48%、85.71%、91.95%和92.11%，表明其免疫效果較好。結(jié)合劉功成等[7]研究報道，建議仔豬斷奶后進行免疫，并適時加強免疫1次，以確保仔豬進入保育階段后可保持較高的豬瘟抗體水平。

對于規(guī)模化豬場在豬瘟的防控中，疫苗免疫接種仍是一種有效手段，疫苗免疫水平的監(jiān)測始終起到調(diào)整完善各豬場免疫程序的關(guān)鍵作用。根據(jù)抗體水平波動情況對免疫接種方案及時做出正確判斷，并采取有效的措施來提高疫苗免疫效果，及時做好疫苗補免與淘汰工作，做到防微杜漸，以確保新疆生豬養(yǎng)殖事業(yè)能夠長久穩(wěn)定的發(fā)展。