在肝組織網(wǎng)狀纖維染色中復染方法的選擇

張紅雷，單天鳳，王 芳，邵 晨，楊 磊，王泰齡?

（1.中日友好醫(yī)院 病理科，北京 100029；2.天津醫(yī)科大學，天津 300070）

網(wǎng)狀纖維染色在肝病病理診斷中起著關鍵作用。在不同的肝臟疾病中往往需要配合不同的復染方法以清晰顯示關鍵的組織及細胞結構，有利于病變的分析。本文對比了3 種不同復染方法及無復染法在網(wǎng)狀纖維染色中的不同特點，并進行了分析和總結，為肝病病理診斷染色選擇提供必要的依據(jù)和參考。

1 材料和方法

1.1 材料

組織切片：我院病理科肝組織標本，中性福爾馬林固定，切片厚4μm。網(wǎng)狀纖維染色-渡邊染色法[1]試劑：酸性高錳酸鉀、草酸、硫酸鐵銨、氨銀液、還原液、氯化金。復染試劑：核固紅、麗春紅、亮綠、Schiff 液、蘇木素。

1.2 方法

1.2.1 無復染無分化

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；脫水透明封固。

1.2.2 復染核固紅

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，水洗；核固紅復染5min，脫水透明封固。

1.2.3 復染Masson

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，麗春紅3min，水洗；磷鉬酸1min，亮綠2min，水洗；脫水透明封固。

1.2.4 復染過碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff，PAS）染色

常規(guī)脫蠟至水，酸性高錳酸鉀5min，水洗；草酸2min，水洗；鐵明礬1min，水洗；氨銀液10～60s，還原數(shù)秒，水洗；氯化金分化1～3min，Schiff 液10min，水洗；蘇木素復染，脫水透明封固。

2 結果

無復染無分化：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，背景無色或淡黃色（圖1，見彩插一）。復染核固紅：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，細胞核呈紅色，背景淡紅色（圖2，見彩插一）。復染Masson：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，細胞核呈紅色，肌纖維呈深紅色，背景淡紅色（圖3，見彩插一）。復染PAS：網(wǎng)狀纖維呈黑色，肝細胞漿呈櫻桃紅色，背景淡紅色（圖4，見彩插一）。

3 討論

網(wǎng)狀纖維染色在病理診斷中應用廣泛，對肝病病理尤為重要。該染色可清晰反映肝病變的網(wǎng)狀支架形態(tài)[2]，并在一定程度上區(qū)分網(wǎng)狀纖維及膠原纖維。一方面通過顯示肝板網(wǎng)架斷離、塌陷、膠原沉積甚至纖維化等，判斷肝臟疾病的性質、程度及轉歸。另一方面還可用于觀察不同肝臟腫瘤細胞的排列模式，從而對判斷腫瘤性質及來源亦有重要意義。根據(jù)觀察不同病變的需要，在網(wǎng)狀纖維染色的基礎上，附加不同復染方法，旨在對其它目標組織結構或細胞有選擇性地突出顯示，對疾病的觀察及診斷往往起到關鍵作用。

無復染無分化法可以區(qū)分肝組織膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的變化，反映肝實質損傷或纖維化程度，在一般的肝病病理診斷中應用廣泛（圖1，見彩插一）。

復染核固紅后，在原網(wǎng)狀纖維染色顯示肝板結構的基礎上，還可顯示肝細胞損傷，如大泡性脂變（見圖2，與圖1為同一部位連續(xù)切片）。與無復染法相比，病變觀察可以更加細致全面。

復染Masson 后，網(wǎng)織纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，肝細胞呈淺紅色，肝細胞胞核、紅細胞及平滑肌呈深紅色。優(yōu)勢較大，特別在重度肝炎病變中，既標記出網(wǎng)織纖維同時又顯示膠原纖維，2 種纖維組織顏色對比度高，差別鮮明，在肝組織壞死帶內可清晰顯示膠原纖維沉積的情況，以區(qū)分較為新鮮的壞死帶或纖維化帶，從而判斷病變發(fā)生的進程，是評價肝組織結構損傷、修復和纖維化程度的主要依據(jù)[3]。因此，該復染方法應用廣泛。此外，Masson 還可以將平滑肌細胞等通過麗春紅標記成紅色，可以清晰顯示匯管區(qū)間質內的動脈或門脈管壁的病變（圖3，見彩插一）。較網(wǎng)狀纖維染色（方法1.2.1）而言，復染Masson 對技術要求更高。玻璃器皿必須十分清潔，試劑必須達到相應純度，各試劑比例必須精確[4]，其中氫氧化銨的量不能過多，否則將降低染色的敏感性，使網(wǎng)狀纖維浸染較弱或達不到浸染效果[5]。另外，氨銀液染色時間應精確、網(wǎng)狀纖維鍍銀要恰好，染色程度達標的同時，其余部位要避免非特異性黑顆粒沉積，以免背景過深或染色劑疊加等，影響后續(xù)復染效果。

雖然復染Masson 優(yōu)勢頗多，應用廣泛，但仍有一些特殊肝病需要其它復染方法。肝細胞富含糖原，PAS 染色可以將肝細胞染成櫻桃紅色。在很多肝臟血管疾病中，例如肝小靜脈閉塞病引起的靜脈回流障礙，小葉中心帶肝實質破壞嚴重，復染PAS，可顯示嚴重破壞的肝網(wǎng)架結構及剩留的肝實質（圖4，見彩插一），有利于辨別肝細胞損傷[3]，對于該類疾病的診斷起著關鍵作用。

綜上，4 種復染方法由于復染的目標組織或細胞不同，決定了各自在不同肝臟病變中的染色優(yōu)勢，熟練掌握每種復染方法的優(yōu)缺點，并在疾病診斷中合理應用，必將有助于疾病診斷。此外，不同的復染方法對技術的要求也有所不同，技師應仔細認真，與診斷醫(yī)師充分溝通與合作，更好地服務臨床。

圖1 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，背景無色或淡黃色。

圖2 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈棕黃色，細胞核呈紅色，背景淡紅色。

圖3 網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈綠色，細胞核呈紅色，肌纖維呈深紅色，背景淡紅色。

圖4 網(wǎng)狀纖維呈黑色，肝細胞漿呈櫻桃紅色，背景淡紅色。