稽留流產(chǎn)組織的染色體檢測研究分析

趙艷輝

【摘要】 目的 研究分析稽留流產(chǎn)組織的染色體檢測。方法 60例稽留流產(chǎn)孕婦， 均接受流產(chǎn)胎兒組織及絨毛組織染色體拷貝數(shù)變異測序（CNV-sep）檢測， 分析檢測結(jié)果， 依據(jù)結(jié)果分為染色體正常組和染色體異常組， 對兩組孕婦年齡、胎兒性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。結(jié)果 60例孕婦稽留流產(chǎn)組織（流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例， 流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例）中， CNV-sep技術(shù)檢測染色體異常31例， 異常檢出率為51.7%。流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果55例， 檢測成功率為100.0%， 染色體正常25例， 占45.5%， 其中染色體核型46， XY 11例（44.0%）， 46， XX 14例（56.0%）;染色體異常30例， 占54.5%， 其中染色體單體異常3例（10.0%）， 均為性染色體單體。染色體三體型異常19例（63.3%）， 包括13-三體2例（10.5%）， 16-三體6例（31.6%）， 18-三體4例（21.1%）， 21-三體1例（5.3%）， 22-三體6例（31.6%）。性染色體三體型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色體多倍體6例（20.0%）， 包括三倍體5例（83.3%）， 四倍體1例（16.7%）。流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果5例， 檢測成功率為100.0%， 染色體正常4例， 占80.0%， 其中染色體核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色體異常1例， 占20.0%， 為18-三體。染色體正常組孕婦的年齡（32.6±5.0）歲和染色體異常組的（31.7±5.9）歲比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組胎兒性別比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 稽留流產(chǎn)組織的染色體檢測能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床了解流產(chǎn)原因， 進(jìn)而指導(dǎo)下一次受孕。

【關(guān)鍵詞】 稽留流產(chǎn);流產(chǎn)胎兒組織;流產(chǎn)絨毛組織;染色體CNV-sep檢測

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.24.089

自然流產(chǎn)在婦產(chǎn)科較為常見， 10%～15%的妊娠會自然流產(chǎn)[1]， 環(huán)境因素、胎盤因素、胚胎因素、母體因素等很多因素均對其發(fā)生造成了影響， 其中主要影響因素為胚胎染色體異常[2]。稽留流產(chǎn)屬于一種特殊的自然流產(chǎn)， 又稱過期流產(chǎn)， 指沒有及時排出宮內(nèi)胚胎或胎兒， 目前， 臨床還沒有明確其病因[3]。檢測流產(chǎn)組織染色體， 對胚胎停育、流產(chǎn)原因進(jìn)行分析一方面能夠?qū)⒗碚撘罁?jù)提供給臨床咨詢， 另一方面還能夠指導(dǎo)孕婦再次妊娠[4]?，F(xiàn)階段， 在醫(yī)學(xué)診斷的各個領(lǐng)域， CNV-sep技術(shù)均已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用[5]。本文研究分析了稽留流產(chǎn)組織的染色體檢測。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 回顧性分析2017年1月～2020年1月本院收治的60例稽留流產(chǎn)孕婦的臨床資料， 年齡26～41歲， 平均年齡（33.5±5.4）歲;停經(jīng)時間8～14周， 平均停經(jīng)時間（11.2±2.4）周。

1. 2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：均接受清宮術(shù)治療;均符合稽留流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：缺乏齊全的病歷資料;缺乏良好的依從性;缺乏清晰的意識。

1. 3 方法

1. 3. 1 樣本制備 術(shù)中嚴(yán)格無菌操作， 從宮腔中取胎兒腓腸肌組織或絨毛組織， 放置在含肝素生理鹽水的無菌容器中， 顯微鏡下取5 mg左右的組織， 用無菌剪刀剪碎， 加入5 ml 的0.075 mol/L氯化鉀溶液， 在37℃的溫度下低滲20 min， 用固定液（甲醇：冰乙酸）預(yù)固定， 離心， 棄上清， 連續(xù)固定2次， 10 min/次， 再次棄上清， 加入1 ml醋酸， 消化1 min， 最后用3 ml甲醇終止消化。

1. 3. 2 CNV-sep檢測 應(yīng)用TaqMan探針對流產(chǎn)胎兒組織及絨毛組織進(jìn)行檢測， 將黃豆大小流產(chǎn)組織取出， 在微型離心管（EP管）中放置， 密閉保存。不冷凍， 在4℃的溫度下保存、運(yùn)輸， 2 d內(nèi)向?qū)嶒?yàn)室輸送處理， 步驟為組織和DNA-EZ-GALO法DNA建庫-Hiseq 2500測序-RUPA比對法生物信息學(xué)分析。

