白藜蘆醇抑制胃癌細胞株MKN45增殖的機制研究*

朱理輝，羅勇，鄧萍萍，陳宏輝，陳汶，李國慶，王正根，張琍

（南華大學附屬第二醫院 1.消化內科，2.重癥醫學科，湖南 衡陽 421001）

胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，大多數患者就診時為中晚期，無手術治療機會，目前中晚期胃癌的治療主要采用以化療為主的綜合治療[1]。白藜蘆醇又稱為芪三酚屬天然多酚類化合物，是藥食作物（如桑椹、虎杖、葡萄、花生等）的主要成分，具有很強的抗氧化活性[2]，屬于植物源性藥物，具有毒副作用少和植物衍生成分廣泛靶標的特點。其在抗腫瘤治療中的作用已有許多研究，包括結腸癌、皮膚惡性黑色素瘤、子宮內膜癌等[3-5]，但其對胃癌細胞增殖的影響及相關作用機制尚不清楚。本研究通過觀察不同濃度白藜蘆醇對胃癌細胞株MKN45 增殖及絲裂原活化蛋白激酶（MEK）/細胞外信號調節激酶（ERK）信號通路相關蛋白表達的影響，為臨床治療及新藥研發提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

胃癌細胞株MKN45（中國科學科院上海細胞研究所），白藜蘆醇和PD98059（美國Sigma Aldrich 公司），四甲基偶氮唑藍（MTT）檢測試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司），胎牛血清及RPMI 1640 培養基（美國Hyclone 公司），二甲亞砜（DMSO）（中國醫藥集團有限公司），胰蛋白酶（美國Sigma Aldrich 公司），兔抗Ras 及Raf 一抗（美國Cell Signaling 公司），兔抗MEK 及ERK1/2 一抗（美國Santa Cruz 公司），二氧化碳CO2恒溫培養箱（上海新苗醫療器械制造有限公司），超凈工作臺（江蘇蘇凈集團有限公司），熒光顯微鏡（德國萊卡公司），低溫高速離心機（美國貝克曼庫爾特公司），凝膠成像儀（美國Bio Rad 公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養人胃癌MKN45 細胞為貼壁生長細胞，常規培養于含10%小牛血清、100 u/ml 青霉素的RPMI 1640 培養基，置于37℃、5% CO2培養箱內培養。……