3種常用民族藥減肥消脂作用的篩選研究

何鵬飛 張婭 王胤驍 夏海梅 張菊 高敏

摘要：目的?選取3種常用云南民族藥（藤茶、火棘、青刺尖），通過高脂飲食誘導(dǎo)的方法，建立肥胖動(dòng)物模型，應(yīng)用活鼠組分分析的方法，對(duì)動(dòng)物的體脂含量等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測并進(jìn)行比較，從而篩選具有明顯減肥消脂作用的藥物。方法?雄性SPF級(jí)C57BL/6J小鼠94只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高脂模型組、陽性對(duì)照組和3個(gè)民族藥給藥組。每周測量、記錄小鼠的體重、脂肪重量，喂養(yǎng)7周后比較體質(zhì)量、體脂含量、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和Lee's指數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果?藤茶、青刺尖兩種藥物能降低小鼠體脂含量和Lee's指數(shù)，一定程度控制體質(zhì)量增長。結(jié)論?藤茶、青刺尖具有一定的減肥作用效果。

關(guān)鍵詞：肥胖;民族藥;活鼠組分分析

中圖分類號(hào)：R29?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2020）08-0071-04

【Abstract】Objective： To select three commonly used national medicines （Vine tea， Pyracantha， Green thorn tip） from Yunnan ethnic medicine and establish an obese animal model through high-fat diet induction.?The live mouse component analysis was used to continuously monitor and compare the various content indicators of the animal body fat so as to screen drugs with obvious weight loss and fat elimination effects.?Methods： 94 male SPF C57BL/6J mice were randomly divided into a normal control group， a high-fat model group， a positive control group and 3 ethnic drug administration groups.?The body weight and fat weight of the mice were measured and recorded every week， and the body weight， body fat content， serum total cholesterol （TC）， triglyceride （TG） and Lees index were compared after 7-weeks feeding.?Results： Vine tea and Green thorn tip could reduce the body fat content and Lees index of the mice and control the weight gain to a certain extent.?Conclusion： Vine tea，Green thorn tip have a certain effect of weight loss.

【Key words】obesity， ethnic medicine， live mouse component analysis

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展，人們的生活水平不斷提高，膳食結(jié)構(gòu)和生活方式也發(fā)生了改變，往往導(dǎo)致營養(yǎng)過剩，造成全身性脂肪過量積累，即“肥胖”。美國醫(yī)學(xué)會(huì)于2013年正式把肥胖歸類為疾病，并指出“在過去20年，肥胖的成年人加倍，肥胖的兒童也在一個(gè)世代增加了兩倍” [1]。2016年知名醫(yī)學(xué)雜志《柳葉刀》發(fā)表了全球成年人體重調(diào)查報(bào)告，報(bào)告指出：目前世界上胖子的數(shù)量已經(jīng)超過了瘦子，而中國的肥胖人口超過美國列首位[2]。肥胖已成為世界性的公共衛(wèi)生問題。同時(shí)，現(xiàn)代研究表明：肥胖不僅是一種疾病，而且也是一種危險(xiǎn)因素，由于肥胖患者對(duì)胰島素、瘦素的敏感性下降，可能加重血脂代謝紊亂[3]，另外，肥胖可導(dǎo)致包括心血管疾病（心臟病、腦卒中）、2型糖尿病、肌肉骨骼疾病（骨關(guān)節(jié)炎等）、消化系統(tǒng)疾病及某些癌癥在內(nèi)的諸多疾病、并發(fā)癥及過早死亡[4]。

云南是動(dòng)植物王國和多民族省份，有著豐富的天然藥物資源，千百年來各族人民積累了豐富的防病治病經(jīng)驗(yàn)，形成以傣族、彝族、藏族醫(yī)藥等為主干的獨(dú)特的云南民族醫(yī)藥體系。研究民族藥治療肥胖，篩選和開發(fā)具有良好減肥消脂作用的民族藥，結(jié)合目前人類健康的需求具有較好的應(yīng)用前景。

