宮頸癌患者血清E-cad、IFN-γ、TGF-β表達(dá)意義及對(duì)預(yù)后的影響

李曉茵 吳雪薇 盧智健 曾帶娣 陳艷雅

宮頸癌發(fā)病率約占女性惡性腫瘤的13.0%，是導(dǎo)致女性死亡的第二大惡性腫瘤［1］，并隨人乳頭瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）感染上升呈明顯上升、年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者生命安全。資料顯示，宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸是一個(gè)極其復(fù)雜的多階段、多基因調(diào)控異常的過程，其中細(xì)胞侵襲、遷移能力的增強(qiáng)是導(dǎo)致其預(yù)后不良的主要原因［2］。同時(shí)，學(xué)者［3］指出，細(xì)胞黏附能力降低或喪失可能是宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。上皮型鈣粘蛋白（E-cadherin，E-cad）在細(xì)胞分裂、黏附、腫瘤浸潤(rùn)、遷移過程中起著重要作用［4］。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（Transforming growth factor-β，TGF-β）為免疫逃逸發(fā)生機(jī)制的重要因子，參與機(jī)體免疫逃逸，可誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，加快腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移［5］。干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）能誘導(dǎo)宮頸腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)特異細(xì)胞毒性T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別與裂解。鑒于此，本研究以血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平為觀察指標(biāo)，觀察其在宮頸癌患者的表達(dá)及對(duì)預(yù)后判斷的影響。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2015年4月至2016年4月宮頸癌患者60例（宮頸癌組），平均（50.19±3.58）歲、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）患者35例（CIN組）,平均（49.86±3.42）歲、宮頸炎患者42例（宮頸炎組），平均（49.97±3.60）歲。3組基本資料（年齡）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為宮頸病變；均為首次發(fā)病；臨床資料完整；患者及家屬知情并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；凝血機(jī)制紊亂或活動(dòng)性出血者；繼發(fā)性盆腔炎者；自身免疫系統(tǒng)疾病或全身感染性疾病者；⑤失語(yǔ)癥或精神行為異常者。

1.2 方法

空腹取3 mL靜脈血，離心12 min，3 000 r/min，離心半徑15 cm，分離取血清，置于-20℃低溫保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平，試劑盒購(gòu)自上海康朗生物科技有限公司，按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比3組血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平。采用受試者工作特征曲線（Receiver operating characteristic，ROC）分析血清E-cad、IFN-γ、TGF-β對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值。分析血清E-cad、IFN-γ、TGF-β與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系。隨訪3年，采用卡普蘭-邁耶曲線（Kaplan-Meier，KM）分析生存狀況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（）表示，兩組間比較采用t進(jìn)行檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用ROC曲線分析診斷價(jià)值，以KM進(jìn)行生存曲線分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平

宮頸癌組血清E-cad、TGF-β高于CIN組、宮頸炎組，IFN-γ低于CIN組、宮頸炎組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum E-cad，IFN-γ，TGF-β levels in 3 groups（±s）

表1 3組血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum E-cad，IFN-γ，TGF-β levels in 3 groups（±s）

組別宮頸癌組CIN組宮頸炎組F值P值n 60 35 42 E-cad（ng/mL）40.28±13.41 27.43±9.12 21.39±7.10 40.993＜0.001 IFN-γ（pg/mL）21.46±7.11 33.57±11.16 40.74±13.58 43.691＜0.001 TGF-β（pg/mL）50.73±16.90 38.20±12.52 28.76±9.50 31.690＜0.001

2.2 血清E-cad、IFN-γ、TGF-β對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值

ROC曲線分析顯示，血清E-cad、IFN-γ、TGF-β聯(lián)合診斷CIN與宮頸癌AUC＞單一診斷，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、表2。

2.3 血清E-cad、IFN-γ、TGF-β與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系

血清E-cad、TGF-β與臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)；IFN-γ與臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與分化程度呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

圖1 ROC曲線圖Figure 1 ROC curve

表2 血清E-cad、IFN-γ、TGF-β對(duì)CIN、宮頸炎與宮頸癌的診斷價(jià)值Table 2 Diagnostic value of serum E-cad，IFN-γ，TGF-βin CIN and cervical cancer

表3 血清E-cad、IFN-γ、TGF-β與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between serum E-cad，IFN-γ，TGF-βand pathological characteristics（±s）

表3 血清E-cad、IFN-γ、TGF-β與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between serum E-cad，IFN-γ，TGF-βand pathological characteristics（±s）

