量子點流式微球技術用于DNA的檢測研究*

蔡冰潔，熊曉慶

（1.武漢大學人民醫院 檢驗科，湖北 武漢430060；2.海南醫學院 熱帶醫學與檢驗醫學院，海南 ?？?571199）

目前基因檢測的方法主要有PCR、液態生物芯 片、基因芯片、微流控技術等，這些傳統的檢測方法有一些較明顯的缺陷，如操作繁瑣、易污染、耗時耗力、成本高等[1-4]。量子點是一種新型半導體納米材料，尺寸2 ～10 nm，是一種較傳統熒光染料更優良的熒光探針[5-7]。流式微球技術是在流式細胞術的基礎上新建的一種技術。其作用機制是通過攜帶有熒光信號的微球與待測物結合在一起形成一個可以發熒光的復合物，然后通過檢測其平均熒光強度反映待測物的濃度[8]。流式細胞儀可以對細胞水平之外的分子水平進行檢測[9-10]。為建立一種高通量、操作簡單、成本低的快速檢測方法，本文擬利用新型納米材料量子點流式微球技術檢測DNA，該新型方法結合量子點優異的熒光特性和流式微球技術的高通量，具有反應靈敏快速、操作簡單等優勢，利用微球-DNA-量子點夾心結構，通過檢測核酸雜交前后熒光強度的變化來實現DNA 的高通量快速檢測。該新型技術有望實現臨床疾病相關核酸分子的快速檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

量子點購自武漢珈源量子點技術開發有限公司，鏈霉親和素包被的微球購自武漢珈源生物醫學工程有限公司，3-二甲基氨基丙基-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）、N-羥基丁二酰亞胺（NHS）、生物素琥珀酰亞胺酯（生物素-NHS）購自美國Sigma Aldrich 公司，DNA 序列購自寶生生物工程（大連）有限公司（見表1），通過高效液相純化，并用1×磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋，其余試劑購自上海捷瑞生物有限公司?！?br>