高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的氨甲環(huán)酸分析

鐘紅霞 張梟雄

摘 要：為滿足化妝品中氨甲環(huán)酸的分析要求，本文選擇了高效液相色譜測(cè)定法，經(jīng)甲醇處理樣品、優(yōu)化色譜條件、確定檢測(cè)波長(zhǎng)、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、穩(wěn)定性試驗(yàn)等操作獲得檢出限、回收率以及精密度，最后用于樣品測(cè)定得到準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果，可為化妝品中氨甲環(huán)酸的測(cè)定提供參考。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;測(cè)定;氨甲環(huán)酸

近年來(lái)，美白類化妝品發(fā)展迅速，其中氨甲環(huán)酸因美白褪斑效果顯著成為其原料之一，但目前對(duì)其檢測(cè)尚無(wú)明確標(biāo)準(zhǔn)。因此為保證化妝品安全使用，本文提出了高效液相色譜法用于化妝品中氨甲環(huán)酸的測(cè)定，下面就其測(cè)定要點(diǎn)加以分析。

1 氨甲環(huán)酸概述

之所以在化妝品中應(yīng)用氨甲環(huán)酸，是因?yàn)榘奔篆h(huán)酸屬于蛋白酶抑制劑，可通過(guò)抑制蛋白酶對(duì)肽鍵水解的催化作用，阻止酶活性，進(jìn)而對(duì)黑斑部位表皮細(xì)胞機(jī)能的混亂以及黑色素增強(qiáng)因子群起到抑制作用，并徹底斷絕因紫外線照射而形成黑色素的形成途徑，因此美白褪斑功能顯著，逐漸成為化妝品中最重要的一種美白成分。如果濫用則會(huì)產(chǎn)生一系列的副作用，如頭疼頭暈、視力模糊等癥狀，過(guò)量還可能引發(fā)腹瀉、嘔吐、顱內(nèi)出血等，故為防止氨甲環(huán)酸濫用，保證化妝品使用安全，十分有必要對(duì)其進(jìn)行測(cè)定[1]。具體有離子色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法等測(cè)定途徑，其中高效液相色譜法相對(duì)而言操作簡(jiǎn)單、靈敏高效，對(duì)此，本文構(gòu)建了化妝品中氨甲環(huán)酸的測(cè)定方法。

2 氨甲環(huán)酸的測(cè)定要點(diǎn)

2.1 準(zhǔn)備試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括：購(gòu)自網(wǎng)上商城的面霜、乳液、爽膚水、凝膠、面膜等不同劑型的12批化妝品樣品;加拿大TCR公司生產(chǎn)的w=98%的氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司生產(chǎn)的磷酸二氫鉀、分析純，美國(guó)Fisher公司生產(chǎn)的甲醇、色譜純。所用儀器包括帶有二極管陣列檢測(cè)器的Ultimate3000型高效液相色譜儀;精度為萬(wàn)分之一的AL204電子分析天平和精度為十萬(wàn)分之一的XP205電子分析天平;以及高速冷凍離心機(jī)和VORTEX-5型渦旋混合器。

2.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液以及樣品前處理

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制需要先精確稱量氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品20mg，將其置于規(guī)格為10mL的容量瓶后加入超純水加以溶解和定容，形成2g/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

樣品的前處理首先需要以0.0001g的精度準(zhǔn)確稱取0.5g的化妝品試樣，將其置于離心管（15mL）后加入5%的甲醇溶液，此時(shí)離心管內(nèi)溶液體積在9mL左右，利用渦旋振蕩作用充分而均勻的混合試樣與提取液溶劑，經(jīng)10min超聲提取后加以冷卻至室溫。然后在10mL的容量瓶中轉(zhuǎn)移上述溶液，加入5%甲醇定容后達(dá)到容器刻度，待均勻混合后再轉(zhuǎn)移到離心管，并用高速冷凍離心機(jī)離心處理10min，轉(zhuǎn)速可控制在12000r/min。最后，在0.22μm孔徑濾膜的作用下對(duì)上清液進(jìn)行過(guò)濾后經(jīng)高效液相色譜儀開(kāi)始測(cè)定[2]。

其中5%甲醇的選用是基于一定實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的。因?yàn)榘奔篆h(huán)酸易在水中溶解而幾乎不溶于甲醇，故將水作為提取溶劑，但部分霜?jiǎng)┗蛉閯┮蚝休^多的油脂成分使得氨甲環(huán)酸難以在水中分散，進(jìn)而限制其提取效率，決定加入少量的甲醇于水中，同時(shí)提取溶劑分別為純水、5%甲醇、10%甲醇的條件下考察氨甲環(huán)酸的提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5%甲醇在不同基質(zhì)下均具有最高的提取效率，因此為更好的分散化妝品基質(zhì)，本文在樣品前處理環(huán)節(jié)選用了5%甲醇作為提取劑。

2.3 優(yōu)化色譜條件，確定檢測(cè)波長(zhǎng)