臨床病理特征年齡（歲）臨床分期腫瘤直徑（cm）分化程度淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移＞50≤50Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ＞4≤4低分化中分化高分化有無(wú)n 35 25 27 33 24 36 15 22 23 37 23 E-cad（ng/mL）40.81±10.24 39.54±9.06 35.29±8.31 44.36±10.05 45.10±8.69 37.07±7.14 45.03±9.13 41.37±5.20 36.14±4.17 46.22±12.27 30.72±8.65 t/F值0.497 3.754 3.911 10.213 5.289 P值0.621＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 IFN-γ（pg/mL）21.24±6.90 21.77±7.22 18.00±6.01 25.69±7.35 18.02±5.64 23.75±7.13 17.06±5.11 21.28±6.24 24.50±6.83 17.15±6.49 28.39±8.14 t/F值0.288 4.369 3.305 6.497 5.912 P值0.775＜0.001 0.002 0.003＜0.001 TGF-β（pg/mL）50.08±12.79 51.64±13.05 44.12±10.36 56.14±12.44 56.17±10.07 47.10±8.53 58.01±8.43 50.46±6.95 46.24±5.06 57.24±12.79 40.26±10.08 t/F值1.019 4.009 3.753 13.962 5.403 P值0.313＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.4 生存分析

隨訪3年，脫落3例。以ROC曲線最佳截?cái)嘀捣譃榈臀＝M、高危組，KM曲線分析顯示E-cad、TGF-β、IFN-γ高危組、低危組生存曲線對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，抑癌基因功能喪失及癌基因過表達(dá)可導(dǎo)致宮頸組織發(fā)生一系列病理改變，最終誘導(dǎo)組織癌變、局部浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［6］。另外上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵啟動(dòng)步驟，在多種腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程發(fā)揮重要作用［7］。

E-cad能促進(jìn)上皮分化、保持上皮細(xì)胞完整性，其表達(dá)異常是發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要標(biāo)志性變化［8］。張鴻艷［9］研究發(fā)現(xiàn)，血清E-cad水平在宮頸癌患者中呈異常高表達(dá)，支持本研究觀點(diǎn)，血清E-cad水平上調(diào)可調(diào)節(jié)癌細(xì)胞與正常組織間黏附功能，不斷增強(qiáng)癌生長(zhǎng)因子受體作用，誘發(fā)絲裂原激活蛋白激酶調(diào)節(jié)路徑持續(xù)表達(dá)，刺激細(xì)胞產(chǎn)生增殖與分裂，從而激活細(xì)胞侵襲形成。最后，分析血清E-cad與宮頸癌病理特征、預(yù)后關(guān)系可知，血清E-cad與臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系，與分化程度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，且其表達(dá)水平上調(diào)是宮頸癌患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因素。

圖2 生存曲線圖Figure 2 survival curve

TGF-β具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、血管形成、細(xì)胞凋亡等多種功能，同時(shí)還參與細(xì)胞外基質(zhì)重建、間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生及機(jī)體抗腫瘤免疫［10］。本研究經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)表明，宮頸癌患者血清TGF-β水平明顯高于CIN患者、宮頸炎患者，并與臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度存在一定關(guān)聯(lián)性，與于丹軍等［11］研究一致，說(shuō)明TGF-β可能參與了從宮頸不典型增生逐漸發(fā)展至原位癌、浸潤(rùn)癌的過程，即TGF-β與宮頸癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TGF-β表達(dá)上調(diào)一定程度會(huì)減弱SiHa細(xì)胞與基質(zhì)黏附能力，加快細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤血管生成，同時(shí)其還能促使上皮細(xì)胞向具有運(yùn)動(dòng)侵襲能力的間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移［12］。另外，TGF-β診斷CIN與宮頸癌的ROC曲線證實(shí)了TGF-β有望成為診斷宮頸癌的潛在特異性指標(biāo)。經(jīng)KM曲線作進(jìn)一步分析得出，TGF-β水平異常高表達(dá)會(huì)增加宮頸癌預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)，可作為宮頸癌患者預(yù)后的有效預(yù)測(cè)因子。

IFN-γ是Th1型細(xì)胞因子，具有抗病毒、抗腫瘤免疫作用，可活化巨噬細(xì)胞，強(qiáng)化抗原提呈作用，刺激固有免疫系統(tǒng)，促進(jìn)內(nèi)皮淋巴細(xì)胞相互作用，調(diào)控細(xì)胞凋亡［13］。本研究對(duì)比3組血清IFN-γ水平可知，隨宮頸病變加重，血清IFN-γ水平顯著下調(diào)，與付艷麗等［14］等研究相似，說(shuō)明在抗HPV持續(xù)感染免疫應(yīng)答中，Th1向Th2偏移，可加重宮頸病變，且宮頸病變程度不斷加重，可逐漸削弱細(xì)胞免疫功能，導(dǎo)致IFN-γ水平持續(xù)降低或缺失，從而抑制腫瘤壞死因子α受體在單核-巨噬細(xì)胞表面受體的表達(dá)，促使腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白質(zhì)合成，逐漸降低機(jī)體抗腫瘤能力［15］。IFN-γ在鑒別區(qū)分宮頸病變類型方面具有一定診斷價(jià)值可見通過檢測(cè)血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平，可為臨床早期診斷宮頸癌提供技術(shù)支持。

綜上可知，血清E-cad、IFN-γ、TGF-β水平在宮頸癌患者中呈異常表達(dá)，并與宮頸癌患者病理特征存在一定相關(guān)性，可作為診斷宮頸病變類型、評(píng)估宮頸癌患者預(yù)后的潛在有效因子。