胃癌患者TNS1蛋白、PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)意義及與臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性

李偉偉 楊慶輝 蔡衛(wèi)梅

胃癌為消化系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤，據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，全世界胃癌發(fā)病率10～150/10萬(wàn)，我國(guó)作為胃癌高發(fā)國(guó)家，其發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，每年新確診患約40萬(wàn)人，死亡26萬(wàn)/年，位居癌癥死亡首位［1-2］。盡管近年來(lái)針對(duì)胃癌的基礎(chǔ)研究已取得一定進(jìn)展，如胃癌分子分型實(shí)現(xiàn)了重大突破，但臨床上用于預(yù)測(cè)胃癌預(yù)后的分子標(biāo)志物仍十分有限。磷酸肌醇依賴(lài)性蛋白激酶1（Phosphoinositol-dependent protein kinase 1，PDK-1）作為一種由556個(gè)包含C端PH結(jié)構(gòu)域、N端激酶結(jié)構(gòu)域氨基酸組成的單體多肽酶，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、凋亡密切相關(guān)［3］。張力蛋白1（Tensin1，TNS1）屬于Tensin蛋白家族，其作用與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏度及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)［4］，有學(xué)者指出，TNS1蛋白與乳腺癌轉(zhuǎn)移有關(guān)，并影響患者預(yù)后［5］。基于此，本研究檢測(cè)胃癌患者組織中TNS1蛋白、PDK-1蛋白陽(yáng)性，探究其與患者臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2014年5月至2016年10月本院112例胃癌患者臨床病理資料，男79例，女33例，年齡40～72歲，平均年齡（56.42±8.65）歲。收集112例患者胃癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織病理學(xué)標(biāo)本，判定組織類(lèi)型、細(xì)胞分級(jí)、肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)確診為胃腺癌；②病理科醫(yī)師確認(rèn)石蠟包埋病理學(xué)組織可用于切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)；③臨床病理及隨訪資料完整；患者自愿簽署知情同意書(shū)；排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未行放化療及生物靶向治療；②因標(biāo)本中組織蛋白降解造成免疫組化染色結(jié)果不滿(mǎn)意；③臨床病理及隨訪資料缺失。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑

山羊抗人TNS1多克隆抗體、PDK-1抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，免疫組織化學(xué)染色試劑盒及二胺基聯(lián)苯胺顯色試劑盒購(gòu)自中國(guó)福州邁新生物公司。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 TNS1、PDK-1蛋白

制作5μm正常癌旁組織、胃癌組織石蠟切片，H2O2（3%）液常溫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶活性，微波修復(fù)抗原，PBS常規(guī)沖洗，山羊抗人TNS1多克隆抗體工作液（1∶100稀釋?zhuān)琍DK-1抗體工作液（1%），4℃過(guò)夜，加入二抗（IgG），室溫30 min，鏈霉素康生物蛋白-過(guò)氧化物加入后，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明、封片。

1.3.2 判定方法

雙盲法統(tǒng)計(jì)結(jié)果，采用半定量法，即染色陽(yáng)性細(xì)胞比例與染色強(qiáng)度等級(jí)之乘積。隨機(jī)抽取10個(gè)高倍視野（×400）計(jì)數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞＜10為0級(jí)，10%～25%為1級(jí)，26%～50%為2級(jí)，51%～75%為3級(jí)，76%～100%為4級(jí)；根據(jù)染色強(qiáng)度：無(wú)色為0級(jí)，淡黃色為1級(jí)，棕黃色為2級(jí)，棕褐色為3級(jí)，根據(jù)等級(jí)之乘積，＜6為陰性，≥6為陽(yáng)性。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察統(tǒng)計(jì)胃癌組織與癌旁組織TNS1蛋白、PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)，胃癌組織中TNS1蛋白、PDK-1蛋白表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)性，并分析胃癌患者預(yù)后危險(xiǎn)因素。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件分析，計(jì)量資料用（）表示，t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組中TNS1蛋白、PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率

胃癌組織中TNS1、PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組TNS1蛋白、PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率［n（%）］Table 1 positive expression rates of TNS1 protein and pdk-1 protein in 2 groups［n（%）］

2.2 TNS1、PKK-1蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征相關(guān)性

不同年齡、性別、腫瘤最大直徑、病理學(xué)分級(jí)、TMN分期及浸潤(rùn)深度患者胃癌組織中TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），胃癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組織中TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 隨訪和生存情況

