HPLC-RID法測定銀柴顆粒中蔗糖的含量研究

謝瑩瑩 龍海燕▲ 粟 貴 石 蓉

1.湖南省藥品檢驗研究院 （湖南藥用輔料檢驗檢測中心），湖南長沙 410001；2.湖南省藥品質量評價工程技術研究中心，湖南長沙 410001

銀柴顆粒是我國獨有品種，本品主要由忍冬藤、蘆根、薄荷等5味藥材組成，具有清熱，解表，止咳的功效，臨床上用于治療風熱感冒，發熱咳嗽[1-2]。蔗糖作為藥用輔料在藥劑中主要作為甜味劑或矯味劑，廣泛用于口服制劑中，是糖漿劑、顆粒劑的主要成分，片劑的填充劑、黏合劑，糖衣片的包衣材料等[3-4]。銀柴顆粒制法中顯示采用蔗糖作為甜味劑或矯味劑，而現行質量標準無蔗糖檢查項，那么蔗糖的實際添加情況無法得知，不排除個別企業為降低成本低量投料的可能。調研時，有企業指出國內有廠家在蔗糖中可能人為添加葡萄糖等其他糖或直接用比蔗糖便宜的如葡萄糖、麥芽糖等單糖或雙糖代替蔗糖以降低成本。目前，采用高效液相色譜法分析檢測不同糖在食品、乳制品、中成藥的文獻很多[5-11]，我們參考相關文獻[12-15]采用HPLC法結合示差折光檢測器對蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖含量進行檢測，為合理有效控制銀柴顆粒質量提供技術手段。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters公司e 2695高效液相色譜儀（2414 RI檢測器）；瑞士Mettler-Toledo公司MS205DU電子天平。

1.2 試藥

果糖 對 照品（批號：100231-201606，純 度：99.7%）；D-無水葡萄糖對照品（批號：10833-201506，純 度：99.9%）；麥芽 糖 對 照 品（批號：100287-201303，純度：94.3%）；蔗糖對照品（批號：111507-201303，純度：99.8%）；以 上對照品均來自中檢院。乙腈（批號：AH015-4HC）為色譜級，購自美國默克公司。銀柴顆粒12批。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Alltechchrom Prevail carbohydrate ES 5u色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（75∶25）；流速：1.0mg/mL；色譜柱溫度：35℃；檢測器：示差檢測器；檢測器溫度：40℃；進樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

供試品溶液制備：取本品0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

對照品系列溶液制備：分別精密稱取果糖、葡萄糖、麥芽糖和蔗糖對照品50.81、50.84、26.53、78.28mg，置同一10mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，分別精密量取適量，用水定量稀釋，配成對照品系列溶液（其中果糖和葡萄糖濃度約為0.5、1、2、3、4、5mg/mL；蔗糖濃度約為 0.75、1.5、3、4.5、6、7.5mg/mL；麥芽糖濃度約為 0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/mL。

2.3 專屬性試驗

取空白溶劑（水）、供試品溶液、對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀記錄色譜圖，結果：空白溶液對樣品測定無干擾，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖分離度符合規定。典型圖譜見圖1 。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關系考察

取“2.2”項下對照品溶液中的線性系列溶液，按“2.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為X軸、峰面積為Y軸進行線性回歸，測定結果見表1。

2.5 檢出限和定量限

取“2.2”項下對照品貯備液適量，逐級稀釋，并進行測定，以信噪比S/N=10和S/N=3時各對照品的量為定量限和檢測限，見表1。

表1 線性關系、檢出限、定量限、方法檢出限結果

表2 回收率試驗結果（n=6）

表3 樣品測定結果（%）

2.6 精密度試驗

取“2.2”項下線性同一系列溶液，按“2.1 ”項下的色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積。結果蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖峰面積RSD分別為 1.50%、1.17%、1.63%、2.29%，說明進樣精密度良好。

2.7 重復性試驗

按“2.2”項下供試品溶液，取樣品（批號：170401）0.5g，精密稱定，平行制備6份供試品溶液，并按“2.1 ”項下的色譜條件進樣分析，結果蔗糖、葡萄糖有檢出，平均含量分別為49.37%、43.85%，RSD分別為1.45%、1.29%，說明本方法重復性好。

2.8 穩定性試驗

取“2.7”項下的供試品溶液1，在室溫25℃放置 0、2、4、6、8、12、24h 各進樣 20μL，結果蔗糖、葡萄糖測定值的RSD分別為0.50%、2.03%，說明供試品溶液在24h內穩定性較好。

2.9 回收率試驗

（1）分別稱取6份樣品（批號：170401，其中蔗糖、葡萄糖含量分別為49.37%、43.85%）0.25g，置50mL量瓶中，分別精密加入蔗糖、葡萄糖對照品適量，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為回收率溶液①；（2）分別稱取6份樣品（批號：170401，果糖、麥芽糖含量均未檢出）0.5g，置50mL量瓶中，分別精密加入果糖、麥芽糖對照品適量，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為回收率溶液②；取回收率溶液按“2.1”項下方法測定，計算回收率，結果見表2。蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖的平均回收率分別為100.05%、99.01%、96.49%、96.62%，RSD分別為1.00%、1.36%、1.93%、4.49%。

2.10 樣品測定結果

取銀柴顆粒12批樣品各適量，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算樣品中蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖含量。見表3。

3 討論

本實驗結果顯示12批樣品均未檢出麥芽糖，說明收集到的樣品均未非法添加麥芽糖。B、C、E、F企業6批樣品中均檢出果糖，但果糖量僅為同批次樣品中的蔗糖含量的1%，推測果糖可能為蔗糖輔料中的雜質成分，說明未非法添加果糖。A企業5批樣品中均檢出葡萄糖，且檢出量較大43.85%～50.75%，與同批次樣品中的蔗糖含量相比約為1∶1；根據購買A企業樣品時收集到的說明書可知輔料為蔗糖，說明該企業可能人為添加葡萄糖進行投料，而企業并未對其質量進行評估，存在一定的安全隱患。

本研究建立了一種有效檢測銀柴顆粒中蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖的高效液相色譜法，該方法簡便、準確，可有效分離各糖類成分，可真實反映銀柴顆粒中蔗糖的實際添加情況，以防人為添加其他糖類物質，可為銀柴顆粒在生產過程中的質量控制提供參考性資料依據。