實時熒光PCR檢測百日咳桿菌與百日咳抗體的臨床應用分析

趙麗靜

【摘 ?要】目的：評價實時熒光PCR應用于百日咳桿菌與百日咳抗體檢測的價值。方法：將2017年9月-2019年8月在我院確診為百日咳的56例患兒作為研究對象，采集患兒咽拭子，進行百日咳桿菌實時熒光PCR檢測，采集患兒血液標本進行百日咳抗體IgM實時熒光PCR檢測，統計檢測結果，以百日咳桿菌與百日咳抗體IgM均為陽性作為百日咳診斷標準，統計實時熒光PCR聯合檢測百日咳桿菌、百日咳抗體診斷百日咳的準確率。結果：56例患兒百日咳桿菌的陽性率為85.70%，百日咳抗體IgM的陽性率為75.00%。實時熒光PCR聯合檢測兩者診斷百日咳的準確率為73.21%。結論：實時熒光PCR檢測百日咳桿菌及百日咳抗體IgM對百日咳的臨床診斷具有輔助價值。

【關鍵詞】實時熒光PCR;百日咳桿菌;百日咳抗體;臨床診斷

【中圖分類號】R440;R516.6 ? ? ?【文獻標識碼】A ? ? ?【文章編號】1672-3783（2020）08-0067-02

百日咳為感染百日咳桿菌而發生的一種急性呼吸道傳染病，發病后的主要臨床表現為陣發性痙攣性咳嗽，且伴有“雞鳴”樣吸氣性吼聲，病程較長，可持續2～3個月，故稱為百日咳。長期觀察發現，該疾病的潛伏期較長，傳染性較強，延誤診治很容易造成小范圍流行[1]。因此，實現該疾病的早期臨床診治具有必要性。為進一步提高該疾病的早期確診率，本研究探討實時熒光PCR檢測百日咳桿菌和百日咳抗體在百日咳臨床診斷中的應用價值，現匯報研究內容如下：

1. 資料與方法

1.1一般資料

研究對象為2017年9月-2019年8月在我院確診為百日咳的56例患兒。百日咳臨床診斷標準：有明顯的咳嗽癥狀、持續時間至少2周且伴有以下癥狀中的一項：（1）呈痙攣性咳嗽;（2）伴有“雞鳴”樣吸氣性吼聲;（3）無明顯誘因的咳嗽后嘔吐。56例患兒中，男患兒26例，女患兒30例，年齡5個月～3歲（1.06±0.26）歲。其家長均事先對本研究知情，同意患兒參與研究。

1.2方法

1.2.1百日咳桿菌檢測

具體檢測過程為：使用棉拭子取患兒咽部分泌物，置于裝有無菌生理鹽水的試管中立即送檢。檢測儀器為熒光定量PCR擴增儀（羅氏），檢測試劑盒購自中國中山大學達安基因股份有限公司，嚴格按照儀器及試劑盒的說明書進行檢測操作。

百日咳桿菌結果判定：Ct值<38，且有擴增曲線判定為陽性，Ct值≥38或無擴增曲線判定為陰性。

1.2.2百日咳抗體檢測

具體檢測過程為：使用真空抽血管采集患兒靜脈血3ml，待血液凝固后，將采血管置于血清離心機中，以4000r/min的速度離心10min，取上清液進行百日咳抗體IgM。檢測試劑盒購自上海康郎生物科技有限公司，嚴格按照儀器及試劑的說明書進行檢測操作。

百日咳抗體IgM結果判定：濃度<14U/ml判定為陰性，反之判定為陽性。

1.3觀察指標

統計研究對象實時熒光PCR檢測百日咳桿菌和百日咳抗體IgM的陽性率以及實時熒光PCR聯合檢測百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳的準確率。

診斷準確率評價參考的金標準為一般資料中的百日咳臨床診斷標準，反映的是聯合檢測百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳與金標準方法的符合程度。

2. 結果

2.1 56例患兒的百日咳桿菌和百日咳抗體IgM的實時熒光PCR檢測結果

2.2實時熒光PCR聯合檢測百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳的準確率

經統計得出，56例百日咳患兒中，共41例患兒的實時熒光PCR聯合檢測百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷結果與金標準診斷結果符合，診斷準確率為73.21%（41/56）。

3. 討論

世界衛生組織（WHO）的數據統計結果顯示，全球人群的百日咳發病率近年來有明顯的上升趨勢，不僅危害人群身心健康，同時也造成了較嚴重的醫療資源損失[2]。如何進一步提高該疾病的早期確診率值得進行探索。早期，病原學檢查被認為是診斷百日咳的及標準，但經長期實踐應用也發現諸多局限性，如病原微生物的培養過程易受到多種因素的影響，可能出現假陽性、假陰性的結果，且檢驗周期較長，較易造成疾病的延誤診治。

實時熒光PCR檢測為現階段在我國較受關注的一種檢驗方法，經實踐證實多多種病原微生物及抗體均具有較高的敏感性和特異性。本研究應用該方法檢測百日咳桿菌和百日咳抗體，并分析聯合檢測兩者對百日咳的診斷價值。結果顯示納入研究的百日咳患兒的百日咳桿菌陽性率和百日咳抗體IgM陽性率均高于70%，實時熒光PCR聯合檢測兩者診斷百日咳的準確率為73.21%。根據上述研究結果得出，實時熒光PCR檢測百日咳桿菌和百日咳抗體能夠為疾病的臨床診斷提供輔助價值。百日咳桿菌的致病機制主要為其本身能夠合成一種特異性的毒素，實時熒光PCR檢測能夠檢出該毒素，且能夠對該毒素進行定量[3]。因此，對百日咳桿菌具有較高的敏感性和特異性。百日咳抗體IgM近年來已被多個課題研究發現在百日咳發病早期具有較高的檢出率，且初次感染的患者多會在痙攣期出現該抗體。因此，近年來該抗體檢測在百日咳臨床診斷中的應用較廣泛。本次研究中也發現，實時熒光PCR檢測百日咳抗體IgM為陽性的患兒多處于疾病的痙攣期。

綜上所述，實時熒光PCR檢測百日咳桿菌和百日咳抗體在百日咳臨床診斷中的應用，有利于實現百日咳的早期診斷，值得各大醫院開展應用。

參考文獻

[1] 李振，汪丙松，王昭俐，等.質譜法與聚合酶鏈式反應檢測法檢測百日咳鮑特菌[J].中國臨床醫生雜志，2020，48（01）：92-94.

[2] 王青，劉瑩，袁林，等.實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測百日咳鮑特菌的效能研究[J].中國全科醫學，2019，22（23）：2815-2819.

[3] 吳丹遐，陳強，李嵐，等.百日咳感染在兒童慢性咳嗽中的地位及其臨床特征研究[J].中國當代兒科雜志，2019，21（01）：18-23.