氣相色譜法測定沃柑中毒死蜱丙溴磷和三唑磷殘留的前處理方法研究

陸燕 黎施展 石杰東 義國通 農(nóng)時鋒 湯薇

摘要：分別采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定法》和QuEChERS方法對沃柑樣品進(jìn)行前處理，采用氣相色譜法測定樣品中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留量。通過分析2種前處理方法的試驗效果，建立更適合沃柑的農(nóng)殘檢測快速有效的方法。試驗結(jié)果表明：QuEChERS方法測定毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的檢出限為0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，完全符合檢測要求，且QuEChERS前處理方法所用的樣品處理時間、試劑用量和廢液量均較少，所以該方法可適用于氣相色譜法檢測沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留。

關(guān)鍵詞：QuEChERS;毒死蜱;丙溴磷;三唑磷;氣相色譜;農(nóng)藥殘留

中圖分類號：S-3文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200815007

收稿日期：2020-07-08

作者簡介：陸燕（1982-），女，本科，農(nóng)藝師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測;通訊作者黎施展（1981-），女，本科，高級工程師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測。

沃柑是以色列研發(fā)的柑橘新品種，因具有樹勢強(qiáng)健、熟期晚、采收期長、果實外觀漂亮且低酸高糖、脆嫩多汁等特點，同時能夠彌補(bǔ)我國晚熟柑橘類比例少的空間，近年來深受果農(nóng)的青睞。從2012年開始，廣西自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳實施優(yōu)果工程和特色果業(yè)提升工程，將沃柑引入試種，到2019年，廣西的沃柑種植面積已達(dá)13.33萬hm2。隨著種植面積的不斷擴(kuò)大，對沃柑病蟲害的防治尤為重要。沃柑常見的病蟲害有黃龍病、潰瘍病、紅蜘蛛、蚜蟲、介殼蟲等，蟲害的發(fā)生往往成為病害傳播的媒介，因此在沃柑種植過程中，會多次噴施殺蟲劑預(yù)防病蟲害的發(fā)生。在監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，沃柑檢出率最高的是毒死蜱、丙溴磷和三唑磷這3種廣譜性殺蟲劑。

目前，我國農(nóng)產(chǎn)品檢測機(jī)構(gòu)對毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留的檢測多采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定法》[1]進(jìn)行前處理和使用氣相色譜儀進(jìn)行定性和定量地檢測，本文簡稱A法。該方法存在耗時較長，消耗的有機(jī)試劑和排放的廢液多，對檢測人員身體產(chǎn)生的危害較大等缺點[2]。2003年美國農(nóng)業(yè)部針對蔬菜水果的農(nóng)殘檢測開發(fā)了QuEChERS方法—快速樣品前處理技術(shù)，本文簡稱B法。該方法具有操作簡單、快速有效、穩(wěn)定安全的特點，適用于種植業(yè)類農(nóng)藥殘留的檢測[3-9]。QuEChERS方法自問世以來，引起了廣泛關(guān)注，科研工作者對該方法進(jìn)行不斷改進(jìn)，使其成為農(nóng)藥殘留檢測的首選前處理方法[10] 。本文旨在研究QuEChERS前處理方法應(yīng)用于氣相色譜儀來測定沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留的可靠性，以期開發(fā)出快速有效的沃柑農(nóng)殘檢測方法。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1樣品制備

將3kg沃柑按四分法縮分后，全果放入攪拌機(jī)搗碎成勻漿狀態(tài)備用。

1.1.2主要儀器設(shè)備

7890B氣相色譜儀（美國Agilent公司），L530離心機(jī)（湖南湘儀公司），（H1650-W）離心機(jī)（湖南湘儀公司），T25高速分散機(jī)（德國IKA公司），VORTEX-GENIE2漩渦混勻器（美國SI公司），TE421-L天平（賽多利斯科學(xué)儀器公司）、EH20D電熱板（北京萊伯泰科公司）、飛利浦?jǐn)嚢铏C(jī)。

1.1.3試劑

毒死蜱、丙溴磷、三唑磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg·L-1），購于天津阿爾塔科技有限公司;QuEChERS萃取試劑包和凈化管（PSA 50mg、PC 50mg、C18 50mg、MgSO4 150mg）均為美國Agilent公司生產(chǎn);氯化鈉（分析純）、乙腈、丙酮為美國TEDIA公司色譜純試劑。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

100mg·L-1的毒死蜱、丙溴磷、三唑磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮配制成10mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，測定時，再用基質(zhì)液配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.2試驗設(shè)置

分別設(shè)置一個空白樣和0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-13個添加濃度水平，每個水平重復(fù)6次。

