子宮頸癌血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平表達與病理特征及預后的相關性分析

肖虹 潘曉蕾 趙麗穎 謝苗

流行病學調查顯示，子宮頸癌患病人數居女性惡性腫瘤的第2位，我國每年新發病例約13萬，占全球發病總人數的28.0%，近年來其發病率呈明顯增長、年輕化趨勢［1-2］。子宮頸癌發病機制較為復雜，目前研究已證實，≥90.0%的子宮頸癌是由高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持續感染所致［3］，而高危型HPV持續感染會誘導HPV-E7蛋白表達上調，激活致癌過程［4］。同時，相關研究顯示，新生血管是實體腫瘤生長、浸潤、轉移的重要基礎，可為腫瘤生長提供營養物質，促進腫瘤細胞擴散［5］，而CDl05作為實體惡性腫瘤新生血管標志物，與腫瘤組織增殖、浸潤、轉移具有一定關聯性［6］。人軟骨糖蛋白39（human cartilage glycoprotein 39，YKL-40）也已被證實在成膠質細胞瘤、卵巢癌等多種惡性腫瘤細胞中呈異常高表達［7］。然而關于血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平對子宮頸癌患者預后的預測價值仍需相關循證支持。為此，本研究嘗試分析血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平在子宮頸癌患者中的表達及與病理特征、預后的相關性。詳情如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2013年4月至2018年4月本院120例子宮頸癌患者作為觀察組，另選取同期健康體檢者52例作為對照組。其中觀察組年齡45～68歲，平均50.91±2.59歲；體質量45～61 kg，平均53.93±2.42 kg；腫瘤直徑2.5～4.9 cm，平均3.72±0.35 cm；病理類型：104例鱗癌，16例非鱗癌；組織分化程度：38例高分化，82例中低分化；TNM分期：76例Ⅰ～Ⅱ期；44例Ⅲ～Ⅳ期；淋巴結轉移38例；脈管浸潤50例；對照組：年齡43～65歲，平均51.33±2.70歲；體質量44～60 kg，平均54.15±2.39 kg。兩組基本資料（年齡、體質量）均衡可比（P＞0.05）。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

納入標準：①觀察組均經陰道鏡檢查或宮頸活組織檢查病理切片證實為子宮頸癌；②對照組未出現陰道流血、陰道排液等子宮頸癌相關臨床表現；③兩組臨床資料完整，患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準：①處于急性炎癥期或淋巴系統疾病者；②近1周有止血、抗纖溶或抗凝藥物使用史者；③合并肝腎等重要臟器器質性病變者；④重度失語癥或精神行為異常者。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法

取3 mL空腹靜脈血，離心12 min，3 000 r/min，分離血清，采用酶標儀以酶聯免疫吸附法檢測血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平，儀器購自北京亞歐德鵬科技有限公司（型號：DP-6100），試劑盒購自北京榮志海達生物科技有限公司，批號：國械注進20153403567，嚴格按照儀器、試劑盒說明書操作。

1.2.2 治療方法

觀察組均根據臨床分期、淋巴結轉移、浸潤深度等病理特征選擇合理、針對性治療方案。

1.3 觀察指標

①比較兩組血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平。②分析血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平與子宮頸癌病理特征（年齡、浸潤深度、病理類型、分化程度、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、脈管浸潤）相關性。③隨訪1年，失訪5例，生存者70例，死亡者45例，比較不同預后患者血清HPVE7、CD105、YKL-40水平表達。④根據隨訪1年后血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平平均值分為高表達者與低表達者。分析HPV-E7、CD105、YKL-40高低表達的生存價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件分析處理數據，計量資料采用（）表示，t檢驗，計數資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，采用卡普蘭-邁耶曲線（Kaplan-Meier，KM）分析生存價值，以Log-rank檢測，采用斯皮爾曼進行相關性分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平比較

觀察組血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1、圖1。

2.2 年齡和子宮頸癌病理特征與血清HPV-E7、CD105、YKL-40的相關性

血清HPV-E7水平與子宮頸癌患者TNM分期、淋巴結轉移、脈管浸潤顯著相關（P＜0.05）；血清CD105水平與子宮頸癌患者腫瘤直徑、淋巴結轉移、脈管浸潤顯著相關（P＜0.05）；血清YKL-40水平與子宮頸癌患者TNM分期顯著相關（P＜0.05），見表2。

表1 兩組血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum HPV-E7，CD105 and YKL-40 levels between the 2 groups（±s）

表1 兩組血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum HPV-E7，CD105 and YKL-40 levels between the 2 groups（±s）

組別觀察組對照組t值P值n 120 52 HPV-E7（U/L）43.74±7.28 24.92±2.84 18.032＜0.001 CD105（pg/mL）78.32±9.14 25.33±3.62 40.402＜0.001 YKL-40（ng/mL）194.38±52.69 74.51±25.37 15.620＜0.001