本項(xiàng)目通過選取收載于2005版《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，并且文獻(xiàn)研究有降血脂作用的常用3種云南民族藥藤茶[5]、火棘[6]、青刺尖[7]（藥材植物基源見表1），通過高脂飲食誘導(dǎo)的方法，建立肥胖動(dòng)物模型，應(yīng)用活鼠組分分析的方法，對(duì)動(dòng)物的體脂含量等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測并進(jìn)行比較，從而篩選具有明顯減肥消脂作用的藥物。為民族藥基礎(chǔ)研究、新藥開發(fā)研究、臨床實(shí)踐提供有益參考與嶄新思路。

1?試驗(yàn)材料

1.1?動(dòng)物?健康SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，6周齡，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2014-0004。

1.2?飼料?低脂飼料（D12450B Rodent Diet with 10kcal% Fat，批號(hào)：17100276）;高脂飼料（D12492 Rodent Diet with 60kcal% Fat，批號(hào)：18012208i），均購自美國Research Diets公司。

1.3?藥品與試劑?奧利司他膠囊，重慶華森制藥股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20103180，批號(hào)：170303。藤茶購自西雙版納州傣醫(yī)院;青刺尖購自麗江貢和實(shí)業(yè)有限公司;火棘購自楚雄老撥云堂彝醫(yī)館。總膽固醇（totalcholesterol，TC）檢測試劑盒（批號(hào)：1017041）、甘油三酯（tri-glyceride，TG）檢測試劑盒（批號(hào)：0917041）購自邁克生物股份有限公司。

1.4?儀器?Bruker minispec LF90活鼠組分分析儀（德國布魯克公司）;日立7100全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）;BS2000S電子分析天平（賽多利斯學(xué)儀器（北京）有限公司）;TGL-16B型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.5?實(shí)驗(yàn)環(huán)境?云南省中醫(yī)中藥研究院IVC獨(dú)立送風(fēng)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滇）2017-0003，溫度20℃～26℃，濕度40%～60%。

2?實(shí)驗(yàn)方法

2.1?藥材的處理?選取無蟲蛀、無霉變的藥材，粉碎成粗粉，分別加蒸餾水，固液比1：10，浸泡1h，采用索式提取法，提取2h，收集藥液，過濾，低溫濃縮至1.0g生藥/mL濃度，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2?分組及飼養(yǎng)?選取雄性C57BL/6J小鼠，體重18～22g，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組（ZC組）、模型組（MX組）、陽性組（YX組）、藤茶組（TC組）、火棘組（HJ組）和青刺尖組（QC組）。采用高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖動(dòng)物模型的方法[8]，其中正常對(duì)照組14只，采用D12450B低脂飼料喂養(yǎng);其余各組每組16只，采用D12492高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水，喂養(yǎng)周期為7周。實(shí)驗(yàn)期間每日觀察各組小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲水、飲食、糞便及毛色等基本狀況。

2.3?給藥?每天上午給藥一次，每組動(dòng)物均采用經(jīng)口灌胃方式給藥。正常對(duì)照組、高脂模型組，灌胃給予飲用水;陽性對(duì)照組給予奧利司他膠囊，按照成人（60kg計(jì)）每日臨床用量360mg/d，劑量按體表面積等效劑量換算比率換算，小鼠給藥劑量為46.8mg/kg，試驗(yàn)采用3倍劑量，即140mg/kg。3種供試藥物給藥組，給予1.0g生藥/mL濃度藥液。各組給藥體積均為20 mL/kg。

2.4?體質(zhì)量和體脂含量測定?實(shí)驗(yàn)正式開始后，每周測量一次各組小鼠體質(zhì)量，利用Bruker minispec LF90Ⅱ活鼠組分分析儀檢測各組小鼠體脂含量。

2.5?血清指標(biāo)、Lee's指數(shù)、體質(zhì)量增加率和體脂含量增加率測定?第7周體脂檢測結(jié)束后，各組小鼠禁食不禁水12h，股動(dòng)脈取血，靜置1h，3000rpm離心5min，取上清液，按試劑盒操作說明書測定TC、TG含量。用電子游標(biāo)卡尺測量小鼠體長（從鼻尖到肛門的距離），根據(jù)公式Lees指數(shù)=;體質(zhì)量增加率=（試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量-試驗(yàn)前體質(zhì)量）/試驗(yàn)前體質(zhì)量×100%;體脂含量增加率=（試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體脂含量-試驗(yàn)前脂肪含量）/試驗(yàn)前體脂含量×100%，計(jì)算Lee's指數(shù)、體質(zhì)量增加率、體脂含量增加率。

