不同提取方法對金銀花靈芝多糖清除DPPH的效果評價

杜文倩 劉小杰 黨凱云 張慧珍 趙志龍

【摘要】目的：探究不同方法提取的金銀花靈芝多糖對DPPH自由基清除的效果。方法：采用溶劑回流法、搖床振蕩法、超聲萃取法等提取金銀花靈芝中的多糖成分，以L-抗壞血酸為對照品，采用DPPH法研究不同濃度多糖溶液對自由基的清除作用。結果：最適合用于提取金銀花靈芝多糖的方法是超聲萃取法，采用水做溶劑提取時所得多糖的抗氧化能力最強。結論：金銀花靈芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，在一定的濃度范圍內，金銀花靈芝多糖的濃度越大，其清除DPPH自由基的能力越強。

【關鍵詞】金銀花靈芝多糖;提取;清除自由基

【中圖分類號】 R248

【文獻標識碼】B

【文章編號】2095-6851（2020）08-032-02

[中圖分類號]Q539

【文獻標識碼】A

自由基會傷害生物膜、酶、維生素、蛋白質及活細胞功能，可造成細胞的結構和功能破壞，如何清除自由基的問題已得到普遍關注[1]。金銀花靈芝為多孔菌科褐孔菌屬真菌子實體，又稱“銀花莪子”或“忍冬藤菇”。富含多糖、三萜、生物堿、麥角甾醇等多種活性成分，具有抗氧化、抗病毒、抑菌等功效。因此，本文通過不同方法提取金銀花靈芝多糖，并探究其清除DPPH的效果[2]。

1?材料和方法

1.1?材料和儀器

金銀花靈芝子實體（山東臨沂市平邑縣），無水乙醇，2，2-二（4-叔辛基苯基）-1-苦肼基自由基（DPPH·）（Solarbio，丙酮，氯仿（分析純），紫外可見分光光度計，真空旋轉蒸發儀。

1.2?方法

1.2.1?溶劑回流法

稱取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑回流提取3 h，待提取液冷卻后進行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱重，用溶劑溶解并定容。

1.2.2?搖床振蕩法

稱取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑，放置一定溫度下的搖床上浸提6 h，將提取液進行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱重，用溶劑溶解并定容。

1.2.3?超聲萃取法

稱取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑，超聲萃取30 min，將提取液進行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱重，用溶劑溶解并定容。

1.2.4?金銀花靈芝多糖對DPPH自由基的清除作用[3]

準確稱取20 mg DPPH，95%乙醇溶解并定容于250 ml容量瓶中，DPPH濃度為2×10-4 mol/L，取等體積待測液及2×10-4 mol/L DPPH 溶液加入同一具塞試管中，搖勻。30 min后用95% 乙醇做參比在525 nm下測定其吸光度Ai，同時測定2×10-4mol/L DPPH溶液與等體積95%乙醇混合液的吸光度Ac，以及待測液與等體積95%乙醇混合液的吸光度Aj。根據下列公式計算清除率：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%

2?結果

2.1?不同提取方法的浸出率比較

對金銀花靈芝多糖采用不同方法進行提取[4]，計算浸出率，結果見表1。采用三種不同方法對金銀花靈芝多糖進行提取，其浸出率由高到低依次為：溶劑回流法>搖床振蕩法>超聲萃取法。

2.2?不同溶劑提取結果的比較

采用兩種不同提取方法和四種不同溶劑對金銀花靈芝多糖進行提取，結果見表2。通過對比其提浸出率，按照提浸出率由高到低的順序依次為：水>95%乙醇>丙酮>氯仿?？梢?，其浸出率與溶劑的極性有關，溶劑極

性越大，浸出率越高。

2.3?不同溶劑提取物清除 DPPH 自由基的能力[5]

對不同溶劑的金銀花靈芝多糖進行清除自由基活性能力的測定，結果如圖1所示。95%乙醇、水、丙酮對金銀花靈芝多糖都具有一定的清除自由基活性的能力。隨著金銀花靈芝多糖濃度的增加，清除率逐漸增高，但當清除率增加到一定值后，清除率趨于平緩甚至降低。在一定的濃度范圍內，采用水作為溶劑所提取得到的金銀花靈芝多糖抗氧化能力最強，其次是采用丙酮得到的提取物，95%乙醇提取得到的多糖抗氧化能力最弱。對自由基的清除能力以及清除率表示，清除率越高，說明多糖提取物的抗氧化作用越強。

3?討論

通過比較以上幾種提取方法，超聲萃取法是最適合提取金銀花靈芝多糖的提取方法，它具有操作過程簡單、提取速度快、節能、多糖提取率高等優勢。金銀花靈芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，采用水做溶劑提取時所得多糖的抗氧化能力最強，其次為丙酮，用95%乙醇做溶劑時抗氧化能力最弱。不同溶劑提取多糖時各提取物清除DPPH自由基的結果均表明，在一定的濃度范圍內，金銀花靈芝多糖的濃度越大，其清除DPPH自由基的能力越強[6]。

我國對金銀花的種植及使用已經十分普遍，金銀花的藥用價值也已經被大量開發利用。但由于金銀花靈芝產量減少、價格昂貴，目前對其研究和開發應用還相對較少，而對于金銀花靈芝多糖的研究則少之又少。本研究對金銀花靈芝多糖的提取工藝進行優化，得到了較為合適的提取方法;同時通過金銀花靈芝多糖對DPPH自由基清除能力的研究，證明了金銀花靈芝多糖具有較強的抗氧化活性，這一研究對金銀花靈芝多糖的應用和開發具有重要意義。

參考文獻：

[1]?謝明勇，弓曉峰.黑靈芝提取物清除DPPH自由基的作用[J].天然產物研究與開發，2006，18：917-921.

[2]?周凌云，胡穎，唐博安.不同提取方法對大花紅景天多糖的DPPH自由基清除能力的影響[J].通化師范學院學報. 2017（1）：18-21.

[3]?譚萍，方玉梅，王毅紅，張春生.苦蕎麥多糖清除DPPH自由基的作用[J].六盤水師范學院學報.2013，25（4）：37-39.

[4]?范三紅，任嘉興，張錦華，金曉弟，白寶清.響應面優化羊肚菌多糖提取工藝及抗氧化性[J].食品工業科技.2019，40（06）：179-185.

[5]?范巧寧，趙珮，高曉梅，段玉峰.不同提取方法對槐米多糖抗氧化活性的影響[J].食品工業科技.2014，35（21）：273-277.

[6]?祝元婷，吳文林，張利，劉琪.超聲提取鼠尾草葉多糖工藝優化及其DPPH自由基清除能力評價[J].食品科學.2011，32（16）：76-79.