富馬酸喹硫平脂質立方液晶制備工藝研究*

田 勇，李見春，李婷婷，侯方燕

（1. 蚌埠醫學院第一附屬醫院，安徽 蚌埠 233000； 2. 蚌埠醫學院藥學院，安徽 蚌埠 233000）

富馬酸喹硫平（QF）是經典的第2 代抗精神病藥物，主要通過拮抗中樞D2受體和5-HT2受體發揮作用，用于治療精神病療效佳，且藥物安全系數較高，對精神分裂癥的療效肯定，同時對狂躁癥也有一定療效。目前，市場多為片劑，口服易產生心悸、嗜睡、頭暈、食欲不振和便秘等不良反應［1-2］。脂質立方液晶（LCNP）是兩親性聚合物，分散于水溶液時可自發組裝形成一種新的分散體系，能包封不同極性的藥物［3］。立方液晶的穩定性優于脂質體，進入人體后受到免疫系統的干擾較少［4-5］。對于溶解性較差的藥物，立方液晶內部獨特的立方相結構可包載各種不同極性的藥物，顯著增加難溶性藥物的生物利用度，減少毒副作用［6-7］。本研究中將富馬酸喹硫平制備成立方液晶納米粒，以降低喹硫平的不良反應，同時提高生物利用度。為確保富馬酸喹硫平立方液晶（QF-LCNP）具有較高的包封率，對QF-LCNP 的制備工藝進行了優化。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Nano-ZS90 型粒度檢測儀（英國Marlven 公司）；JN-04HCF 型高壓均質機（聚能生物科技公司）；Milli-A10 型純水機（英國Milibol 公司）；TGR16-WJ 型高速離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；TB5210FB 型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限責任公司，功率為180 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

甘油單油酸酯（上海Boilmen 公司，批號為1921036）；泊 洛 沙 姆407（上 海Sigma 公 司，批 號 為163223）；甲醇、乙腈（色譜純，國藥集團，批號為176331）；富馬酸喹硫平（成都貝斯特股份有限公司，批號為131227FM，含量為99.4%）；透析袋（截留相對分子質量為8 000～14 000，美國Viskase 公司，批號為201810112111）。

2 方法與結果

2.1 處方篩選與驗證

圖1 偏光顯微鏡觀察到的液晶形態

采用注入法制備QF-LCNP，將脂質材料甘油單油酸酯（GMO）與穩定劑泊洛沙姆407（F127）按一定比例混合，融化后攪拌成均一的澄明液體，向脂質溶液內逐滴加入同溫足量的蒸餾水，邊滴加邊攪拌，經高壓均質機后，形成立方液晶納米粒。參考文獻［8-9］，根據GMO 形成立方液晶的三元相圖，對形成立方液晶所需的原料比例進行初步篩選。取不同比例的GMO 和F127適量，精密稱定，60 ℃水浴融化，形成均一脂質液，向脂質液內緩慢加入不同質量分數（wt%）的蒸餾水，磁力攪拌10 min，通過高壓均質機均質一定次數，即得白色乳狀液。偏光顯微鏡觀察并記錄樣品形態。詳見圖1 和表1。

表1 GMO 與F127 的處方比例對液晶形態的影響

由圖1 可見，各液晶形態差異，層狀液晶為片狀雪花樣結構，非液晶在偏光下呈現無序樣結構，立方液晶的光學特性為各同向性，在偏光顯微鏡下無偏光，故呈現暗視野。由表1 可見，當含水量在較低區間（20%～40%）范圍內時，大多為層狀液晶和非液晶形態，當含水量在較高區間（70%以上）范圍內時，基本形成立方液晶，表明立方液晶的形成與含水量有關，同時GMO 與F127的比例也有一定影響，GMO 質量比重越高，越易形成立方液晶，基本符合GMO 的三元相圖［10］。

