蘆丁脂質體凍干的制備和性能研究*

鄭 穎，李恩博，朱俊飛，余秀娟

(1 河北北方學院理學院，河北 張家口 075000；2 河北北方學院藥學系，河北 張家口 075000)

蘆丁，又名紫槲皮甙 ，是一類主要從豆科、蕓香科類植物中提取獲得的天然黃酮類化合物，具有消炎止痛，抗自由基氧化，防曬抗輻射，緩解肌肉疲勞等功效，是草本防曬護膚用品的主要配方成分。通常蘆丁水溶性較差，不利于皮膚的涂抹吸收，嚴重影響了它的使用效果[1-3]。脂質體是一類在醫藥領域中常見的藥物載體物質，具有水溶性好，毒副作用小，易于生物降解吸收等優勢，常用于各類口服藥物的包封使用[4-6]。為增強蘆丁的水溶吸收性，提高它的使用效率，本次研究中，我們采用冷凍干燥技術以蘆丁為原料，制備了它的脂質體凍干，考察了藥脂比，醇酯比等制備條件對產品包封率的影響，并對蘆丁脂質體凍干的溶解性和穩定性進行考察。

1 實 驗

1.1 實驗藥品和儀器

蘆丁，大連美侖生物技術有限公司；卵磷脂、甘露醇、膽固醇，上海麥克林生化科技有限公司；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)自行配制；其余試劑等均為國產分析純試劑；Modulyo冷凍干燥機，美國Thermo FIsher公司；722分光光度計，上海光學儀器廠；超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；TGL-20M冷凍離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司。

1.2 蘆丁脂質體凍干的制備

稱量蘆丁2 mg，按比例將蘆丁、膽固醇，卵磷脂溶解于100 mL無水乙醇，超聲分散至獲得淺黃色溶液。常壓條件下，40 ℃水浴旋蒸至溶劑揮發，待容器壁形成透明薄膜之后，減壓蒸餾至溶劑完全揮發，加入PBS緩沖溶液10 mL，45 ℃水合反應1 h，所得乳濁液超聲分散后，既得蘆丁脂質體，將所得脂質體置于冰箱中4 ℃冷藏。在經過預冷凍的蘆丁脂質體溶液中加入質量比為10%的甘露醇后，置于冷凍干燥機中，于-40 ℃減壓冷凍干燥至樣品升華界面消失。既得蘆丁脂質體凍干試樣。

1.3 蘆丁含量及包封率測定

所制蘆丁脂質體凍干中的蘆丁含量及包封率采用紫外分光光度法測定并計算獲得，首先稱取標準蘆丁樣品，加入無水乙醇溶解，依次配置0 mg/mL，0.01 mg/mL，0.02 mg/mL，0.03 mg/mL，0.04 mg/mL，0.05 mg/mL系列標準溶液，測定溶液在357 nm處吸光度[7]，制作標準樣品吸光度工作曲線。

稱取待測凍干樣品加入10 mL乙醇溶解，測定吸光度，根據吸光度工作曲線確定脂質體凍干中蘆丁總濃度，稱取相同質量凍干樣品加入10 mL乙醇溶解，并經過冷凍離心分離，稱取上清液，測定吸光度，確定脂質體中游離蘆丁總濃度。

包封率E根據凍干中蘆丁總濃度C總與游離蘆丁濃度C游計算獲得，計算公式為：

E=(C總-C游)/C總×100%

2 結果與討論

2.1 醇脂比對蘆丁脂質體凍干包封率影響

固定蘆丁的質量為2 mg，卵磷脂質量為100 mg，考察醇脂質量比對樣品包封率影響，結果見表1。由表1知，蘆丁脂質體凍干的包封率隨膽固醇含量的增加而增大，當醇酯比為2:5時，所得蘆丁脂質體凍干包封率達最高值46.3%，膽固醇作為表面活性劑，增加它的使用量，有利于提高脂質體乳液的穩定性，但是含量過高時，會造成脂質體膜親水性增強，膜體發生破裂，從而影響其包封效果。

表1 醇脂比對樣品包封率的影響Table 1 The influence of alcohol fat ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.2 藥脂比對蘆丁脂質體凍干包封率影響

固定蘆丁使用量2 mg，膽固醇使用量40 mg時，考察藥脂比對樣品包封率影響，結果見表2。由表2知，樣品的包封率同樣隨卵磷脂含量的增加而增加，但是持續增加卵磷脂用量，會造成脂質體聚集，穩定性變差，發生滲漏，降低了脂質體的包封率，同時增加卵磷脂用量也會造成試樣中蘆丁含量的相對降低，影響上清液中游離蘆丁的濃度，從而導致了測定包封率數值的下降。當藥脂比為1:50時，所得蘆丁脂質體凍干具有最大包封率。

表2 藥脂比對樣品包封率的影響Table 2 The effect of drug lipid ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.3 脂質體溶解性測試

將經過上述工藝優化處理的過量蘆丁脂質體凍干分別溶于10 mL的PBS緩沖溶液(pH=6.5)、去離子水及無水乙醇溶液中，經超聲分散20 min后，0.22 μm過濾膜過濾，所得濾液經吸光度測定，確定濃度。按同樣方法采用蘆丁原料進行空白實驗，結果見表3，由表3可知，相對于未經處理的蘆丁原料，蘆丁脂質體凍干在三種不同溶液中的溶解性得到了明顯提升。相對于弱酸性緩沖溶液和乙醇溶液，其在中性去離子水中溶解度增加最為明顯。蘆丁通過脂質體的包封作用，有效地改善了蘆丁的親水性能，促進了其在水中的分散，因此溶解度得到大幅度的上升。

表3 樣品在不同溶劑中的溶解度Table 3 Solubility of samples in different solvents

2.4 蘆丁脂質體凍干穩定性測試

優化工藝得到的脂質體凍干經過4 ℃低溫保存，每隔10天，測定樣品的包封率，結果見表4，由表4可知，所制樣品經過40天時間保存，仍具有很高的包封率，具備較好的穩定性，可實現長期保存。

表4 樣品包封率隨時間變化結果Table 4 Results of sample encapsulation rate changing with time

3 結 論

采用冷凍干燥技術，制備了蘆丁脂質體凍干，研究發現，當制備工藝為蘆丁2 mg，膽固醇40 mg，卵磷脂100 mg時，以甘露醇作為凍干劑，-40 ℃條件下冷凍干燥所制蘆丁脂質體凍干具備最好的包封率，所制蘆丁凍干脂質體具有很好的水溶性和穩定性，便于長期保存和溶解使用。有利于蘆丁作為護膚用品成分的使用和存儲。