Xpert MTB/RIF技術對肺結核的靈敏度和特異性分析

陸善詞 黃 貞 張綺麗 馮健華 郭 煒

廣東省中山市第二人民醫院檢驗科，廣東中山 528447

結核病為結核分岐桿菌（MTB）引起的傳染病，其對人類健康造成重大威脅[1]，涂片鏡檢的敏感度不高，容易出現漏診，也無法進行耐藥檢測；采用分枝桿菌培養的敏感度、特異性均較高，也能進行藥敏試驗，但是該方法的結果回報時間過長，對臨床醫生制定治療決策不利[2-3]。利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增（Xpert MTB/RIF）技術以半巢式實時定量PCR為基數基礎，對結核桿菌與利福平耐藥同時進行分子水平上的檢測，其具有檢測結果準確可靠、結果回報時間短的優勢，能在早期檢測耐藥結核桿菌與結核桿菌，從而為診斷肺結核與啟動治療時間創造了良好的條件[4-5]。本研究主要對XpertMTB/RIF技術應用于肺結核診斷的靈敏度與特異性進行分析，從而為臨床早期診斷肺結核提供一定參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經本院倫理委員會批準后，選取2017年8月～2019年6月我院肺科門診收治的300例初診肺結核可疑患者300例，其中男186例、女114例，年齡22～65歲、平均（42.2±2.2）歲。300例患者均表現胸痛、咯血、咳嗽、咳痰等癥狀，患者的臨床資料完整，知情同意參與研究。

1.2 方法

留取所有患者的痰標本共3份，實驗室對3份標本分別進行涂片鏡檢、固體培養以及Xpert MTB/RIF檢測。

1.2.1 涂片鏡檢 嚴格按照《結核病診斷實驗室檢查規程》中的操作程序進行檢查。

1.2.2 分離羅氏固體培養 吸取痰標本2mL，放置于帶有螺旋蓋的前處理管中，根據樣本的形狀加入1～2倍體積的4%氫氧化鈉前處理液，放置于渦旋振蕩器上振蕩30～60s直至標本充分混合，室溫下放置15min。待前處理完畢后，吸取前處理液0.1mL并將其均勻接種于2支酸性羅氏培養基斜面上，斜面水平向上，37℃下培養24h，轉變為直立面培養。接種完畢后3、7d對培養情況進行觀察，每7天觀察1次，將生長結果紀錄于分離培養結果記錄本上[6]。

1.2.3 Xpert MTB/RIF檢測 取痰標本共1mL，加入前處理管，加入SR痰標本處理液，量為2倍痰標本體積，將前處理管旋緊后震蕩15～30s，室溫下靜置15min，直至痰標本充分液化。將反應盒打開，取后處理樣品共2mL，經加樣孔緩慢加入反應盒，反應盒放置于檢測模塊，由儀器進行自動檢測。待反應結束后，經檢測系統窗口讀出測試結果。

1.3 觀察指標

2個月后進行隨訪，將隨訪結果作為金標準，比較涂片鏡檢、固體培養以及Xpert MTB/RIF檢測對肺結核桿菌的靈敏度、特異性以及準確度。采用Kappa一致性檢驗，Xpert MTB/RIF檢測與固體培養的一致性，Kappa值≥0.75提示一致性較好。

1.4 統計學處理

本研究數據經SPSS19.0處理，計數資料（%）采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 隨訪結果

300 例初診肺結核可疑患者中，經臨床綜合診斷與治療后，確診肺結核244例，占81.33%；其余56例患者為非肺結核患者，占18.66%。

2.2 涂片鏡檢與金標準比較

300 例患者經涂片鏡檢結果：漏檢3例，陽性48例，陰性249例，涂片鏡檢的靈敏度為19.67%（48/244）、特異性為 22.22%（56/252）、準確度為18.94%（104/549），見表1。

表1 涂片鏡檢與金標準比較

2.3 固體培養與金標準比較

300 例患者經固體培養檢查結果：漏檢28例，陽性98例，陰性174例，固體培養的靈敏度為36.03%（98/272）、特異性為 27.72%（56/202）、準確度為32.49%（154/474），見表2。

表2 固體培養與金標準比較

2.4 Xpert MTB/RIF技術與金標準比較

300 例患者經Xpert MTB/RIF技術檢查結果：漏檢0例，陽性115例，陰性185例，Xpert MTB/RIF的靈敏度為47.13%（115/244）、特異性為30.27%（56/185）、準確度為 35.26%（171/485），見表3。

表3 Xpert MTB/RIF技術與金標準比較

2.5 Xpert MTB/RIF技術與固體培養的靈敏度、特異性以及準確度一致性分析

Xpert MTB/RIF技術與固體培養的靈敏度、特異性以及準確度分析發現，Kappa值為0.860、0.879、0.872，均＞ 0.75，二者一致性良好。

3 討論

控制肺結核疫情、消除結核病對人類健康造成危害的關鍵在于早發現、早診斷、早治療。長期以來，結核病診斷技術仍然是傳統的細菌學、影像學檢查方法，盡管培養法、涂片法的特異性高，但是其敏感度低而容易出現漏診；采用傳統 “培養+藥敏”的方法結果回報時間長，這對臨床醫生制定結核病初始治療決策不利，容易造成患者的病情延誤，對控制傳染源、防止疫情擴散也不利。傳統涂片鏡檢陽性檢出率低；固體培養法的耗時較長，通常在8周左右，因此對肺結核的診療不利[7-9]。Xpert MTB/RIF技術回報時間短的優勢使其前移了肺結核的診斷關口，這有助于實現早發現、早診斷、早治療。

Xpert MTB/RIF技術基礎為半巢式實時定量PCR技術，其同時對利福平與MTB進行分子水平上的檢測；該技術具有結果準確可靠的優勢，結果回報時間短，回報時間在2h以內，這一優勢使其具有取代傳統TB檢測的潛力；該技術將PCR擴增與檢測整合于封閉反應盒內，將樣本加入后自動在反應盒內完成試驗過程，具有操作簡便的特點，簡化了操作，減少了檢驗人員的工作量；該技術還具有樣本處理簡單的優勢，液化樣本的試劑具有滅活MTB的能力，減少了檢驗過程中的生物污染風險，因此該技術具有作為即時檢驗工具的潛力；由于該技術對實驗室基礎設施的要求不高，該技術也可以應用于城鎮實驗室，因此其具有推廣的價值[10-13]。該技術還可以對利福平的耐藥性進行評價，其有助于指導臨床治療。

本研究結果提示，Xpert MTB/RIF技術診斷肺結核的靈敏度、特異性、準確度均高于傳統涂片鏡檢，該技術的檢測結果與固體培養的一致性良好，提示這一技術檢測肺結核的靈敏度、特異性以及準確度均較傳統檢測方法更高。這一技術可以進行結核分枝桿菌的快速鑒定，還能快速檢測對利福平的耐藥性，能發現傳統檢測技術難以發現的結核患者，這對早發現、早診斷、早治療具有重要意義[14-15]。

但需要注意的是，Xpert MTB/RIF技術的檢測成本比較高，因此這一技術當前還無法廣泛應用于基層醫院，在當前資源有限的局面下，建議將該技術應用于利福平耐藥率比較高的醫院。該技術大范圍應用仍然需要進行不斷研究。

綜上所述，Xpert MTB/RIF技術應用于肺結核診斷的靈敏度、特異性均較涂片鏡檢更高，與固體培養的一致性較高，其具有操作簡便、檢驗迅速的優勢，值得推廣。