獲得性免疫缺陷綜合征患者合并機會性感染的淋巴細胞亞群和HIV-1病毒載量的特點分析

曹汴川， 黃 喆， 肖 科， 稅雪姣， 鄒永勝， 黃富禮， 黃永茂， 鐘 利

獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）是由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染所導致的以免疫功能缺陷為特征的慢性致死性傳染病。四川地區(qū)AIDS疫情嚴峻，已成為最重大的公共衛(wèi)生挑戰(zhàn)之一。HIV感染導致患者CD4+T淋巴細胞數(shù)量進行性減少[1]，CD4+/CD8+T淋巴細胞比例倒置，相關(guān)細胞因子水平紊亂，進而引起機體免疫功能缺陷，極易發(fā)生各種機會性感染[2]。而AIDS合并機會性感染是導致患者出現(xiàn)各種臨床癥狀，甚至死亡的重要因素[3-4]。有研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T淋巴細胞和HIV-1病毒載量已成為判定AIDS患者病情、預測疾病進展和評價抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療（ART）療效的重要指標[5-7]。因此，評估包括CD4+T淋巴細胞在內(nèi)的淋巴細胞亞群和HIV-1病毒載量可全面反映AIDS患者的免疫功能以及ART療效，進而預測發(fā)生感染的概率。對AIDS患者合并機會性感染的淋巴細胞亞群和HIV-1病毒載量進行分析，以期提高臨床診治水平，進而為降低本地區(qū)此病的發(fā)病率和病死率提供依 據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例來源

所有病例均來源于西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院感染病科2019年1－12月住院治療的AIDS合并機會性感染患者，共100例。病例納入排除條件：①AIDS患者合并機會性感染；②性別不限；③排除血液系統(tǒng)疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、肝硬化、慢性腎臟疾病和嚴重精神疾病；④剔除臨床資料不完整的病例。

1.2 實驗室檢測

由本院實驗室對血液標本采用化學發(fā)光法聯(lián)合膠體金法和膠體硒法進行HIV抗體篩查。篩查試驗為陽性者，采用免疫印跡法或條帶免疫法進行抗體補充試驗，按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）》中的標準操作[8]。

采用BD公司生產(chǎn)的FACS Canto Ⅱ流式細胞儀檢測外周血淋巴細胞亞群絕對計數(shù)，包括CD4+T淋巴細胞（CD3+CD4+）、CD8+T淋巴細胞（CD3+CD8+）、NK細胞（CD16+CD56+）和B淋巴細胞（CD3-CD19+）。

采用羅氏公司生產(chǎn)的COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan病毒載量檢測系統(tǒng)檢測血漿HIV-1病毒載量，HIV核酸＜20拷貝/mL定為檢測下 限。

1.3 診斷標準判定

HIV感染診斷，依據(jù)《中國艾滋病診療指南（2018版）》為標準[9]。符合如下標準即可診斷HIV感染：HIV抗體篩查試驗陽性和HIV補充試驗陽性（抗體補充試驗陽性或HIV核酸＞5 000 拷貝 / mL）。機會性感染的診斷以患者出院診斷為準，所有機會性感染的診斷均依據(jù)相應臨床表現(xiàn)及相關(guān)輔助檢查[9]。

1.4 資料采集

采集所有患者的資料，包括性別、年齡、職業(yè)、婚姻狀況、HIV感染途徑、機會性感染的種類、CD4+T淋巴細胞計數(shù)、CD8+T淋巴細胞計數(shù)、NK細胞計數(shù)、B淋巴細胞計數(shù)和HIV-1病毒載量。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用構(gòu)成比表示，組間比較采用Fisher精確檢驗；計量資料采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用方差分析或Kruskal-Wallis秩和檢驗；采用Spearman進行相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 患者基本信息

100例患者中，男86例，占86.0%，女14例，占14.0%。本地區(qū)AIDS患者合并機會性感染以41～65歲已婚男性農(nóng)民或農(nóng)民工居多，HIV-1傳播途徑以異性性行為為主。見表1。

表1 100例患者基本信息Table 1 Demographic data of 100 patients

2.2 機會性感染的種類

100例患者中，共發(fā)生機會性感染195例次，以細菌性肺炎位居首位（25.6%，50/195），其他常見的機會性感染還包括了EB病毒感染、肺結(jié)核、肺孢子菌肺炎、巨細胞病毒感染等。見表 2。

表2 195例次機會性感染的種類Table 2 Types of 195 opportunistic infections

2.3 機會性感染與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系

1 0 0例患者中，根據(jù)C D 4+T淋巴細胞計數(shù)水平分為4組（＜100/μL、100～200/μL、201～350/ μL、＞350/μL），隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低，機會性感染的發(fā)生明顯增加。見表3。

2.4 CD8+T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系

100例患者中，隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低，CD8+T淋巴細胞和B淋巴細胞計數(shù)水平也隨之降低。在CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100/μL時，CD8+T淋巴細胞和B淋巴細胞計數(shù)水平明顯低于其他三組，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。NK細胞計數(shù)水平也隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低而出現(xiàn)降低，但各組間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.182）。見表4。