1.2.3樣品前處理

A法前處理：準(zhǔn)確稱取25.00g沃柑勻漿樣品于錐形瓶中，加入50.0mL乙腈，勻漿機(jī)高速勻漿2min后濾紙過濾，濾液收集到裝有6g氯化鈉的100mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1min后，靜置30min，吸取上清液10.00mL放入150mL燒杯中，80℃電熱板加熱，蒸發(fā)近干，加入2.0mL丙酮，后轉(zhuǎn)移至15mL刻度離心管丙酮定容5.0mL，在漩渦混合器上混勻，0.22μm濾膜過濾后裝瓶待測。

B法前處理：準(zhǔn)確稱取15.00g沃柑勻漿樣品于50mL塑料離心管中，加入15.0mL乙腈、QuEChERS萃取試劑包和均質(zhì)子，振蕩1min后5000r·min-1離心5min。取1.5mL上清液至凈化管，振蕩混勻后10000r·min-1離心5min，0.22μm濾膜過濾后裝瓶待測。

1.2.4儀器條件

色譜柱：DB-17（30m×530μm×1.5μm）;進(jìn)樣口溫度：220℃;初始溫度150℃，保持2min，以8℃·min-1的速率升至250℃，保持12min;載氣：氮氣（≥99.999%），流速：10mL·min-1;燃?xì)猓簹錃猓ā?9.999%），流速：75mL·min-1;助燃?xì)猓嚎諝猓魉伲?00mL·min-1;檢測器溫度：250℃;尾吹氣流量：60 mL·min-1;進(jìn)樣量1.0μL。

1.2.5計算

準(zhǔn)確稱取樣品，分別用A法和B法前處理后上機(jī)測定，計算出檢出限（LOD）、農(nóng)藥殘留回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

根據(jù)GB/T 5009.1-2003食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分總則中對于色譜法檢出限的定義，色譜儀最低響應(yīng)值為S=3N （N為儀器噪音水平），則檢出限按公式進(jìn)行計算：

檢出限=S/b

式中，S為儀器噪音的3倍，即儀器能分辨的最小物質(zhì)信號;b為標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中的斜率。

農(nóng)藥殘留回收率的計算：

式中，P為回收率（%）;C為測定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）;A為樣品中所含該農(nóng)藥殘留的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）;B為添加的標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）。

精密度（RSD）的計算方法：

式中，SD為n次測量標(biāo)準(zhǔn)偏差（mg·kg-1）;Xi為第i次測量的測量值（mg·kg-1）;x-為n次測量的算術(shù)平均值（mg·kg-1）;n為測量次數(shù)。

2結(jié)果與分析

2.1前處理消耗情況

按照1.2.2試驗設(shè)置，每個前處理方法共處理19個樣品。對2種前處理方法所消耗的時間、試劑和產(chǎn)生的廢液量進(jìn)行比較，見表1。對比發(fā)現(xiàn)，B法即QuEChERS前處理方法的樣品處理用時較少、試劑用量和廢液量均大大少于A法，在消耗優(yōu)于A法。

2.2線性范圍和檢出限

將混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液用基質(zhì)液稀釋，配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別繪制質(zhì)量濃度（X軸）與峰面積（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)色譜儀最低響應(yīng)值為S=3N （N為儀器噪音水平）和標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中斜率的比值，計算檢出限（LOD）。結(jié)果表明，A、B2種前處理方法在0.04～0.40mg·L-1濃度范圍內(nèi)毒死蜱、丙溴磷和三唑磷線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，檢出限均為0.002mg·kg-1，均能夠滿足測定水果中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的要求[11]，見表2。

2.3回收率和精密度

稱取沃柑勻漿樣品，分別添加3個不同濃度水平（0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-1）的3種農(nóng)藥（毒死蜱、丙溴磷、三唑磷）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按A和B方法進(jìn)行前處理，每個水平做6次重復(fù)試驗，計算各添加水平的回收率和精密度，結(jié)果見表3。由表3可知，在3個添加水平下，A法測定3種農(nóng)藥的平均回收率在100%～127.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為3.0%～11.8%;B法測定3種農(nóng)藥的平均回收率在72.9%～91.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，2種前處理方法測定的準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到多農(nóng)殘檢測方法的要求。

3結(jié)論

本試驗通過對沃柑樣品分別進(jìn)行《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定法》和QuEChERS法前處理，分析樣品中毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的殘留回收率、方法檢出限、精密度，驗證QuEChERS前處理方法對氣相色譜法測定農(nóng)藥殘留的可靠性。試驗結(jié)果表明，采用QuEChERS方法處理的沃柑樣品，經(jīng)氣相色譜儀測定，毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的檢出限為0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，完全符合農(nóng)殘檢測的要求。通過本研究，建立了QuEChERS前處理方法結(jié)合氣相色譜儀測定的方法，可用于沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的殘留檢測。該方法快速有效，大大提高了檢測效率，在沃柑大量上市時，能縮短檢測時間，及時供應(yīng)市場。

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（責(zé)任編輯周康）