雞骨草中不同藥用部位相思子堿和夏佛塔苷含量測定

刁 璇，吳 熙，丘藝涵，羅雅麗，王燕明，王淑紅

（廣東省深圳市藥品檢驗研究院，廣東 深圳 518057）

雞骨草為嶺南常用草藥，初載于《嶺南采藥錄》：“葉似鐵線，形如冬瓜子，對生。”［1］《新編中藥志》中記載雞骨草來源于豆科蝶形花亞科相思子屬植物廣州相思子［2］。雞骨草最早收載于1977 年版《中國藥典》，2015 年版《中國藥典（一部）》規定：雞骨草為豆科植物廣州相思子Abrus cantoniensis Hance 的干燥全株，全年均可采挖，除去泥沙，干燥［3］，性涼，味甘淡，具有清熱解毒、疏肝止痛之功效［4］，廣泛用于黃疸，脅肋不舒，胃脘脹痛，急、慢性肝炎及肝硬化腹水等疾病［5-8］，是一種藥食同源中藥材，可在春夏季用來煲湯作為食療［9］。雞骨草全草含生物堿、甾醇、皂苷、黃酮類、大黃酚類、大黃素甲醚氨基酸等化合物［10-11］。因雞骨草藥材炮制方法屬于切制，參照2015 年版《中國藥典（一部）》凡例規定：“正文中飲片炮制項為凈制、切制的，其飲片名稱或相關項目亦與藥材相同。”雞骨草藥材項下僅有鑒別項，無含量測定項，其質量控制有待完善。本研究中建立了測定雞骨草中生物堿類成分相思子堿［12］和黃酮碳苷類成分夏佛塔苷含量的超高效液相色譜（UPLC）法，并比較了不同藥用部位2 種活性成分的含量，為雞骨草飲片的質量控制提供新依據，并對雞骨草不同藥用部位的質量進行評價。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermo Ultimate 300 型超高效液相色譜儀（美國Thermo 公司，包括四元梯度泵，自動進樣器，Thermo紫外檢測器；XS205 型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為0.01 mg）；WNB14 型恒溫電熱鍋（德國Memment 公司）；Milli-Q 型超純水機（美國Millipore 公司）。

1.2 試藥

水為超純水；乙腈、甲酸均為色譜純，其余試劑均為分析純；相思子堿對照品（上海詩丹德標準技術服務有限公司，批號為5891，含量為99.5%）；夏佛塔苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111921-201703，含量為95.6%）；雞骨草的不同藥用部位［雞骨草全草Herbs of Abri Herba（S1，S3～S5 產地為廣東；S2 產地為四川）；雞骨草根Roots of Abri Herba（S6 產地為貴州；S7～S8，S10 產地為廣西，S9 產地為廣東）；雞骨草莖Stem of Abri Herba（S11～S15 產地為廣西）；雞骨葉Leaf of Abri Herba（S16～S17，S20 為廣西；S18～19 產地為廣東）］均購于各地藥材市場，經廣東省深圳市藥品檢驗研究院中藥室王淑紅主任藥師鑒定為正品，分別為廣州相思子Abrus cantoniensis Hance 的干燥全草、根、莖、葉。

圖1 高效液相色譜圖

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：UPLC HSS T3 C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脫（見表1）；流速：0.3 mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：2 μL。相思子堿和夏佛塔苷峰理論板數均大于20 000。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

粉碎雞骨草不同藥用部位，過50 目篩，取1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加50%乙醇100 mL，加熱回流2 h，濾過，濾液蒸干，樣品S1～S15 的殘渣用50%乙醇溶解，轉移至10 mL 容量瓶中，并稀釋至刻度；樣品S16～S20的殘渣用50%乙醇溶解，轉移至100 mL 容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。取相思子堿、夏佛塔苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度分別為126.7，240.1 μg/mL 的對照品貯備液；分別精密量取上述貯備液2 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取2.2 項下對照品貯備液0.4，1，2，4，10 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，按擬訂色譜條件測定，以對照品質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得相思子堿和夏佛塔苷回歸方程Y相=0.158 7 X相+0.054 1（r=0.999 9），Y夏=0.245 4 X夏+0.069 6（r=1.000 0）。結果表明，兩者質量濃度分別在5.068～126.7 μg/mL，9.602～240.1 μg / mL（ n =5）范圍內與峰面積線性關系良好。

表1 流動相梯度洗脫程序

穩定性試驗：取樣品（編號為S5），依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，16，24，48 h 時進樣2 μL，記錄峰面積。結果相思子堿、夏佛塔苷峰面積的RSD 分別為0.32%，0.21%（n=6），表明供試品溶液在室溫放置48 h內基本穩定。

精密度試驗：取混合對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣6 次，記錄相思子堿、夏佛塔苷的峰面積。結果的RSD 分別為0.28%，0.31%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品（編號為S5）粉末，依法平行制備6 份供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，結果相思子堿、夏佛塔苷平均含量分別為0.244 4，0.437 4 mg/g，RSD 分別為0.41%，0.36%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批（編號為S5）已知含量的雞骨草葉樣品9 份，每份1 g，精密稱定，分別精密加入一定量相思子堿、夏佛塔苷對照品溶液，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，并計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取20 批雞骨草藥材適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，采用回歸方程法計算含量。結果見表3。

表3 雞骨草中2 種成分含量測定結果（mg/g）

3 討論

3.1 提取方法選擇

曾對不同提取溶劑（甲醇、70%甲醇、50%乙醇）及不同提取方法（加熱回流、超聲提取）進行考察，以提取效率最高、提取方法穩定、環境污染小為指標，且黃酮類化合物多以中濃度乙醇［13］提取效率最高，故最終選擇50%乙醇為提取溶劑、加熱回流。

3.2 主要活性成分選擇

雞骨草的主要活性成分為生物堿和黃酮類物質，生物堿類物質相思子堿能減少小鼠耳廓質量，并減輕其腫脹程度，還能改善其免疫功能，增加免疫器官如胸腺、脾臟的質量［14］，故相思子堿成為雞骨草抗肝炎的有效成分。黃酮類物質夏佛塔苷可通過減少脂質的合成來促進脂質代謝，對脂肪肝起保護作用［15-16］，故選擇相思子堿和夏佛塔苷為特征性指標成分。

3.3 不同藥用部位含量差異

曾對雞骨草不同藥用部位進行分析，20 批樣品中相思子堿含量基本一致，夏佛塔苷含量差異明顯（葉＞莖＞全草＞根），葉中的含量約為全草的10 倍，與雞骨草不同部位的醇溶性浸出物結果一致，對雞骨草藥材的采摘有一定指導意義。

3.4 方法評價

本研究中建立的UPLC 法簡單，選用溶劑適宜，檢測波長合理，色譜分離效果良好，可為雞骨草飲片的質量控制提供參考。