胃癌組織中PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)者3年總體生存率低于陰性表達(dá)者，TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)者3年總體生存率高于陰性表達(dá)者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3、圖1。

表3 PDK-1蛋白、TNS1蛋白表達(dá)與胃癌3年總體生存率的相關(guān)性Table 3 correlation between expression of pdk-1 protein and TNS1 protein and 3-year overall survival rate of gastric cancer

圖1 TNS1、PDK-1生存分析Figure 1 TNS1、PDK-1 survival analysis

3 討論

研究表明，Tensin蛋白廣泛參與細(xì)胞黏附、增殖、分化、遷移、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等腫瘤生物學(xué)活動(dòng)［6］。目前，研究最為廣泛、深入的Tensin家族成員為T(mén)ensin4蛋白，其與胃癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［7］，其次為T(mén)ensin2、Tensin3蛋白，二者可能發(fā)揮抑癌作用［8］，TNS1蛋白與腫瘤相關(guān)性亦有少量報(bào)道。本研究分析TNS1蛋白表達(dá)與胃癌的關(guān)系，結(jié)果顯示TNS1蛋白可能與胃癌發(fā)病有關(guān)。進(jìn)一步分析表明，胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，且TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者3年總體生存率高于陰性表達(dá)者，提示TNS1蛋白負(fù)性調(diào)控胃癌轉(zhuǎn)移。國(guó)外學(xué)者Hall等［9］表明，乳腺癌攜帶TNS1蛋白特定突變基因型，細(xì)胞系MDA-MB231遷移與侵襲能力明顯增強(qiáng)，提示乳腺癌轉(zhuǎn)移中，TNS1蛋白具有潛在作用。另有學(xué)者指出，敲低不同乳腺癌細(xì)胞系中TNS1蛋白表達(dá)水平，可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞系侵襲能力，促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移，且進(jìn)一步研究表明，乳腺癌轉(zhuǎn)移組織中，TNS1蛋白表達(dá)顯著下降，且TNS1蛋白高表達(dá)患者無(wú)轉(zhuǎn)移生存時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)［10］。綜合上述研究結(jié)果表明，TNS1蛋白可能同時(shí)具有促癌、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用。國(guó)外學(xué)者在研究前列腺癌GRHL2基因時(shí)發(fā)現(xiàn)其也具有類(lèi)似雙重作用，一方面維持雄激素受體水平，增強(qiáng)活性，促進(jìn)前列腺癌發(fā)生，另一方面抑制上皮-間葉轉(zhuǎn)化、細(xì)胞侵襲活性，抑制前列腺癌轉(zhuǎn)移［11］。但TNS1蛋白的雙重作用仍有待細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)及機(jī)制研究結(jié)果證實(shí)。

PDK-1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［12］。PDK-1通過(guò)激活A(yù)GC激酶家族，調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖，其中PI3K/PKB即為經(jīng)典調(diào)控通路。本研究中提示PDK-1蛋白參與胃癌發(fā)病，PDK-1促進(jìn)細(xì)胞增殖同時(shí)，還可抑制細(xì)胞凋亡，乳腺癌中高度表達(dá)PDK-1細(xì)胞株增殖能力明顯高于野生株［13］。PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞黏附內(nèi)皮細(xì)胞能力強(qiáng)，而腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞緊密結(jié)合才可穿過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)層，建立轉(zhuǎn)移灶［14］。另有研究表明，PDK-1在人胚胎組織中廣泛表達(dá)，在正常甲狀腺中表達(dá)正常，甲狀腺癌患者PDK-1蛋白表達(dá)異常增加，且隨著甲狀腺癌患者TMN分期發(fā)展，PDK-1表達(dá)隨之升高［15］。本研究結(jié)果提示PDK-1蛋白表達(dá)與胃癌病情進(jìn)展及腫瘤惡性程度有關(guān)。本研究中PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)者3年總體生存率低于陰性表達(dá)者，說(shuō)明PDK-1可促進(jìn)癌細(xì)胞分化，增強(qiáng)侵襲、遷移能力，其高表達(dá)可降低胃癌患者預(yù)后。

綜上所述，PDK-1、TNS1蛋白在胃癌組織中高表達(dá)，PDK-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤最大直徑、病理學(xué)分級(jí)、TMN分期、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，TNS1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，均與胃癌預(yù)后密切相關(guān)，檢測(cè)胃癌組織中PDK-1、TNS1蛋白表達(dá)對(duì)胃癌病情及預(yù)后評(píng)估具有重要指導(dǎo)意義。