飼喂病死生豬肉引起犬偽狂犬病的診治

武守艷，劉文俊，楊麗華，董春光，韓文儒，夏艷婷，韓一超

（山西省農業科學院畜牧獸醫研究所，山西 太原 030032）

偽狂犬病又稱狂癢病、豬皰疹病毒病、奧其基氏病、阿捷申氏病，是由偽狂犬病病毒引起的犬、貓、豬、牛、羊、兔等多種動物共患的一種急性傳染病，病的特征為發熱、奇癢（豬除外），腦脊髓炎和神經炎的癥狀，人也可感染，但一般不發生死亡。近年來，隨著養豬業的發展，豬偽狂犬病在養豬業中流行嚴重，常常引起大批豬死亡。2019年11月期間，在太原某郊區一些養犬人士為了減少飼養成本，將豬場死豬肉生喂犬后引起犬發熱、大量流涎、劇癢，造成犬大批死亡，經臨床診斷及實驗室檢驗確診為犬偽狂犬病，現報道如下。

1 發病情況及癥狀

發病死亡犬均為太原某郊區家養犬，一部分是看家護院的大型犬，一部分是個人犬場飼養犬，品種有德國牧羊犬、藏獒；年齡從10月齡至10歲不等，均有飼喂豬場病死生豬肉和流產豬死胎的飼養史。

病犬初期表現精神極度萎靡、凝視、舔擦皮膚某一處，隨后出現瘙癢癥狀，口唇部肌肉痙攣伴隨大量流涎，并且用爪撓面部、耳部和肩部，有時用嘴咬身體，嚴重時產生大塊兒爛斑，周圍組織腫脹，并且煩躁不安，對外界刺激反應強烈，有攻擊性，口中流出大量黏性液體，體溫升高，發生嘔吐，嚴重者可見頭部、頸部、臀部肌肉間斷性抽搐，呼吸困難，常于24～36 h死亡，偶爾不是急性死亡的，經積極治療最終無效死亡。

2 剖檢變化

外觀可見局部損傷和因動物搔抓造成的皮膚破潰，以面部、頭部、肩部多見，皮下呈彌漫性出血，局部見淋巴結腫脹、充血、肺水腫，特征性病變為腦膜明顯充血，腦脊髓液增多，腎、肝、肺有散在的壞死點和出血，呼吸道鼻、氣管、支氣管也有炎癥變化。

3 診斷

3.1 臨床診斷

根據臨床癥狀和剖檢變化，如發熱、呼吸困難，流涎、頭頸部瘙癢，身體抽搐，結合飼喂情況可作出初步診斷。

3.2 偽狂犬病病毒PCR診斷

3.2.1 試劑 核酸提取試劑、瓊脂糖、電泳試劑、豬偽狂犬病病毒PCR檢測試劑盒（陰性對照、陽性對照、PCR反應液、Tak DNA聚合酶、0.2 mL薄壁PCR管）均購自哈爾濱元亨生物藥業有限公司。

3.2.2 儀器 分析天平、離心機、PCR擴增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析儀）、微波爐、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1 000 μL）。

3.2.3 耗材 稱量紙、20 mL一次性注射器、500 mL量筒、500 mL錐形瓶、經焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌 1.5 mL 離心管和吸頭（10 μL、200 μL、1 000 μL）、滅菌雙蒸水。

3.2.4 樣品采集 要求檢測病料新鮮，嚴禁反復凍融，取病死犬大腦海馬背側皮層、中腦、腦橋、扁桃體、淋巴結等組織；待檢活犬，用注射器取血5 mL，采集病料后盡快送實驗室進行檢測。

3.2.5 PCR操作方法 每份總體積20 μL，含16 μL PCR反應液（用前混勻），2 μL Taq DNA聚合酶，2 μL模板DNA。在PCR擴增儀上進行以下程序：94℃3min，94 ℃ 30 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共 35次循環；再72℃延伸7 min。

3.2.6 電泳 稱4 g瓊脂糖放于500 mL錐形瓶中，加入50倍稀釋的TAE電泳緩沖液200 mL（取4 mL 50倍TAE電泳緩沖液，用雙蒸水稀釋至200 mL），于微波爐中溶解，再加入10 μL染色液混勻。在電泳槽內放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后將PCR擴增產物10 μL混合2 μL上樣緩沖液，點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110～120 V電壓于50倍稀釋的TAE電泳緩沖液中電泳，紫外燈下觀察結果。