圖1 宮頸鱗鱗狀細胞癌及宮頸腺癌病理圖（HE）Figure 1 Pathological picture of cervical squamous cell carcinoma and cervical adenocarcinoma（HE）

表2 年齡和子宮頸癌病理特征與血清HPV-E7、CD105、YKL-40的相關性分析Table 2 Correlation analysis of age and cervical cancer pathological characteristics with serum HPV-E7，CD105，YKL-40

2.3 不同預后患者血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平表達

隨訪1年，失訪5例。根據預后情況分為生存者、死亡者。死亡者HPV-E7、CD105、YKL-40水平高于生存者差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

2.4 生存分析

KM曲線分析，隨訪1年，HPV-E7、CD105、YKL-40高表達者1年生存率低于低表達者（χ21=12.952，P1=0.000，χ22=4.971，P2=0.026，χ23=11.999，P3=0.001），見圖2。

表3 不同預后患者血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平表達（±s）Table 3 Expression of serum HPV-E7，CD105 and YKL-40 in patients with different prognosis（±s）

表3 不同預后患者血清HPV-E7、CD105、YKL-40水平表達（±s）Table 3 Expression of serum HPV-E7，CD105 and YKL-40 in patients with different prognosis（±s）

組別生存者死亡者t值P值n 70 45 HPV-E7（U/L）28.41±7.26 70.41±20.14 15.942＜0.001 CD105（pg/mL）45.62±8.69 152.47±15.84 48.632＜0.001 YKL-40（ng/mL）175.69±47.25 221.42±50.16 4.495＜0.001

圖2 生存曲線Figure 2 Survival curve

3 討論

研究認為，子宮頸癌是一個多因素、多基因、多環節參與的漸進過程［8-9］。癌抗原125、癌抗原19-9、鱗狀上皮細胞癌抗原等是既往臨床針對子宮頸癌患者常用血清標志物［10］，但其靈敏度及特異度較差，難以提供有效指導。因此尋找新的血清指標，有助于為子宮頸癌治療及防治提供新方向。

HPV-E7水平上調一定程度會反饋刺激細胞增殖相關基因的表達，引發上皮細胞的細胞周期失衡，異常增殖癌細胞［11-13］。通過Spearman相關性分析，HPV-E7可逐漸上調Notch受體表達，導致子宮頸癌細胞系增殖，同時通過依賴SIRT1的VEGF-Notch-Hes信號，對血管生成發揮直接或間接調控作用，介導新生血管形成，參與子宮頸癌微環境形成，從而促進腫瘤生長，調控子宮頸癌TNM分期、淋巴結轉移、脈管浸潤，加速子宮頸癌惡化。進一步經Log-rank檢驗表明，HPV-E7水平上調會明顯提高病死率，證實了血清HPV-E7水平可作為預測子宮頸癌患者生存狀況的潛在有效指標。

CD105是表達在血管內皮細胞表面上轉化生長因子β家族受體蛋白，在腫瘤新生血管內皮細胞中過度表達［15］。CD105通過結合Ⅲ型轉化生長因子β受體，抑制轉化生長因子β1在內皮細胞中的信號傳導，增強內皮型一氧化氮合酶活性，迅速升高一氧化氮濃度，進而促進腫瘤細胞增殖相關基因表達，同時CD105高表達會阻斷TGF-β/ALK5信號通絡信號轉導，異常增殖血管內皮細胞，加快新生血管生成，促使腫瘤組織血液供應轉變為灌注供應，進而增加子宮頸癌患者腫瘤直徑，促進淋巴結轉移，加重脈管浸潤，從而為腫瘤細胞侵襲、轉移提供新途徑。可見檢測CD105表達可從某種角度判斷腫瘤侵襲性，為子宮頸癌淋巴結轉移、脈管浸潤風險預測提供科學指導。進一步對比可知，CD105高表達率對子宮頸癌預后評估具有一定參考價值。

YKL-40參與細胞增殖、分化、凋亡及血管內皮細胞重塑與遷移過程，有助于促進新生小血管生成［16］。對比研究發現，血清YKL-40水平在腫瘤壞死因子-α、核轉錄因子、白細胞介素6等調控下，通過細胞內外信號傳導，可激活磷酸肌醇3激酶與有絲分裂蛋白激酶信號傳導系統，抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞有絲分裂、增殖、分化，提示YKL-40具有成為子宮頸癌新的腫瘤標志物的潛力，可為子宮頸癌臨床分期提供循證支持。最后，通過K-M曲線進一步證實，血清YKL-40水平升高會增加子宮頸癌死亡風險，有力佐證了血清YKL-40可能作為子宮頸癌預后的有效獨立預測因子，為臨床對癥治療提供新靶點。

綜上可知，血清HPV-E7、CD105、YKL-40表達水平在子宮頸癌患者中增高，且其表達水平與宮頸癌病理特征和預后存在一定相關性。