1. 4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 隨機(jī)計(jì)數(shù)流產(chǎn)胎兒組織及絨毛組織細(xì)胞100個及以上， 正常樣本的標(biāo)準(zhǔn)為正常細(xì)胞占總數(shù)的90%以上， 異常樣本的標(biāo)準(zhǔn)為異常細(xì)胞占總數(shù)的60%以上。在無法判斷的情況下將計(jì)數(shù)擴(kuò)大。依據(jù)結(jié)果將孕婦分為染色體正常組和染色體異常組， 比較兩組孕婦年齡、胎兒性別。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 60例孕婦稽留流產(chǎn)組織CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果分析 60例孕婦稽留流產(chǎn)組織（流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例， 流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例）中， CNV-sep技術(shù)檢測染色體異常31例， 異常檢出率為51.7%。流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果55例， 檢測成功率為100.0%。染色體正常25例， 占45.5%， 其中染色體核型46， XY 11例（44.0%）;46， XX 14例（56.0%）。染色體異常30例， 占54.5%， 其中染色體單體異常3例（10.0%）， 均為性染色體單體。染色體三體型異常19例（63.3%）， 包括13-三體2例（10.5%）， 16-三體6例（31.6%）， 18-三體4例（21.1%）， 21-三體1例（5.3%）， 22-三體6例（31.6%）。性染色體三體型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色體多倍體6例（20.0%）， 包括三倍體5例（83.3%）， 四倍體1例（16.7%）。流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果5例， 檢測成功率為100.0%， 染色體正常4例， 占80.0%， 其中染色體核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色體異常1例， 占20.0%， 為18-三體。

2. 2 兩組孕婦年齡、胎兒性別比較 染色體正常組孕婦年齡（32.6±5.0）歲和染色體異常組的（31.7±5.9）歲比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組胎兒性別比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

近年來， 稽留流產(chǎn)發(fā)生率在高齡妊娠、環(huán)境因素等作用下日益提升， 主要原因?yàn)榱鳟a(chǎn)胎兒胚胎染色體異常， 達(dá)到了50%～60%的發(fā)生率[7]。CNV-seq即通過低倍全基因組測序檢測拷貝數(shù)變異（CNV）的技術(shù)， 2009年由Xie等開發(fā)提出[8]， 可以檢測全基因組水平上的大片段CNV。貝瑞和康采用雙盲實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)， 對染色體結(jié)構(gòu)異常的樣本進(jìn)行檢測， 滑窗大小為20 kb的情況下， CNV-seq和高密度SNP-array對于已知致病CNVs都能達(dá)到100%的檢出。與中等密度SNP-array相比， CNV-seq表現(xiàn)更優(yōu)。鑒于CNV-seq價(jià)格較低， CNV-seq可以替代微陣列芯片用于大片段CNV檢測。臨床分染色體異常為染色體結(jié)構(gòu)異常、染色體數(shù)目異常兩種類型， 而自然流產(chǎn)中染色體異常中染色體數(shù)目異常占極大比例， 其中最為常見的為非整倍體數(shù)目異常。染色體數(shù)目異?；颊咧?， 主要為染色體三體， 單體較為少見[9]。同時， 在流產(chǎn)絨毛染色體檢查中， 三倍體也較為常見， 這種染色體的數(shù)目異?？赡軓穆涯讣?xì)胞或精母細(xì)胞減數(shù)分裂異常中來源， 也可能從雙親之一方配子形成過程中有絲分裂異常中來源， 還可能從新的突變中來源[10]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[11]， 胚胎稽留流產(chǎn)的主要誘發(fā)因素為染色體異常， 因此檢測流產(chǎn)胚胎的染色體一方面能夠幫助臨床對本次流產(chǎn)原因進(jìn)行了解， 另一方面還能夠有效指導(dǎo)下一次受孕。

本研究結(jié)果表明， 60例孕婦稽留流產(chǎn)組織（流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例， 流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例）中， CNV-sep技術(shù)檢測染色體異常31例， 異常檢出率為51.7%。流產(chǎn)絨毛標(biāo)本55例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果55例， 檢測成功率為100.0%， 染色體正常25例， 占45.5%， 其中染色體核型46， XY 11例（44.0%）， 46， XX 14例（56.0%）;染色體異常30例， 占54.5%， 其中染色體單體異常3例（10.0%）， 均為性染色體單體。染色體三體型異常19例（63.3%）， 包括13-三體2例（10.5%）， 16-三體6例（31.6%）， 18-三體4例（21.1%）， 21-三體1例（5.3%）， 22-三體6例（31.6%）。性染色體三體型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色體多倍體6例（20.0%）， 包括三倍體5例（83.3%）， 四倍體1例（16.7%）。流產(chǎn)胎兒標(biāo)本5例中， 獲取CNV-sep技術(shù)檢測結(jié)果5例， 檢測成功率為100.0%， 染色體正常4例， 占80.0%， 其中染色體核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色體異常1例， 占20.0%， 為18-三體。和上述觀點(diǎn)一致， 發(fā)生這一現(xiàn)象的原因?yàn)槿旧w在妊娠初期受精卵卵裂時或雙親之一的配子形成時有不分離現(xiàn)象發(fā)生， 進(jìn)而增多或減少了該條染色體， 從而造成三體型及單體型[12]。本研究結(jié)果還表明， 染色體正常組孕婦的年齡（32.6±5.0）歲和染色體異常組的（31.7±5.9）歲比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組胎兒性別比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。和上述研究結(jié)果一致， 說明孕婦年齡、胎兒性別不受到流產(chǎn)組織染色體異常的直接影響， 發(fā)生這一現(xiàn)象的原因可能為具有較少的患者數(shù)量， 需要將樣本加大進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)。

綜上所述， 稽留流產(chǎn)組織的染色體檢測能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床了解流產(chǎn)原因， 進(jìn)而指導(dǎo)下一次受孕， 值得在臨床推廣應(yīng)用。

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[收稿日期：2020-04-02]