2.6?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析?所有數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)法比較各組小鼠肥胖指標(biāo)的變化，P<0.05為差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3?結(jié)果

3.1?實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠狀態(tài)?實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠精神狀態(tài)未見異常。正常對(duì)照組小鼠反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光潔。模型組小鼠，高脂飼料喂養(yǎng)一段時(shí)間后，出現(xiàn)活動(dòng)量減少、毛發(fā)亮度減退的現(xiàn)象。各給藥組小鼠，灌胃給藥后，小鼠毛發(fā)亮度明顯改善，活動(dòng)量增加，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)。

3.2?藥物對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響?試驗(yàn)開始前，各組小鼠體質(zhì)量無明顯差異（P>0.05），至試驗(yàn)結(jié)束，各組小鼠體質(zhì)量都呈正增長。從第4周開始，正常對(duì)照組（ZC組）體質(zhì)量與模型組（MX組）出現(xiàn)明顯差異（P<0.05），從第6周開始，藤茶組（TC組）體質(zhì)量與模型組出現(xiàn)明顯差異（P<0.05）。數(shù)據(jù)見表2。

3.3?藥物對(duì)小鼠體脂的影響?試驗(yàn)開始前，各組小鼠體脂含量無明顯差異（P>0.05）。從第2周開始，正常對(duì)照組（ZC組）體脂含量與模型組（MX組）出現(xiàn)明顯差異（P<0.01）;從第6周開始，藤茶組（TC組）體脂含量與模型組（MX組）出現(xiàn)明顯差異（P<0.05）;從第2周開始，青刺尖（QC組）體脂含量與模型組（MX組）出現(xiàn)明顯差異（P<0.05）。TC組和QC組，2個(gè)給藥組體脂含量降低，且與MX組出現(xiàn)明顯差異后，至試驗(yàn)結(jié)束，一直保持。數(shù)據(jù)見表3。

3.4?藥物對(duì)小鼠血清指標(biāo)、Lee's指數(shù)、體質(zhì)量增加率和體脂含量增加率的影響 正常對(duì)照組（ZC組）、青刺尖（QC組）的TC、TG、Lee's指數(shù)均低于模型組（MX組）（P<0.05）;火棘組（HJ組）的TG、Lee's指數(shù)均低于模型組（MX組）（P<0.05）;藤茶組（TC組）Lee's指數(shù)低于模型組（MX組）（P<0.05），但TC高于模型組（MX組）（P<0.05）。數(shù)據(jù)見表4。

4?討論

青刺尖，雖然沒有明顯降低小鼠體質(zhì)量，但結(jié)合體質(zhì)量增加率分析，一定程度上能控制體質(zhì)量的增長。同時(shí)，能有效降低小鼠體脂含量、TG 水平和Lee's指數(shù);藤茶可明顯降低小鼠體質(zhì)量、體脂含量和Lee's指數(shù)，在控制TC水平方面有待進(jìn)一步驗(yàn)證;火棘可降低小鼠TG 水平和Lee's指數(shù)。藤茶、青刺尖，兩種藥物都具有一定的減肥作用效果，今后可作為新藥開發(fā)研究的方向和選擇。

陽性組（YX組）TC、TG高于模型組（MX組），可能與其減肥作用效果和機(jī)制有關(guān)[9]，但其降低小鼠體質(zhì)量、體脂含量和Lee's指數(shù)的作用仍與模型組（MX組）有顯著差異（P<0.05）。

活鼠組分分析是運(yùn)用時(shí)域核磁共振（TD-NMR）技術(shù)，通過在核磁共振成像（MRI）中產(chǎn)生的反差規(guī)律，基于脂肪和肌肉各自的弛豫時(shí)間的差別來進(jìn)行分析，以提供活體動(dòng)物脂肪組織、肌肉組織和體液的分析。通過該項(xiàng)方法的運(yùn)用，對(duì)模型動(dòng)物的體脂含量等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測并進(jìn)行比較，尚屬首次，希望為減肥藥物的研究提供新的思路和方法。

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（收稿日期：2020-04-10）