2.2 處方工藝優化

根據處方工藝的篩選與驗證，選擇影響藥物包封率較大的4 個因素：蒸餾水用量（mL，因素A），藥物占GMO 質量比（因素B），甘油單油酸酯與F127 的質量比（兩者總質量為1 g，因素C），攪拌時間（min，因素D），將以上4 個因素設計成L9（34）的正交試驗，以QF-LCNP的包封率為考察指標，因素水平見表2，正交試驗結果見表3，方差分析見表4。由表2 可見，各因素對包封率的影響程度為C ＞A ＞B ＞D，因素A 及因素C 對包封率有顯著影響。故富馬酸喹硫平立方液晶的最佳處方工藝為A3B2C1D3，即富馬酸喹硫平投藥量為54 mg，蒸餾水為40 mL，甘油單油酸酯投藥量為900 mg，泊洛沙姆407 投藥量為100 mg，攪拌時間為18 min。

表2 富馬酸喹硫平立方液晶處方篩選的影響因素水平

表3 正交試驗結果

表4 包封率方差分析結果

2.3 制備工藝優化

2.3.1 均質壓力考察

高壓均質機預熱10 min，用蒸餾水沖洗均質機內部，將恒溫水接通入均質槽內，均質機內槽保持恒溫，溫度設置為25 ℃，將QF-LCNP 放入高壓均質機內，固定均質次數為5 次，調整均質壓力，分別設為1 000，1 500，2 000，2 500 bar（1 bar=0.1 MPa），收集均質后QF-LCNP，測定藥物的包封率及粒徑。結果見表5。可見，當均質次數設為定值時，均質壓力對富馬酸喹硫平包封率和平均粒徑影響較大，隨著均質壓力的增高，QF-LCNP 的包封率和粒徑逐漸降低，當均質壓力超過2 000 bar 時，粒徑下降不明顯。當均質壓力過高時有可能會破壞一部分立方液晶的結構，故選擇2 000 bar 作為制備富馬酸喹硫平立方液晶納米粒的最優制備工藝。

表5 不同均質壓力對包封率及粒徑的影響（n=3）

2.3.2 均質次數考察

高壓均質機預熱10 min，用蒸餾水沖洗均質機內部，將恒溫水接通入均質槽內，均質機內槽保持恒溫，溫度設為25 ℃，將QF-LCNP 放入高壓均質機內，設置均質壓力為最優1 500 bar，均質次數分別為2，4，6，8 次，收集均質后QF-LCNP，測定包封率及粒徑，結果見表6。可見，均質次數對富馬酸喹硫平的包封率和平均粒徑均有影響，隨著均質次數的增加，立方液晶納米粒的粒徑逐漸下降，當均質次數超過6 次時，包封率有所降低，粒徑下降不明顯。故最終選擇循環次數為6 次作為最優制備工藝條件。

表6 不同均質次數對包封率及粒徑的影響（n=3）

2.4 制劑含量測定方法建立

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（含0.5%三乙胺，冰醋酸調節pH 至6～8，78 ∶22，V/ V）；流速：1 mL/min；檢測波長：289 nm；柱溫：45 ℃；進樣量：20 μL。

2.4.2 溶液制備

取富馬酸喹硫平對照品0.5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶，用甲醇稀釋并定容，4 ℃冰箱保存，備用。臨用前用甲醇稀釋。取富馬酸喹硫平立方液晶納米粒5 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，0.22 μm 濾膜過濾，即得。

2.4.3 方法學考察

標準曲線繪制：精密量取富馬酸喹硫平對照品貯備液，用甲醇稀釋成質量濃度分別為1，2，4，8，16，32，64，128 μg / mL 的系列標準溶液。按擬訂色譜條件進樣20 μL，記錄峰面積。以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=28 612 X +29 549，R2=0.999 7（n=8）。結果表明，富馬酸喹硫平質量濃度在1～128 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密量取富馬酸喹硫平對照品貯備液，配置低、中、高質量濃度（分別為4，16，64 μg/mL）的對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣6 次，記錄峰面積。結果的RSD 為1.32%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：制備同批QF-LCNP 樣品，分別于0，2，4，6，8，12，24 h 時按擬訂色譜條件進樣測定。結果的RSD 為1.14%（n=7），表明供試品溶液在24 h 內穩定。

