左西孟旦聯合高容量血液濾過對膿毒癥心肌損傷患者免疫功能的影響

呂品

膿毒癥是感染性因素、燒傷等原因引起的臨床常見急危重癥，其發病率在全球范圍內呈不斷上升趨勢[1,2]。合并心肌損傷是膿毒癥最常出現的并發癥，患者病死率高達70%～90%[3,4]。研究顯示，免疫功能紊亂在膿毒癥發生發展中發揮重要作用，是導致心肌損傷的重要病理機制[5,6]。高容量血液濾過(HVHF)是治療膿毒癥及其并發癥的重要措施，能夠有效清除炎性介質，恢復內環境穩態，改善預后[7]。左西孟旦是一種新型鈣離子增敏劑，因其正性肌力、擴血管作用已經應用于多種心臟疾病的治療中[8]。本研究探討了左西孟旦聯合HVHF對膿毒癥心肌損傷患者免疫功能的影響，以期為此類疾病的治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2016年1月至2019年1月我院收治的膿毒癥心肌損傷患者60例納入研究范圍，隨機分為對照組和治療組，每組30例。對照組男18例，女12例；年齡41～72歲，平均年齡(56.18±7.05)歲；治療組男20例，女10例；年齡42～68歲，平均年齡(54.76±6.32)歲。2組基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標準 納入標準：(1)符合膿毒癥診斷標準[9]，且心肌酶譜異常，超聲檢查顯示左心室射血分數下降>50%，提示伴有心肌損傷[10]；(2)患者自愿加入本研究，且簽署知情同意書。排除標準：(1)既往有心絞痛、心肌炎、心肌梗死等基礎心臟疾病者；(2)重要臟器功能障礙者；(3)消化道潰瘍、血液系統疾病、自身免疫性疾病患者；(4)惡性腫瘤患者；(5)對左西孟旦過敏者。

1.3 治療方法 2組均給予營養支持、機械通氣、抗感染、糾正水電解質紊亂、去甲腎上腺素維持血壓等基礎治療。對照組實施早期HVHF治療，股靜脈或頸內靜脈穿刺、留管，建立血管通路，采用床邊血液透析機進行血液濾過治療，20 h/d，持續6 d；治療組在對照組基礎上加用左西孟旦注射液(齊魯制藥有限公司)，首負荷劑量12 μg/kg，靜脈注射時間≥10 min，隨后維持量0.1 μg·kg-1·min-1靜脈滴注24 h，2 h后調整為0.2 μg·kg-1·min-1，持續靜脈滴注。

1.4 觀察指標

1.4.1 Treg/Th17、Th1/Th2:采用患者空腹靜脈血，流式細胞儀測定Treg、Th17、Th1、Th2。

1.4.2 細胞因子:采用患者空腹靜脈血，離心取上清，采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)測定白介素6(IL-6)、IL-10、IL-17、γ干擾素(IFN-γ)、IL-4。

1.4.3 轉錄因子:采用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，TRIzol提取細胞總RNA，逆轉錄試劑盒合成cDNA第一鏈，Real time-PCR法測定T-bet、GATA3 mRNA表達量，設β-actin為內參照基因，目的基因表達相對值為2-ΔΔCt。

1.4.5 免疫球蛋白:采用放射免疫法測定外周血IgA、IgG、IgM。

2 結果

2.1 2組Treg/Th17比較 2組治療前Treg、Th17、Treg/Th17比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Treg、Th17、Treg/Th17均較治療前顯著降低(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表1。

表1 2組Treg/Th17比較

2.2 2組Treg/Th17相關細胞因子比較 2組治療前IL-6、IL-10、IL-17比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IL-6、IL-17均較治療前顯著降低，IL-10均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表2。

表2 2組Treg/Th17相關細胞因子比較

2.3 2組Th1/Th2比較 2組治療前Th1、Th2、Th1/Th2比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Th1、Th1/Th2均較治療前顯著降低，Th2均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表3。

表3 2組Th1/Th2比較

2.4 2組Th1/Th2相關細胞因子比較 2組治療前IFN-γ、IL-4比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IFN-γ均較治療前顯著降低，IL-4均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表4。

表4 2組Th1/Th2相關細胞因子比較

2.5 2組Th1/Th2相關轉錄因子比較 2組治療前T-bet mRNA、GATA3 mRNA、T-bet/GATA3比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后T-bet mRNA、T-bet/GATA3均較治療前顯著降低，GATA3 mRNA均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表5。

表5 2組Th1/Th2相關轉錄因子比較

表6 2組T淋巴細胞亞群比較

2.7 2組免疫球蛋白比較 2組治療前IgA、IgG、IgM比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IgA、IgG、IgM均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)。見表7。

表7 2組免疫球蛋白比較

3 討論

膿毒癥發病機制復雜，其中促炎和抗炎因子失衡在疾病發生早期發揮關鍵作用，但隨著病情進展，炎癥級聯反應容易造成免疫功能紊亂，并刺激T淋巴細胞、巨噬細胞等分泌大量細胞因子，導致免疫失調及治療難度增加[11,12]。其中Treg通過直接作用或分泌抗炎因子IL-10抑制淋巴細胞激活和炎性反應，而Th17能夠分泌促炎因子IL-6、IL-17，發揮與Treg相反的功能。Treg、Th17相互作用，相互抑制，二者及其分泌的細胞因子保持平衡狀態，在調節炎性反應和免疫功能中發揮重要作用[13,14]。膿毒癥患者外周血Treg、Th17、Treg/Th17、IL-6、IL-17明顯升高，IL-10明顯降低，提示膿毒癥患者機體存在嚴重的細胞免疫功能紊亂。本研究結果顯示，2組治療前Treg、Th17、Treg/Th17、IL-6、IL-10、IL-17比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Treg、Th17、Treg/Th17、IL-6、IL-17均較治療前顯著降低，IL-10均較治療前顯著升高(P<0.05)，且治療組改善程度更明顯(P<0.05)，說明提示左西孟旦聯合HVHF治療膿毒癥心肌損傷能夠通過調節細胞因子的分泌影響Treg、Th17分化并維持Treg/Th17平衡，這對于重建機體免疫穩態具有重要作用。

綜上所述，左西孟旦聯合HVHF治療膿毒癥心肌損傷能夠有效調節Treg/Th17、Th1/Th2水平，改善細胞免疫和體液免疫功能。