為獲得良好的分離效果，本文選取了三個(gè)不同品牌的C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Shiseido CAPCELL PAK C18 UG120色譜柱的氨甲環(huán)酸不僅具有對(duì)稱的色譜峰，還有更好的峰型，與化妝品雜質(zhì)分離有效，故將其作為色譜條件。再者因氨甲環(huán)酸中的氨基和羧基主要以離子形式出現(xiàn)在溶液中，容易受到pH值和流動(dòng)相離子強(qiáng)度的影響，故在選擇流動(dòng)相時(shí)首先考慮了KH2PO4溶液，并就0.01mol/L、0.02 mol/L和0.05 mol/L濃度的該溶液作了比較分析，證明色譜柱上的氨甲環(huán)酸無(wú)論是保留效果、出峰時(shí)間還是化妝品雜質(zhì)的分離效果均隨著溶液濃度的增大而顯著，不過(guò)峰型不佳且前延，所以為改善峰型、增強(qiáng)保留效果加入了0.2%的H3PO4對(duì)溶液pH進(jìn)行調(diào)節(jié)，即流動(dòng)相體系為0.05 mol/L濃度的KH2PO4溶液+0.2%的H3PO4溶液[3]。

在確定檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)經(jīng)DAD對(duì)氨甲環(huán)酸作了全掃描，分析紫外光譜圖得知在207nm左右出現(xiàn)了最大吸收波長(zhǎng)，考慮到其波長(zhǎng)吸收實(shí)際情況，最終將210nm設(shè)為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱量1mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，經(jīng)稀釋處理達(dá)到10mL，隨后用水將其逐級(jí)稀釋成濃度分別為100mg/L、50mg/L、25mg/L、10mg/L、5mg/L的溶液，根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察線性范圍，最終得到y(tǒng)=0.008 9x+0.012 7的回歸方程和R2=1的相關(guān)系數(shù)，由此說(shuō)明5-100mg/L范圍內(nèi)的氨甲環(huán)酸與峰面積響應(yīng)值之間具有良好的線性關(guān)系。接著進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，即以樣品前處理操作提取加標(biāo)量為20mg/L乳液樣品，分別置于室溫環(huán)境中0、1h、2h、4h、8h、12h和24 h，然后基于設(shè)定的色譜條件下對(duì)其峰面積進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果得到0.026%的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，說(shuō)明樣品前處理下制備的樣品在24h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.5 獲得檢出限與定量限

取空白樣品加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后進(jìn)行渦旋混勻得到加標(biāo)樣品，經(jīng)前處理提取后測(cè)定信噪比，并分別以S/N=3和S/N=10對(duì)應(yīng)的被測(cè)化合物含量作為方法的檢出限和定量限，最終得到檢出限LOD=10.7μg/g-22.2μg/g，定量限LOQ=28.9μg/g-48.0μg/g。

2.6 計(jì)算回收率與精密度

選取當(dāng)下市場(chǎng)上普遍添加氨基環(huán)酸的面霜、乳液、爽膚水、面膜、凝膠5種基質(zhì)作為空白基質(zhì)用于加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，并在線性范圍內(nèi)設(shè)定10mg/L、50mg/L和100mg/L分別作為低、中、高三個(gè)水平的加標(biāo)量進(jìn)行計(jì)算，得到氨甲環(huán)酸的平均加標(biāo)回收率與RSD值（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）分別為95.23%-110.40%和1.24%-3.59%。

3 測(cè)定樣品及其結(jié)果分析

基于以上測(cè)定方法對(duì)購(gòu)自網(wǎng)上商城的面霜、乳液、爽膚水、凝膠、面膜等不同劑型的12批化妝品樣品中的氨甲環(huán)酸進(jìn)行檢測(cè)，其中2批樣品未達(dá)到檢出限，10批化妝品樣品中所含氨甲環(huán)酸在0.48%-3.12%之間。故本文提出的高效液相色譜測(cè)定法重現(xiàn)性良好，測(cè)定準(zhǔn)確可靠，可為相關(guān)部門監(jiān)測(cè)美白祛斑類化妝品提供一定的技術(shù)支持。

4 結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，基于高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的氨甲環(huán)酸時(shí)，先用5%甲醇溶液提取氨甲環(huán)酸，經(jīng)Shiseido CAPCELL PAK C18 UG120色譜柱分離，以體積比為5：95的KH2PO4溶液+0.2%的H3PO4溶液為流動(dòng)相體系，設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，在此條件下獲得了5-100mg/L內(nèi)良好的線性關(guān)系和大于0.999的相關(guān)系數(shù)，以及LOD=10.7μg/g-22.2μg/g、LOQ=28.9μg/g-48.0μg/g、回收率=95.23%-110.40%和RSD=1.24%-3.59%，且24h內(nèi)制備的樣品性質(zhì)穩(wěn)定。經(jīng)樣品測(cè)定后進(jìn)一步說(shuō)明該法簡(jiǎn)單可靠，適用于化妝品中氨甲環(huán)酸的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

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[3]唐毓萍，唐欣，孫培文，林藝青，李征.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中氨甲環(huán)酸的含量[J].日用化學(xué)工業(yè)，2018， 48（01）：57-60.