3.2.7 結果判定 陽性對照出現217 bp擴增帶、陰性對照無條帶出現時，試驗結果成立。被檢樣品出現217 bp擴增帶為偽狂犬病陽性，否則為陰性。

3.2.8 PCR診斷結果 由圖1可知，被檢患病犬樣品均在217 bp出現擴增條帶，證明患病犬為偽狂犬病感染。

3.3 動物試驗

取病死犬腦組織加生理鹽水制成10%的懸浮液，每毫升溶液中加青霉素、鏈霉素各1 000 IU，置4℃ 1 h，然后3 000 r/min離心10 min后，取上清液接種健康家兔4只，于后腿多側皮下注射，每只2 mL，同時取2只健康家兔在相同部位分別注射生理鹽水2 mL作為對照，進行觀察。接種病死犬腦組織懸浮液的家兔24 h后表現精神沉郁、發熱、呼吸加快，脈搏加快，開始先舔接種部位，之后逐漸變成用力撕咬接種點，角弓反張，在地上打滾，出現出血性皮炎，局部脫毛，皮膚破損出血，表現局部奇癢癥狀，最后家兔出現衰竭，倒臥于一側，痙攣，呼吸困難而死亡，注射生理鹽水的對照組未出現任何異?，F象。

4 結果與討論

4.1 通過臨床癥狀、剖檢變化、PCR診斷及家兔接種試驗可以確診為死亡犬是由于感染偽狂犬病病毒后導致的死亡，此類報道較少。

4.2 偽狂犬病病毒（PRV）在分類上屬皰疹病毒科，甲型皰疹病毒亞科，核酸型為雙股DNA。PRV僅有1個血清型，對外界環境具有較強的抵抗力。在污染的動物舍內可存活30～46 d，在肉中可存活35 d以上。PRV對乙醚、氯仿等脂溶劑及甲醛、紫外線、1%氫氧化鈉等敏感，胰蛋白酶、胃蛋白酶等能滅活此病毒，但不損壞衣殼。病毒粒子表面沒有能凝集禽類和哺乳類動物紅細胞的血凝素[1]。

4.3 偽狂犬病病毒（PRV）具有廣泛的宿主范圍，易感畜禽包括豬、牛、綿羊、山羊、雞、鴨等，易感野生動物包括野豬、狼、狐、獾、刺猬、鼬、蝙蝠、猿、浣熊、鹿等[1]，試驗動物中家兔、豚鼠、小鼠都易感，其中以家兔最敏感，在已知的自然宿主中，豬最具耐受性。豬和鼠類是自然界中病毒的主要貯存宿主和排毒者；也是引起其他動物發病的疫源動物，在偽狂犬病病毒的傳播上起著甚為重要的作用[2]。

4.4 除豬可經直接接觸或間接接觸偽狂犬病病毒發生偽狂犬病的傳染外，其他動物主要由于吃食病尸及病畜污染的飼料后經消化道感染。此外，本病還可經呼吸道黏膜破損處和配種等發生感染，妊娠母豬感染本病時可經胎盤垂直傳播侵害胎兒，偽狂犬病病毒可通過胎盤傳遞給胎兒，而母體免疫球蛋白卻不能保護，所以對胎兒的感染是致命的[2]。據資料記載，在豬群發病的同時，犬、貓等伴侶動物往往發病，多數病例體溫正常，動物行為異常，沉郁，個別行為狂躁，攻擊人畜。頭、頸、肩部皮膚奇癢，不斷抓撓、啃咬，犬大量流涎，呼吸困難，1～3 d死亡，病死率100%[2]。

4.5 上述病例發病原因是由于犬主缺乏對偽狂犬病的認知，為了節省人力財力，將豬場死于偽狂犬病的豬及流產胎兒未經高溫加熱消毒處理，直接生喂犬，造成了犬偽狂犬病的發生，同時，也成為本病的傳播者，感染了其他同群飼養犬，造成了當地犬偽狂犬病的流行和大批死亡。

4.6 上述病例應用多種抗生素及化學藥物治療均無效，病犬在出現典型癥狀后，很快死亡，且死亡率高達100%。

綜上所述，犬偽狂犬病死亡率極高，無有效治療措施。隨著養豬業的發展，豬偽狂犬病在國內很多地區流行嚴重，給犬、貓飼養造成了一定的威脅，疫苗接種是防治偽狂犬病的重要措施，但是，目前國內市場上沒有犬、貓偽狂犬病疫苗，所以，不給犬飼喂病死豬肉、牛肉、流產死亡的胎兒、胎衣等，禁止犬進入豬場或接觸病死豬等，是預防犬感染該病的有效措施。除帶毒豬以外，帶毒鼠類等也是本病的主要傳染源。犬、貓也常因吃病鼠感染，因此，犬、貓飼養廠舍應有隔離設施，防止野鼠進入。同時，犬、貓要分別飼養，在犬舍貓舍設計上應注意保持一定間隔[1]。

本病對人的威脅雖然很小，但在歐洲曾有人患病的報道，并分離到病毒，說明偽狂犬病對人有一定的致病性[1]。因此在病死動物的尸體處理過程中，有關人員應高度重視自身防護。