加樣回收試驗：精密量取同一已知含量的QF-LCNP供試品溶液9 份，每3 份1 組，置10 mL 容量瓶中，分別加入相當于標示量80%，100%，120%的對照品溶液適量，用甲醇稀釋至刻度，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結果見表7。

表7 加樣回收試驗結果（ n=9）

2.5 體外藥物釋放

采用透析法［11］，釋放介質選取pH 7.4 磷酸鹽（PBS）緩沖液，以富馬酸喹硫平對照品為對照，進行體外釋藥試驗。分別精密量取QF 對照品溶液和QF-LCNP各0.5 mL，將樣品放入已處理好的透析袋內，兩端扎緊，浸入100 mL pH 7.4 PBS 緩沖液中，密封，維持溫度在37 ℃，磁力攪拌，于設定時間點取樣，同時補充相同體積的釋藥介質，以保證透析環境不變。取1 mL 透析介質，0.22 μm 微孔濾膜濾過，測定每個取樣點時的藥物含量，計算累積釋放度。結果見圖2。

圖2 QF-LCNP 和喹硫平溶液釋放曲線（n=3）

可見，QF 溶液在前10 h 內的累積釋放度約達到100.00%，而富馬酸喹硫平脂質立方液晶在前10 h 內的累積釋放度約為58.00%，體外48 h 的累積釋放度約為84.67%，相比于QF 溶液有一定的緩釋效應。

3 討論

以富馬酸喹硫平的包封率為指標，采用單因素和正交試驗設計，從處方配比中可發現，立方液晶的形成與GMO/F127 的比例及水含量相關，含水量低于40%較難形成立方液晶，且存在一定的層狀液晶及非液晶形態；當水含量超過70%時，基本可形成立方液晶體系。另外，GMO 質量比重與立方液晶的形成有關，因為構成立方液晶的整體骨架主要是甘油單油酸酯，F127 的作用則是嵌入骨架縫隙的穩定劑，因此引入過多的穩定劑F127 會干擾立方液晶的形態。

在選取影響包封率的4 個因素中，分散相用量和GMO 與F127 質量比均有統計學差異，表明該因素對包封率有顯著影響，符合立方液晶的晶體特性［12-14］。

制劑通過超聲、均質后制備的納米顆粒能顯著提高藥物的包封率。目前，制備立方液晶多采用納米均質法，可實現低溫下水浴循環制備納米粒，制備過程中能保證粒子結構的穩定性。故本試驗中選用均質機制備立方液晶納米粒，對QF-LCNP 制備過程中的影響因素進行考察。均值壓力和均質次數在一定范圍內可影響藥物的包封率和粒徑，由于在均質過程中增加均質壓力和均質次數可能會導致儀器溫度升高，破壞立方液晶結構，故在試驗前加入循環恒溫引流水，保證均質管內的溫度恒溫。均質壓力超過1 500 bar 時，藥物的包封率有所降低，可能是過高的能量破壞了立方液晶結構或導致立方液晶晶型的轉變。

體外藥物釋放是考察緩釋制劑體外釋放速率的有效方法。本試驗中采用透析法、高效液相色譜法測定藥物釋放量，結果顯示，QF-LCNP 具有明顯的緩釋作用。此外，文獻［15］的研究表明，立方液晶能明顯提高藥物腦部吸收，為QF-LCNP 的體內試驗提供了一定依據。本試驗中最后優化得到的處方各項指標均在正常范圍內，確定了富馬酸喹硫平脂質立方液晶制備工藝的可行性，可為QF-LCNP 的深入研究提供參考。