血清TK1、VEGF和AFP檢測對原發性肝癌診斷及預后評估的價值

胡燕紅 顧艷紅 王新梅

原發性肝癌（Primary hepatocellular carcinoma，PHC）是臨床上一種常見的惡性腫瘤，其發病率位居全身惡性腫瘤第5位，死亡率居第三位［1］。PHC惡性程度高，病情進展快，極易侵犯門靜脈，造成門靜脈癌栓。PHC起病隱匿，多數患者早期無任何臨床癥狀，確診時病情已發展至中晚期，失去外科手術機會［2］。如何及早確診和提高診斷率是PHC治療的關鍵。胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）是細胞DNA增殖過程中的關鍵酶，可作為評估細胞增殖狀況的重要參考指標［3］。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種重要的血管內皮細胞增殖因子，能夠促進血管內皮生長，增加血管通透性，參與多種腫瘤疾病的發展過程［4］。甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein，AFP）是臨床診斷PHC的首選腫瘤標志物，但約30%PHC患者血清AFP呈低表達，而部分良性肝臟疾病患者血清AFP表達量升高，導致AFP檢測在PHC診斷方面的價值有限［5］。本研究通過分析血清TK1、VEGF及AFP水平與PHC的發生及預后的關系，為PHC的早期診斷和預后評估提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2016年6月本院收治的73例PHC患者為PHC組，其中男40例，女33例；年齡40～71歲，平均（56.35±9.68）歲。選取同期95例良性肝病患者為良性組，其中男56例，女39例；年齡44～71歲，平均（54.69±9.26）歲；乙肝肝硬化37例，、肝血管瘤42例，肝腺瘤16例。選取健康體檢志愿者50例為健康組，其中男25例，女25例；年齡40～73歲，平均（55.13±10.13）歲。3組基礎資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）具可比性。

納入標準：①符合中國抗癌協會擬定的PHC診斷及分級標準［6］，經病理活檢確診；②Child-pugh分級為A-B級，無肝外轉移；③初診治患者，尚未接受相關治療；④患者自愿參加研究，簽署知情同意書；⑤研究資料經醫學委員會審核批準。排除標準：①心肺腎功能嚴重障礙者；②凝血功能和免疫系統疾病患者；③Child-pugh分級C級、嚴重肝功能損傷者；④門脈浸潤、胃食管靜脈曲張或出血風險、膽管癌栓塞者；⑤其他腫瘤、肝外轉移或巨塊型者；⑥TACE禁忌癥或對研究藥物過敏者。

1.2 治療方法

TACE聯合索拉非尼治療：采用改良Seldinger技術經右股動脈穿刺，插入5.0 F RH導管至腫瘤部位進行動脈造影，觀察腫瘤血供情況及門靜脈通暢狀況等。明確腫瘤供血動脈后選擇靶血管緩慢注入抗腫瘤藥物，5-氟尿嘧啶（旭東海普制藥，H31020593）0.25g、奧沙利鉑（齊魯制藥，H20093167）50～100 mg，表柔比星（輝瑞制藥，H20000496）10 mg；隨后注入100～300μm微球栓塞腫瘤血管，待完全阻斷腫瘤組織血管后停止注入，完成手術。同時口服索拉非尼（Bayer Pharma AG，H20130137），400 mg/次，2次/d，服用8周以上。

1.3 研究方法

①統計患者年齡、性別等基礎資料，采用影像學及穿刺活檢確診疾病類型及病情；②術后跟蹤隨訪，記錄患者術后3年內生存情況；③采集受試者空腹外周血4 mL，室溫靜置30 min，1 000 g低溫離心15 min，收集血清待檢；采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清TK1、VEGF水平，采用化學發光法檢測AFP水平，檢測相關試劑購自武漢默沙克公司，全自動酶標儀（伯樂800型）購于BIORAD公司，全自動生化分析儀（C16000型）購自美國雅培公司。

1.4 統計學方法

采用SPSS19.0軟件分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗或方差分析；計數資料以n（%）表示，用χ2檢驗；受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）分析TK1、VEGF及AFP檢測對PHC的診斷價值，Kaplan-Meier法分析TK1、VEGF及AFP表達情況與PHC患者3年生存狀況的關系；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組血清TK1、VEGF及AFP水平比較

PHC組患者血清TK1、VEGF及AFP水平比較：PHC組＞良性組＞健康組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組血清TK1、VEGF及AFP水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum TK1，VEGFand AFPlevels in 3 groups（±s）

表1 3組血清TK1、VEGF及AFP水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum TK1，VEGFand AFPlevels in 3 groups（±s）

