補腎固沖法不同給藥時間對大鼠甲狀腺激素和性激素水平的影響*

李士瑾，劉方洲,張雪俠,郭曉燕

(河南省中醫藥研究院，河南 鄭州 450004)

青春期異常子宮出血是青春期女性的常見病，發病率逐年提高，且發病年齡越來越小[1]。青春期女性特殊的生理特點使其治療方法異于成年人[2]。我國青春期異常子宮出血的發病率為21.03%[3]，其發病原因多為性腺軸發育不成熟[4]。目前，西醫療法的副作用較多，故尋找一種安全有效的治療方法迫在眉睫。中醫學認為：青春期異常子宮出血的基本病機是腎氣虛損、沖任不固，運用補腎固沖法治療可取得較好的療效[5-9]。根據該病的病因病機，治療當以補腎健脾、固沖止血為主要治則，采用補腎固沖法，組以補腎健脾固沖方，方由熟地黃、生地黃、山萸肉、黨參、炒白術、川續斷、菟絲子、淫羊藿 、阿膠、生山藥 、生白芍和雞內金組成。本研究以未成年雌性幼鼠為研究對象，觀察了補腎固沖法不同給藥時間對大鼠甲狀腺激素和性激素水平的影響，以期為臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動 物

Wistar大鼠，SPF級，雌性，21 d 齡，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，實驗動物生產許可證編號為SCXK(魯)20140007，動物質量合格證號為37009200005897，河南省中醫藥研究院實驗動物中心使用許可證編號為SYXK(豫)2019-0001。

1.2 藥品與試劑

補腎固沖法方藥組成：熟地黃20 g，生地黃6 g，山萸肉15 g，黨參15 g，炒白術15 g，川續斷12 g ，菟絲子20 g、淫羊藿 20 g，阿膠(烊化)12 g，生山藥 30 g，生白芍15 g ，雞內金9 g。由河南省中醫藥研究院制劑室制備，按臨床劑量30倍取材，所得制劑生藥質量分數約為1.5 g/mL，高溫消毒后于4 ℃冰箱保存備用，使用時配成適當的質量分數。 右歸丸，仲景宛西制藥股份有限公司產品，批號151209。大鼠總三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA試劑盒、大鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)ELISA試劑盒、大鼠總甲狀腺激素(TT4)ELISA試劑盒、大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒、大鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒、大鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒、大鼠孕酮(P)ELISA試劑盒、促性腺激素釋放激素(GnRH)、大鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒、大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒均購自蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號均為E20180225A。

1.3 分組與給藥

將未成年雌性幼鼠分為空白對照組，右歸丸組，補腎固沖高、低劑量組，每組30只，空白對照組灌服去離子水，右歸丸組灌服0.55 g/mL的右歸丸溶液,補腎固沖高、低劑量組分別灌服中藥藥液1.5，0.75 g/mL ，每日灌胃給藥1次。

1.4 檢測指標

給藥第15天、第30天、第60天，各組分別于給藥后取材10只大鼠，取材前各組大鼠均禁食12 h。末次給藥后2 h，以100 g/L的水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，留取血漿，檢測TSH、TT3、TT4、FT3、FT4和GnRH、LH、FSH、E2、P的含量。

1.5 統計學方法

2 結 果

2.1 不同給藥時間補腎固沖法對大鼠TT3、TT4、FT3、FT4和TSH水平的影響

給藥第15天，與空白對照組對比，右歸丸組大鼠血清中TT4、FT4、TT3含量升高，TSH含量降低，差異有統計學意義(P<0.05)；補腎固沖高劑量組大鼠血清中TT4、TT3含量升高，TSH含量降低，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 給藥第15天各組大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平對比

給藥第30天，與空白對照組對比，右歸丸組大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量升高，TSH含量降低，差異有統計學意義(P<0.05)；補腎固沖高劑量組大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量升高，TSH含量降低,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 給藥第30天各組大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平對比

給藥第60天，與空白對照組對比，右歸丸組大鼠和補腎固沖高劑量組血清中TT3、TT4、FT3、FT4含量均升高，TSH含量降低，差異有統計學意義(P<0.05)；補腎固沖低劑量組血清中TT4、FT4含量均升高,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 給藥第60天各組大鼠TT3、TT4、FT4和TSH水平對比

2.2 不同給藥時間補腎固沖法對大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平的影響

給藥第15天，與空白對照組對比，右歸丸組、補腎固沖高劑量組和補腎固沖低劑量組大鼠血清中LH、P、E2含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 給藥第15天各組大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平對比

給藥第30天，與空白對照組對比，右歸丸組和補腎固沖高劑量組大鼠血清中LH、P、GnRH、E2含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)；補腎固沖低劑量組大鼠血清中LH、P、GnRH含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 給藥第30天各組大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平對比

給藥第60天，與空白對照組對比，右歸丸組和補腎固沖高劑量組大鼠血清中P、LH、GnRH、E2含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)；補腎固沖低劑量組大鼠血清中P、LH、E2含量升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表6。

表6 給藥第60天各組大鼠LH、FSH、P、GnRH和E2水平對比

3 討 論

補腎固沖法選用熟地黃、山萸肉、川續斷、生山藥、菟絲子、淫羊藿，促使腎精充盛。用黨參、炒白術益氣健脾，以后天補先天，且脾主統血，有利于腎氣固攝，脾為氣血化生之源，脾氣充足，有利于腎精充足。為兼顧青春期女性情志特點，選用白芍養血柔肝。全方充分體現了塞流與澄源并用、固本與治標相結合的特點。固攝止血中又兼顧到活血，使血止而不留瘀。阿膠養血止血，佐以雞內金，防止諸藥滋膩，又起化瘀作用。少年治腎，本方補腎的同時又兼顧肝脾，補腎健脾柔肝，使腎精充盛、天癸成熟，此是該法的一大特點。諸藥合用，共奏補腎健脾、固沖止血之效。

現代藥理學研究證明，補腎藥可提高垂體對下丘腦的反應，改善內分泌調節功能及低雌激素環境，促進卵泡生長發育成熟；也可改善機體免疫功能[10-15]。有研究發現，甲狀腺激素水平降低，可以使生殖能力受損，影響腦垂體分泌促性腺激素[16]。本研究發現，補腎固沖法可以促進未成年雌性幼鼠甲狀腺激素和性激素水平的分泌，補腎固沖高劑量組在不同的給藥時間時，可以不同程度地升高血清中TT3、TT4、FT3、FT4和P、LH、GnRH、E2水平；補腎固沖低劑量組的TT4、FT4含量在給藥第60天時升高，性激素的水平在給藥第15，30，60天時均不同程度提高。

綜上所述，補腎固沖法治療青春期異常子宮出血可能與調節機體甲狀腺激素水平和性激素水平，促進性腺軸發育成熟相關，為臨床治療用藥提供了理論依據。