超高效液相色譜

摘??要：目的?建立超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測蔬菜水果中涕滅威及其代謝產(chǎn)物殘留含量的分析方法。

方法?試樣中的涕滅威及其代謝產(chǎn)物經(jīng)乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮后，采用固相萃取分離、凈化，淋洗液經(jīng)濃縮后，使用安捷倫C18（2.1×50mm，1.8μm）色譜柱分離，以5mM甲酸銨+0.1%甲酸水溶液—0.1%甲酸乙腈為流動相梯度洗脫，采用多反應(yīng)監(jiān)測正離子模式檢測。外標法定量。

結(jié)果?在10ug/L-400ug/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)在0.999以上，在5、10、50ug/L加標水平的回收率為76.8%—97.9%，相對標準偏差為：0.13%—0.87%。

結(jié)論?該方法凈化效果好，靈敏度高，適于測定蔬菜水果中涕滅威及其代謝產(chǎn)物的殘留。

關(guān)鍵詞：涕滅威;涕滅威砜;涕滅威亞砜;超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法;

涕滅威屬于甲基氨基甲酸肟酯類農(nóng)藥，是一種廣譜殺蟲劑，急性毒性極高。涕滅威易殘留在自然水體、土壤等介質(zhì)中，對魚類和水生動物毒性大，進入人體后能夠抑制膽堿酯酶，并且與其結(jié)合后不可逆，對人體有較大危害，屬于高毒農(nóng)藥。涕滅威施用后能夠很快氧化成為仍具生物活性的涕滅威亞砜和涕滅威砜。

目前對于蔬菜水果中涕滅威及其代謝產(chǎn)物的檢測主要使用液相色譜法NY/T761-2008，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T20769-2008，本文改進了前處理方法，優(yōu)化建立了超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測涕滅威及其代謝產(chǎn)物的方法。

1?實驗部分

1.1?主要儀器與試劑

1290/6470超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀[配電噴霧離子源（ESI），美國Agilent公司];氮吹濃縮儀（杭州奧盛儀器有限公司）;勻漿機（德國IKA公司）。

涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜標準物質(zhì)（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司），甲酸、甲酸銨（美國飛世爾公司），乙腈、甲醇、二氯甲烷（德國默克公司），氯化鈉（西隴科學(xué)股份有限公司），純凈水（屈臣氏），氨基固相萃取柱（500mg，6mL，天津博納艾杰爾公司）。

1.2?實驗方法

1.2.1?標準溶液的配制

分別將安瓿瓶中100μg/mL的15種標準液用甲醇混合配制成10μg/mL的儲

備標準液。將儲備標準液用甲醇稀釋得到10、20、40、60、100、200、400ng/mL濃度點。

1.2.2樣品前處理

（1）提取：準確稱取20.0g試樣放入勻漿機中，加入40.0mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有5g-7g氯化鈉的100mL具塞量筒中，收集濾液40mL-50mL，蓋上蓋子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜置30min，使乙腈和水相分層。

（2）凈化：吸取10mL乙腈提取液，放入燒杯中，70℃水浴氮吹近干，加入2mL甲醇+二氯甲烷（5+95）溶解殘渣。將氨基柱用4.0mL甲醇+二氯甲烷活化，當(dāng)溶液到達吸附層表面時，立即將上述濃縮液加至柱中，并用刻度試管接洗脫液，用上述混合液2?m?L洗滌2次，收集全部淋洗液。將收集的洗脫液在50℃水浴氮吹至近干，用甲醇準確定容至2?m?L，過0.22μm膜，待測。

1.2.3色譜條件

色譜柱：安捷倫ZORBAX?Eclipse?Plus?C18（2.1×50mm?1.8μm）;柱溫：40℃;流速：0.4mL/min;進樣量：2μL;流動相：A：5mM甲酸銨加0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸乙腈。

1.2.4質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI+;干燥器溫度：140℃;干燥氣流速：5L/min;霧化器壓力：30psi;鞘氣溫度：375℃;鞘氣流速：12L/min;毛細管電壓：4000V;噴嘴電壓：0V;掃描類型：MRM;Delta?EMV：200V。

2?結(jié)果與討論

2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本研究分別將濃度為1mg/L的3種化合物標準溶液用儀器自帶的優(yōu)化方法優(yōu)化，優(yōu)化出的母離子和子離子及相關(guān)電壓值見表1。

2.2?色譜條件的優(yōu)化

本研究通過梯度洗脫使得3種化合物在色譜柱上有較好的分離，峰型較好。洗脫梯度為：A相：保持95%，0～2min;A相：95%～60%，2～5min;A相：60%～95%，5～5.1min;A相：保持95%，5.1～8min。

2.3?線性范圍、回收率、精密度

以峰面積為縱坐標、質(zhì)量濃度為橫坐標作曲線。實驗結(jié)果表明，3種農(nóng)藥在10—400ug/L范圍內(nèi)線性良好，分別為：涕滅威0.9997，涕滅威砜0.9995，涕滅威亞砜0.9997。選取卷心菜和橙子為基質(zhì)加標，低中高3個濃度加標回收率在76.8%—97.9%之間，相對標準偏差在0.13%—1.6%之間。

3?結(jié)論

本研究參照國家標準《NY/T?761-2008》前處理方法，建立了超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔬菜水果中涕滅威及其代謝物殘留的方法。該方法具有操作簡單、快速、靈敏度高等特點，適用于大批蔬菜水果中3種農(nóng)藥殘留的同時檢測。

作者簡介：起萌，（1991.11-），女，彝族，云南省楚雄州，學(xué)歷：本科，職稱：助理農(nóng)藝師，畢業(yè)院校：北京林業(yè)大學(xué)，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)獸藥殘留檢測