過敏性疾病臨床診斷中血清IgE、細胞結(jié)合IgE水平檢驗的應(yīng)用及分析

曾釗宇

廣東省佛山市高明區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，廣東佛山 528500

過敏性疾病是一種比較常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病，主要有四種分型，臨床常見的是Ⅰ型過敏性疾病，包括過敏性鼻炎、過敏性哮喘、蕁麻疹等[1]。世界衛(wèi)生組織（WHO）已將過敏性疾病列為21世紀重點研究和防治疾病[2]。Ⅰ型過敏反應(yīng)中最常見是由血清免疫球蛋白E（IgE）介導的。血清IgE是健康人體中含量低于免疫球蛋白總量0.001%的免疫因子[2]，含量雖低但在變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用，是臨床進行過敏診斷的重要指標[3]。目前臨床進行患者診斷時血清IgE的具體檢測指標并不相同，存在血清IgE和細胞結(jié)合IgE之分，還有醫(yī)生對處理后的樣本進行放置，監(jiān)測放置一段時間后的血清IgE和細胞結(jié)合IgE，不同的檢測指標將對患者的檢查結(jié)果、治療及預后產(chǎn)生不同的影響[3]。臨床也存在血清IgE水平升高是否確定為過敏的爭議，是否存在患者已經(jīng)產(chǎn)生過敏反應(yīng)而血清IgE水平?jīng)]有升高或血清IgE水平明顯升高而患者沒有發(fā)生過敏[4-6]。本研究以2018年7月～2019年7月于本院進行變態(tài)反應(yīng)性疾病診斷和治療的96例患者為研究對象，與健康體檢人員進行比較，比較兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平，以及標本室溫下放置48h和96h時兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平，同時對過敏患者免疫原特異性IgE種類進行分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年7月～2019年7月于本院進行變態(tài)反應(yīng)性疾病診斷和治療的患者96例，定義為觀察組。其中患者年齡4～61歲，平均（33.2±5.6）歲，所有患者均經(jīng)免疫印跡法檢測，確診為過敏原特異性IgE陽性。96例患者中男42例，女54例，其中患有哮喘36例，蕁麻疹42例，濕疹16例，藥疹、癢疹等其他變態(tài)反應(yīng)性疾病共2例。患者入選標準：由過敏原檢測及皮膚試驗而確診；近2周均未服用抗過敏藥；無其他種類的免疫性疾病；未并發(fā)腫瘤；病歷數(shù)據(jù)資料完整。另將同期進行健康體檢人員，過敏原特異性IgE抗體陰性者50例，定義為對組照，其中男26例，女24例，年齡6～63歲，平均（36.6±11.4）歲。兩組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會的認可與批準。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 觀察組和對照組患者均經(jīng)肘靜脈采血兩管：一管采集于血清管，血液樣本后分離血清，保存于4℃，于當天或次日內(nèi)完成檢測；另一管采集于EDTA-K2抗凝管，保存于4℃，于當天進行標本預處理。

1.2.2 過敏原特異性IgE的測定 觀察組采用免疫印跡法檢測，依據(jù)IgE抗體檢測試劑盒說明書操作，進行吸入性及食物性過敏原特異性測定，判斷觀察組患者過敏原特異性IgE的種類分布，利用歐蒙公司EIROLineScan系統(tǒng)軟件判定檢測結(jié)果＜35000U/L為陰性，≥35000U/L為陽性[7-9]。

1.2.3 血清總IgE的測定 采用羅氏 cobas e601電化學發(fā)光法檢測器進行兩組患者的血清總IgE的測定。

1.2.4 細胞結(jié)合IgE的測定 按上海酶聯(lián)生物生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒說明書對EDTA-K2抗凝標本采取預處理：即取1mL全血，離心，棄去上清液，加入等量的 ACK Lysis Buffer 溶解紅細胞，冰敷2min，用于解離細胞膜結(jié)合IgE；再次進行離心，取上清，加入適量的5%氫氧化鈉溶液中和，總體積維持1mL，按照試劑盒說明書要求進行檢測。

1.3 觀察指標

探討觀察組患者過敏原特異性IgE種類，比較兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平，以及標本室溫下放置48h和96h時兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS20.0分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組患者過敏原特異性IgE種類分布情況

觀察組患者存在1種過敏原陽性者13例（13.54%），2種過敏原陽性 53例（55.21%），3種及以上者30例（31.25%）。其中因食物引起過敏者67例，多為海鮮和高蛋白食品；因吸入引起過敏者82例，多為塵螨、花粉和霉菌。見表1。

表1 觀察組患者過敏原特異性IgE種類分布情況

2.2 兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平比較

觀察組血清IgE和細胞結(jié)合IgE水平明顯高于對照組（P＜0.001），觀察組細胞結(jié)合IgE水平明顯高于血清IgE（P＜0.001），見表2。

表2 兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平比較（x ± s，ng/mL）

2.3 標本室溫放置不同時間后血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平比較

經(jīng)過48h和96h的放置后，血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平明顯降低，且放置時間越長，影響越大，見表3～4。

表3 放置后兩組血清IgE水平比較（x ± s，ng/mL）

表4 放置后兩組細胞結(jié)合IgE水平比較（x ± s，ng/mL）

3 討論

臨床研究表明，Ⅰ型超敏反應(yīng)的發(fā)生多與IgE相關(guān)，機體受到變應(yīng)原刺激時，血清IgE水平上升，IgE通過與肥大細胞或嗜堿性粒細胞結(jié)合，產(chǎn)生致敏狀態(tài)[10-12]。當機體再次與該抗原接觸時，變應(yīng)原可與細胞表面的IgE發(fā)生結(jié)合，產(chǎn)生過敏反應(yīng)[13]。已有研究發(fā)現(xiàn) ，血清IgE不能完全反映機體IgE水平，患者機體內(nèi)可能有大量IgE與單核細胞、嗜堿性粒細胞和中性粒細胞結(jié)合，使血清IgE水平正常或較低，使檢查結(jié)果呈假陰性狀態(tài)[14-15]。

本研究以2018年7月～2019年7月于本院進行變態(tài)反應(yīng)性疾病診斷和治療的96例患者為研究對象，與健康體檢人員進行比較，分析兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平，以及標本室溫下放置48h和96h時兩組血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平，同時對過敏患者免疫原特異性IgE種類進行分析。本研究發(fā)現(xiàn)過敏患者存在1種過敏原陽性者13例（13.54%），2種過敏原陽性53例（55.21%），3種及以上者30例（31.25%）。其中因食物引起過敏者67例，多為海鮮和高蛋白食品；因吸入引起過敏者82例，多為塵螨、花粉和霉菌；經(jīng)檢測，結(jié)果表明，觀察組血清IgE和細胞結(jié)合IgE水平明顯高于對照組（P＜0.001），觀察組細胞結(jié)合IgE水平明顯高于血清IgE（P＜0.001）；經(jīng)過48h和96h的放置后，血清IgE與細胞結(jié)合IgE水平明顯降低，且放置時間越長，影響越大。

綜上所述 ，血清IgE 水平和細胞結(jié)合IgE水平檢測均可作為過敏性疾病的臨床診斷指標，但臨床檢查時應(yīng)注意，二者指標水平會因樣品放置時間延長而降低，影響結(jié)果。未來還將對患者血清IgE水平和細胞結(jié)合IgE水平與患者過敏性癥狀的相關(guān)性展開研究。