組別PHC組良性組健康組F值P值n 73 95 50 TK1（pmol/L）3.66±1.27 1.22±0.64 0.67±0.20 236.911 0.000 VEGF（ng/L）221.07±63.26 95.25±36.18 41.69±13.24 282.910 0.000 AFP（μg/L）45.44±23.25 19.73±11.92 5.03±1.98 107.315 0.000

2.2 Logistic回歸分析

Logistic回歸分析顯示，血清TK1、VEGF及AFP水平升高是導致PHC發生的重要危險因素（P＜0.05）。見表2。

表2 Logistic回歸分析Table 2 Logistic regression analysis

2.3 血清TK1、VEGF及AFP檢測對原發性肝癌的診斷價值

以PHC組為觀察組，以良性組和健康組為對照組，血清TK1、VEGF及AFP檢測對PHC診斷的ROC曲線下面積比較，TK1＞VEGF＞AFP，聯合檢測受試者血清TK1、VEGF及AFP水平，取其中任一項陽性作為PHC的診斷標準，聯合檢測的靈敏度顯著高于各指標單獨檢測差異有統計學意義（P＜0.05），而聯合檢測特異度與單獨檢測差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 血清TK1、VEGF及AFP檢測對PHC的診斷價值Table 3 Diagnostic value of serum TK1，VEGF and AFPin PHC

2.4 血清TK1、VEGF及AFP表達情況與患者生存狀況的關系

TK1、VEGF及AFP高表達組3年生存率顯著小于低表達組，且高表達組平均生存時間也小于低表達組（P＜0.05）。見表4。

表4 不同血清TK1、VEGF及AFP表達情況與患者3年生存率比較［n（%）］Table 4 Comparison of 3 years survival rate of patients with different TK1，VEGFand AFPexpressions［n（%）］

3 討論

腫瘤標志物是腫瘤組織細胞內異常表達的細胞因子，參與腫瘤的發生、生長過程，常用于腫瘤疾病的早期診斷、病情評估以及預后監測中［7］。TK1是一種評價細胞增殖活性的標志物，參與細胞DNA增殖過程［8］。正常成年細胞中TK1水平極低，惡性腫瘤細胞具有無限增殖特點，細胞內DNA合成旺盛，在細胞分裂G1至S期交界時，TK1水平開始逐漸升高，為腫瘤DNA合成提供條件，故TK1也可作為惡性腫瘤篩查的可靠生物指標［9-10］。VEGF是促進血管內皮增殖的重要因子，能加速新血管生成，刺激血管內皮增長和遷移，為腫瘤生長提供基礎；另外，VEGF能增加血管壁通透性，促進腫瘤細胞的遷移和擴散［11］。AFP是臨床上PHC診斷的首選血清學指標，但部分PHC患者血清AFP水平保存在正常范圍，一些妊娠期女性、肝硬化及慢性肝炎患者血清AFP水平又有不同程度升高，導致其應用存在一定局限性［12-13］。本研究中Logistic回歸分析表明，血清TK1、VEGF及AFP水平升高是導致PHC發生的重要危險因素，TK1水平升高說明體內存在增殖活性腫瘤細胞，TK1催化DNA大量合成，促進腫瘤細胞的增殖；VEGF促進腫瘤組織新血管生成，為腫瘤細胞擴增提供必需的營養和氧氣，促進腫瘤的生長；AFP能促進肝癌細胞增殖和增加癌細胞耐藥性，這可能與AFP協助癌細胞免疫逃避有關。

經ROC曲線提示聯合檢測血清TK1、VEGF及AFP水平有助于PHC的臨床診斷。PHC的病理機制復雜，其發病受多種因素影響，僅依據單項指標檢測結果判斷患者是否發生PHC存在一定局限性；聯合檢測血清TK1、VEGF及AFP水平，通過分析體內細胞增殖活性、血管新生等多方面狀況，有助于提高PHC早期診斷價值，降低漏診率。

TACE是失去外科手術機會PHC患者的首選治療方法，通過阻斷腫瘤組織內新血管血流，導致PHC病灶缺血壞死，發揮抗癌作用［14］。TACE術無法根治病灶，遠期效果不佳，術后復發率較高；另外，TACE在阻斷腫瘤組織血供同時，還可能降低癌旁正常組織血運，造成周圍肝組織功能受損，影響患者預后情況［15］。本研究結果顯示，不同TK1、VEGF及AFP表達患者長期預后也存在較大差別，分析TK1高表達表示細胞增殖活性強，PHC惡性程度高，導致預后較差；VEGF可增加血管通透性，促進腫瘤細胞遷移，影響手術治療效果；AFP高表達癌細胞多為耐藥性細胞，且AFP還能促進癌細胞惡化，故而導致高AFP表達患者預后較差。

綜上所述，TK1、VEGF及AFP與PHC的發生和發展等生物學行為密切相關，檢測血清TK1、VEGF及AFP水平對PHC早期診斷和預后評估具有積極意義。