3種方法篩查M蛋白的結果分析*

潘建華,張 玲△,李艷紅,曾子良

1.廣州金域醫(yī)學檢驗中心血液室,廣東廣州 510330;2.廣州醫(yī)科大學金域檢驗學院,廣東廣州 510330

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是惡性漿細胞病中最常見的一種類型，占惡性血液系統(tǒng)腫瘤的10%[1]，增生的漿細胞產生單克隆免疫球蛋白，即M蛋白。M蛋白是診斷漿細胞增殖疾病中的血清腫瘤標志物。一般情況下，M蛋白的檢測主要靠血清蛋白電泳(SPE)法或者毛細管區(qū)帶電泳(CE)法篩查，該方法可以將M蛋白從多克隆的免疫球蛋白背景中區(qū)分出來。通過瓊脂糖免疫固定或毛細管免疫分型方法可以驗證并得知M蛋白的輕鏈、重鏈類型。血清游離輕鏈(sFLC)法則可以補充電泳技術對不分泌性多發(fā)性骨髓瘤(NSMM)的漏檢[2]。3種方法聯(lián)合檢測可為臨床診斷治療和療效評估提供指導依據[3]。本研究通過對10 287份標本結果進行回顧性分析，旨在了解廣東地區(qū)MM的發(fā)病情況。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析廣東地區(qū)2016年1月至2019年12月送往廣州金域醫(yī)學檢驗中心篩查MM的10 287份標本，其中男5 567例，女4 720例，年齡28～90歲，平均68.9歲。所有標本均采用SPE法、血清免疫固定電泳(IFE)法及sFLC法進行檢測分析。

1.2儀器與試劑 SPE、IFE和單克隆免疫球蛋白抗血清[IgG、IgA、IgM、Kappa輕鏈(輕鏈-κ)、Lambda輕鏈(輕鏈-λ)]采用美國Helena Laboratories全自動快速電泳系統(tǒng)(spife-3000)及配套試劑盒。SPE批號11598975；IFE批號82-19-552559；抗血清批號8-19-551822。sFLC采用美國貝克曼庫爾特公司Immage 800全自動特定蛋白分析儀檢測系統(tǒng)，試劑采用英國Binding Site公司FreelinteTMsFLC檢測試劑盒(κFLC 批號453705-C1，λFLC 批號424542-C1)；FreelinteTMsFLC配套校準品(κFLC批號469277，λFLC 批號465406)；FreelinteTMsFLC配套質控品(κFLC Control 批號453712，κFLC High Control批號453713，λFLC High Control 批號465408，λFLC Control 批號465409)。

1.3方法

1.3.1標本采集 空腹采集靜脈血3 mL，避免溶血和脂血,盡快離心并至少分離0.5 mL血清。清晨空腹采集靜脈血并分離血清，置于-20 ℃冰箱保存。

SPE法采用新鮮血清(樣品可以在2～8 ℃冷藏48 h，或在-20 ℃保存2周)。血清標本不需要稀釋，取40 μL未稀釋標本加到儀器樣品盤中的正確位置，在SPIFE3000電泳儀上按預先設置好的程序電泳條件下進行加樣、電泳和烘干凝膠片，取出膠片放進染色槽全自動染色烘干，最后進行成像掃描，血清蛋白水平和組分比例更表現(xiàn)出明顯的變化。

1.3.2SPE法 新鮮血清經瓊脂糖凝膠電泳可將血清蛋白分為5個條帶，從正極到負極依次為清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白區(qū)帶，同時對條帶進行定性(M蛋白)和定量分析(測得條帶濃度百分比，根據總蛋白含量×M蛋白條帶百分比得到M蛋白水平)。

1.3.3IFE法 電泳時蛋白先分離出來，可溶解抗原與抗體發(fā)生反應，可變?yōu)椴蝗芙獾某恋恚捶磻牡鞍自谇逑粗星宄乖贵w反應物染色后，可以看到密集沉淀條帶。將蛋白條帶與免疫固定后的沉淀條帶進行比較，得到M蛋白的鑒定與分型。

1.3.3sFLC法 利用散射免疫比濁法通過抗體與游離輕鏈上暴露的抗原決定簇發(fā)生特異性抗原抗體反應進行定量檢測。

1.4統(tǒng)計學處理 數(shù)據采用SPSS19.0軟件進行描述統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示。

