MMP-9、CD15s在乳腺癌組織中的表達及其相關性①

尹佳新，田 寅，葛忠耀，劉應紅，徐 雷，于 娜

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤外科，黑龍江 佳木斯 154003)

女性乳腺癌發病率呈逐年升高。觀察統計近年來女性乳腺癌發病情況，從地方范圍到全國范圍發病率均呈現逐年上升的趨勢[1]。Jin[2]統計研究得出各個年齡段的乳腺癌發病率都有所增加,其中青年女性(24～35歲)增高比例最大。由以上數據可看出，女性乳腺癌發病率的增長已不容忽視,如何根據其臨床病理學特點有針對性的制定綜合治療方案,從而提高患者的早期診斷成為了臨床重點。

1 材料與方法

1.1 材料

收集佳木斯大學附屬第一醫院病理科2012-02～2018-09收撿的手術標本存檔蠟塊118例，依據其免疫組化染色結果分為陽性表達組(實驗組)和陰性表達組(對照組)，所有標本均經術后病理證實為乳腺癌，年齡在22～68歲。

1.2 試劑

免疫組化s-p法鼠抗人 MMP-9 單克隆抗體、鼠抗人 CD15s 單克隆抗體、 DAB顯色試劑盒等試劑盒購自北京中杉生物技術有限公司。文中主要涉及的儀器為倒置顯微鏡及顯微鏡照相系統,病理組織包埋機,免疫組化專用抗原修復架及修復盒。

1.3 方法

運用免疫組織化學技術檢測乳腺癌患者組織中MMP-9、CD15s的表達情況，由兩位經驗豐富的病理醫師進行雙盲閱片。

1.4 結果判定

組織結構及背景清晰,MMP-9蛋白陽性表達為胞漿內出現棕黃色顆粒，CD15s抗原陽性表達為在腺腔緣、細胞膜和( 或) 細胞漿中信號呈棕黃色。無陽性染色細胞為“-”，陽性細胞數<25%為“+”，陽性細胞數25%～50%為“”，陽性細胞數>50%為“”。

1.5 統計學方法

采用 SPSS 22.0 統計軟件進行數據分析。根據實驗要求，標本的陽性率的比較采用χ2檢驗，分析MMP-9 及CD15s在乳腺癌組織中的表達是否具有相關性，采用Spearman 相關等級分析，P<0.05為有顯著性的檢驗標準。

2 結果

2.1 病理結果

通過免疫組織化學方法對實驗標本進行檢測，結果顯示MMP-9蛋白陽性表達為在細胞漿內出現棕黃色顆粒、CD15s抗原陽性表達為在細胞膜和細胞漿中呈棕黃色信號，本實驗標本中MMP-9的陽性表達68例，CD15s陽性表達81例。見圖1～4。

圖1 MMP-9在乳腺癌組織中高表達(×400)

圖2 MMP-9在乳腺癌組織中低表達(×400)

圖3 CD15s在乳腺癌組織中高表達(×400)

圖4 CD15S在乳腺癌中低表達(×400)

2.2 MMP-9、CD15s與相關臨床參數

本組實驗對118例乳腺癌組織進行免疫組化染色，其中MMP-9陽性表達組患者同側腋窩淋巴結轉移46例(67.6%)顯著高于陰性表達組23例(46.0%)，有統計學差異(χ2=5.560，P=0.015)；MMP-9陽性表達組患者有脈管癌栓39例(57.3%)顯著高于陰性表達組19例(38.0%)，差異具有統計學意義(χ2=7.408，P=0.006)；CD15s陽性表達組患者同側腋窩淋巴結轉移57例(70.4%)顯著高于陰性表達組15例(40.5%)，有統計學差異(χ2=9.778，P=0.002)；CD15s陽性表達組患者有脈管癌栓45例(55.6%)顯著高于陰性表達組11例(29.7%)，差異具有統計學意義(χ2=6.506，P=0.009)。按照癌癥聯盟委員會( AJCC) TNM分期標準進行分期，MMP-9陽性表達組I期、II期患者 48例、陰性表達組I期、II期患者42例，陽性表達組III期患者20 例，低表達組III患者 8例，兩組數據相比較，MMP-9高表達III期患者比例高于陰性表達組，差異具有統計學意義(χ2=2.865 ,P=0.049)。CD15s陽性表達組I期、II期患者60 例、陰性表達組I期、II期患者 30 例，陽性表達組III期患者19 例，陰性表達組III患者9 例，兩組數據相比較，CD15s陽性表達組III期患者比例高于陰性表達組，差異具有統計學意義(χ2=6.145,P=0.015)。見表1。

表1 MMP-9、CD15s與臨床參數分析

2.3 MMP-9、CD15s與相關病理參數

MMP-9高表達組患者ER陽性表達26例顯著低于低表達組36例，差異具有統計學意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達組患者PR陽性表達32例(47.5%)顯著低于陰性表達組34例(68.0%)，差異具有統計學意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達組Ki67值>14%為46例(61.8%)高于陰性表達組27例(54.0%)但統計學分析并無明顯差異(P﹥0.05)；.MMP-9陽性表達組HER-2高表達33例(48.5%)顯著高于陰性表達組16例(30.6%)，差異具有統計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組ER陽性表達35例(43.2%)陽性表達率顯著低于陰性表達組25例(67.6%)，差異具有統計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組PR陽性表達35例(43.2%)其與陰性表達組19例(51.3%)相比較差異具有統計學意義(P<0.05)；CD15s陽性表達組KI67值>14%為55例(67.9%)顯著高于陰性表達組14例(37.8%)，差異具有統計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組HER-2高表達45例(55.6%)顯著高于陰性表達組15例(40.5%)，差異具有統計學意義(P﹤0.05)。見表2。