2.5 HIV-1病毒載量與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系

100例患者中，隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低，HIV-1病毒載量水平出現(xiàn)升高。在CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100/μL時，HIV-1病毒載量明顯高于CD4+T淋巴細胞計數(shù)＞350/μL時，且差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.026）。將HIV-1病毒載量與CD4+T淋巴細胞計數(shù)作相關(guān)性分析，兩者呈負相關(guān)（r=-0.297，P=0.014），即當HIV-1病毒載量較高時，CD4+T淋巴細胞計數(shù)較低；而當HIV-1病毒載量較低時，CD4+T淋巴細胞計數(shù)較高。見表 5。

3 討論

截至2018年底，我國報告現(xiàn)有HIV感染者、AIDS患者共86.1萬例，2018年當年新發(fā)HIV感染者、AIDS患者為14.9萬例，死亡3.8萬例。HIV主要破壞人體免疫系統(tǒng)，導致人體出現(xiàn)免疫功能缺陷，引起各種機會性感染[10]。研究發(fā)現(xiàn)，HIV可導致CD4+T淋巴細胞出現(xiàn)凋亡或焦亡，HIV復制還可直接或間接對CD4+T淋巴細胞產(chǎn)生殺傷作用以及感染HIV后導致機體胸腺組織萎縮和胸腺細胞死亡等，上述過程共同導致了CD4+T淋巴細胞數(shù)量的進行性減少[9]。HIV感染還可引起CD8+T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞等其他免疫細胞出現(xiàn)異常免疫活化和功能障礙[9,11-12]。

表3 機會性感染與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系Table 3 Correlation between opportunistic infections and CD4+T lymphocytes count

表4 CD8+T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系Table 4 Correlation between CD8+T lymphocytes， NK cells， B lymphocytes and CD4+T lymphocytes

表5 HIV-1病毒載量與CD4+T淋巴細胞的關(guān)系Table 5 Correlation between HIV-1 viral load and CD4+T lymphocytes count

大部分HIV感染者在初始感染HIV以后，一般經(jīng)過6～8年的無癥狀期，最終發(fā)展為AIDS。在HIV感染的最終階段，患者CD4+T淋巴細胞計數(shù) ＜200 /μL，且HIV-1病毒載量明顯升高，此時，患者容易出現(xiàn)各種機會性感染。有研究表明，AIDS患者合并機會性感染具有感染多樣性、復雜性的特點，且病死率高[13-15]。另一研究發(fā)現(xiàn)，AIDS患者合并機會性感染主要由細菌、真菌和病毒引起[16-17]。本研究中，細菌性肺炎居首位（25.6%），其他常見的機會性感染還包括了EB病毒感染、肺結(jié)核、肺孢子菌肺炎和巨細胞病毒感染。

本研究發(fā)現(xiàn)，隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低，AIDS患者合并機會性感染的發(fā)生例數(shù)隨之增加。CD4+T淋巴細胞水平會影響機會性感染的發(fā)生，這與文獻報道的結(jié)果一致[18]。因而，CD4+T淋巴細胞計數(shù)是預測AIDS患者合并機會性感染發(fā)生的重要指標。

本研究發(fā)現(xiàn)，隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低，CD8+T淋巴細胞和B淋巴細胞計數(shù)水平也隨之降低。在CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100 /μL時，CD8+T淋巴細胞和B淋巴細胞計數(shù)水平明顯低于CD4+T淋巴細胞≥100 μL的其他三組，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。NK細胞計數(shù)水平也隨著CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平降低而出現(xiàn)降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P=0.182），這可能是由于納入研究的病例數(shù)較少的原因。由于 HIV感染不僅能引起CD4+T淋巴細胞的數(shù)量減少，同時，還可引起CD8+T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞等出現(xiàn)異常免疫激活，從而引起這些細胞死亡，導致殘存免疫細胞的減少。CD4+T淋巴細胞計數(shù)的降低預示病情出現(xiàn)了進展惡化，因而，CD8+T淋巴細胞、NK細胞和B淋巴細胞計數(shù)也會出現(xiàn)降低，上述免疫細胞的減少增加了機會性感染的發(fā)生概率。

本研究發(fā)現(xiàn)，當HIV-1病毒載量較高時，CD4+T淋巴細胞計數(shù)較低；而當HIV-1病毒載量較低時，CD4+T淋巴細胞計數(shù)較高，兩者呈負相關(guān)。當CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100 /μL時，HIV-1病毒載量明顯高于CD4+T淋巴細胞計數(shù)＞350 /μL時，且差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.026）。這是由于HIV-1病毒載量的高低代表了體內(nèi)病毒復制的數(shù)量，HIV-1病毒載量越高，CD4+T淋巴細胞在病毒直接或間接的作用下導致其破壞越多，進而導致CD4+T淋巴細胞數(shù)量的減少[19]，從而更容易合并機會性感染的發(fā)生。目前，預防機會性感染的最有效方法仍是ART[9，20]。ART能夠明顯抑制HIV復制，促進免疫功能恢復，進而降低AIDS患者機會性感染的發(fā)生率。

綜上，本地區(qū)AIDS患者合并機會性感染的表現(xiàn)復雜多樣，CD4+T淋巴細胞計數(shù)水平越低，免疫功能缺陷越明顯，機會性感染的發(fā)生率越高。隨著HIV-1病毒載量上升，CD4+T淋巴細胞呈現(xiàn)下降的趨勢。因而，定期監(jiān)測淋巴細胞亞群和HIV-1病毒載量，可以很好地預測疾病進展，評估抗病毒治療療效，預防機會性感染的發(fā)生。