2 結 果

2.1MM陽性各分型分布情況 10 287份標本中共檢出1 996份M蛋白的標本，檢出陽性率為19.4%,其中IgG型1 056份，占總檢數(shù)的10.3%,IgA型500份，占4.9%,IgM型96份，占0.9%,IgD型101份，占1.0%,輕鏈型242份，占2.4%。1 996份陽性標本中，IgG型占所有陽性標本的52.9%，其中以IgG-κ型所占比例最高，有651份，占IgG型的61.6%；IgA型占陽性標本的25.1%，以IgA-λ型所占比例最高，有273份，占IgA型的54.6%；IgM型占陽性標本中的4.8%，IgM-κ型所占比例最高，有74份，占IgM型的77.1%；IgD型占陽性標本中的5.1%，IgD-λ型所占比例最高，有97份，占IgD型的96.0%；IgE型僅有1份，故不計入統(tǒng)計；輕鏈型占陽性標本中的12.1%，輕鏈-λ所占比例最高，有182份，占輕鏈型的75.2%。

2.2MM陽性年齡分布情況 將1 996份陽性標本分為<45歲，45～<60歲，60～<75歲，75～<90歲，≥90歲5個年齡段，89份標本來自<45歲人群，579份標本來自45～<60歲人群，982份標本來自60～<75歲人群，331份標本來自75～<90歲人群，14份標本來自≥90歲人群。60～<75歲人群在IgG、IgA、IgM、輕鏈型中均占比最高，IgD型中45～<60歲人群占比最高，其次是60～<75歲人群。見表1。

表1 年齡分布情況

2.3MM陽性性別分布情況 MM陽性中，男性陽性數(shù)(1 138例)是女性陽性數(shù)(858例)的1.33倍。所有分型中，男性占比均高于女性，在IgG、IgA、IgM、IgD型中男性占比分別為54.3%、58.2%、77.1%、60.4%、57.0%，女性占比分別為45.7%、41.8%、22.9%、39.6%、43.0%。IgE型僅有1份，故不計入統(tǒng)計。

3 討 論

本研究中，M蛋白類型構成比從高到低依次為IgG>IgA>輕鏈>IgD>IgM>IgE，輕鏈-κ>輕鏈-λ；MM在60～<75歲人群中發(fā)病率最高，其次是45～<60歲人群；男性發(fā)病率高于女性。值得注意的是，本研究中輕鏈型所占比例較高,且IgD型高于國外報道的2%[4]，提示廣東地區(qū)M蛋白輕鏈型和IgD型較西方國家人群高。有研究報道，M蛋白輕鏈分布中輕鏈-κ型較輕鏈-λ型明顯更多，但是本研究中輕鏈-λ型明顯多于輕鏈-κ型[4]，分析原因可能與IgD-λ型M蛋白較多和游離輕鏈型M蛋白有關。

MM是一種老年病，其中位診斷年齡為69歲，低于40歲的患者較為少見[5]。本研究中，患者發(fā)病年齡集中于45～<75歲，75～<90歲次之，40歲以下和≥90歲者少見。廣東地區(qū)MM陽性檢出年齡段分布略高于周愛花等[6]報道的發(fā)病年齡，是否由于標本來源及區(qū)域性差異有待增加樣本量做進一步統(tǒng)計分析。

MM發(fā)病率男性略多于女性，且受種族和遺傳因素的影響，其發(fā)病也受環(huán)境因素影響，如暴露于農業(yè)及石化工業(yè)的化學品[7]，本研究結果顯示，廣東地區(qū)MM男性發(fā)病率為女性的1.33倍，男女發(fā)病率比例與周愛花等[6]和劉玉梅等[8]報道的相當，表明廣東地區(qū)男女發(fā)病比例與西北蘭州地區(qū)相似。但是，廣東地區(qū)MM各分型男女陽性率明顯高于周愛花等[6]報道的數(shù)據，造成差異的原因可能與臨床檢測技術及方法的聯(lián)合應用有很大關系，是否由于地域或經濟條件及環(huán)境因素有待進一步研究。本研究中，IgD和IgM型MM陽性率男性明顯高于女性，其他文獻對這兩種類型少有統(tǒng)計，尤其是IgM型MM，陽性率為4.8%，提示此型較少見。IgM分型除具有MM的一般臨床表現(xiàn)外，因其相對分子質量較大，易形成五聚體而使血液黏滯性增高，易發(fā)生高黏滯性綜合征，其預后極差。因此，通過聯(lián)合檢測，提高MM檢出率，降低MM的漏診、誤診率，及早發(fā)現(xiàn)、及早預防，對MM的預后治療具有重要意義。