表2 MMP-9、CD15S與病理參數的分析

2.4 MMP-9、CD15s與年齡因素的影響

染色分析比較年齡≤40歲患者乳腺癌組織中MMP-9的染色強度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統計學意義(P﹤0.05)；年齡≤40歲患者乳腺癌組織中CD15S的染色強度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統計學意義(P﹤0.05)。見表3。

表3 年齡與MMP-9、CD15s表達強度的關系

3 討論

乳腺癌的發生、發展是一個多因素、多環節影響的十分復雜的過程。區分良性腫瘤和惡性腫瘤最重要的特征是惡性腫瘤細胞可以相對無限地浸潤、增殖和轉移。如何控制腫瘤轉移是癌癥治療中的重難點。

本研究結果認為同側腋窩淋巴結情況隨MMP-9的表達增高而增高。Yang證實了MMP-9的高表達能影響乳腺癌的生物學行為并與其淋巴結受累有關，與本實驗結果相一致。研究表明Basal-like型乳腺癌患者MMP-9 陽性者淋巴結轉移率顯著高于非Basal-like型[3]。結果提示MMP-9陽性表達組患者ER、PR陽性表達率顯著低于陰性表達組，研究認為雌激素在大部分組織中都表現出對MMP-9的抑制效應,在不同的組織器官中可能會通過不同的途徑對MMP-9進行調控。本研究認為MMP-9的高表達與雌激素的作用紊亂相關，可能與某種調節機制解除了雌激素對MMP-9的抑制作用有關，有待進一步研究，本組數據顯示MMP-9陽性表達組患者有脈管癌栓顯著高于陰性表達組，國外學者研究認為MMP- 9在乳腺侵襲性導管癌中高表達，與組織學分級和總的生存率密切相關[4]。

本實研究結果認MMP-9的染色強度與年齡及乳腺癌的侵襲性相關。與Cepeda[5]研究結果認為MMP-9在乳腺癌中的表達強度越高其預后越差的報道相一致。Liang[6]研究通過COX 多因素回歸分析發現年齡、淋巴結轉移數是影響總生存的獨立危險因素。研究表明MMP-9可以通過增強血管內皮因子和其受體的結合體功能，從而促進血管和淋巴管的生長。另外，MMP-9通過能加工GTGF，阻止其與VEGF結合釋放血管內皮因子，從而促進血管新生的過程，腫瘤組織內豐富的血管網為腫瘤細胞的增殖、生物侵襲提供所需的營養物質。

本組實驗數據顯示CD15s陽性表達組患者同側腋窩淋巴結轉移率顯著高于陰性表達組同側腋窩淋巴結轉移率。與Renkonen研究結果相同認為乳腺癌組織中E-選擇素和其配體CD15s同時表達,腫瘤細胞具有更高的侵襲性。此外Wata[7]通過監測小細胞肺癌患者術前的血清唾液酸路易斯酶X值來預測患者術中的淋巴結轉移情況和術后的生存率，結果認為CD15s的檢測對于術前評估及預后有重要臨床價值。研究認為PR是除腫瘤大小、淋巴結轉移情況外另一個重要的預后指標, PR陽性患者較ER陽性患者更能從內分泌治療中獲益。PR陰性導致癌細胞在增殖過程激素受體表達減少造成對內分泌治療反應差或無反應, 加之HER-2過表達, 因此多數患者需要行化療及靶向治療。

有研究認為腫瘤細胞表面CD15s表達量與腫瘤侵襲轉移、預后密切相關。其表達強度與患者預后生存期呈負相關性。有研究發現選擇素配體CD15s在乳腺癌組織中濃度增加，其遠處轉移的患者血漿中增加顯著。Dong[8]研究認為SLeX表達狀況與乳腺癌轉移潛能有關且SLeX陽性患者復發率較高，發現年齡為影響其表達的因素，無淋巴結轉移屬于保護性因素, 而較小的年齡是復發的危險因素。

尚培中等[9]在胃癌中進行的MMP-9與CD15s實驗分析，其結果認為共同表達組胃癌微血管密度高于單表達組胃癌的微血管密度,共同表達組的臨床分期、組織學分級均高于對照組。認為MMP-9降解細胞外基質消除了基質中抑制內皮細胞增殖的物質, 給CD15s促進內皮細胞的增殖表達CD62創建了條件，CD62與其配體CD15s相結合在腫瘤細胞中發揮特定的生物學作用，通過將編碼人類α1,2-巖藻糖基轉移酶基因的一部分cDNA轉染到卵巢癌中，建立了組成型表達Lewis抗原的穩定細胞系RMG-1，發現RMG-1-hFUT細胞顯示出比對照組更高的侵襲能力，認為Lewis抗原可以下調MMPs抑制劑TIMP-1、2從而上調MMP-9是Lewis抗原促進細胞侵襲的機制之一。MMP-9、CD15s在腫瘤細胞中協同發揮作用促進腫瘤細胞的浸潤及轉移[10]。揭示了MMP-9和CD15s在惡性腫瘤中的相互協調促進作用。

本研究認為MMP-9在女性乳腺癌中的表達隨著同側淋巴結處轉移的增多、脈管癌栓、HER-2過表達發生率的逐漸增高，CD15s的表達也隨之升高。本實驗表明MMP-9、CD15s的表達與乳腺癌腫瘤細胞的侵襲轉移密切相關，可作為聯合檢測的相關指標。但是本實驗樣本量較小，其結果具有一定局限性,尚需進一步實驗研究。