氟尿嘧啶原料藥的質量控制及穩定性研究

嚴 賓，張偉男

（精華制藥集團南通有限公司，江蘇南通226407）

氟尿嘧啶原料藥的質量控制及穩定性研究

嚴 賓，張偉男

（精華制藥集團南通有限公司，江蘇南通226407）

目的建立抗腫瘤藥氟尿嘧啶原料藥的質量控制方法，并考察其穩定性。方法采用高效液相色譜法測定氟尿嘧啶原料藥含量和有關物質，并對其進行穩定性考察。結果建立了氟尿嘧啶原料藥的質量控制方法，包括性狀、鑒別、干燥失重（≤0.3%）、熾灼殘渣（≤0.1%）、重金屬（≤0.002%）、有關物質（≤0.5%）和含量測定（98.0%～102.0%），樣品檢測結果在規定的限度內，對氟尿嘧啶樣品進行了影響因素試驗考察，在高溫、高濕條件下無明顯降解，在光照5、10 d條件下含量均無明顯變化，并分別在加速試驗[（40±2）℃，相對濕度75%±5%]條件下進行了6個月和長期試驗[（30± 2）℃，相對濕度60%±5%]條件下進行了9個月的穩定性試驗，穩定性考察期內各項指標未見明顯變化。結論所建立的氟尿嘧啶原料藥質量控制方法重復性好、專屬性強，結果準確、可靠，耐用性檢測結果在規定的限度內，氟尿嘧啶原料藥穩定性良好。

抗腫瘤藥； 氟尿嘧啶； 質量控制； 參考標準； 色譜法，高效液相； 藥物穩定性

5-氟尿嘧啶（5-Fu）是第1個根據一定設想而合成的抗代謝藥物，是目前臨床上應用最廣泛的氟代嘧啶類抗腫瘤藥物。其抗瘤譜較廣，主要用于胃癌、結腸癌、直腸癌、乳腺癌、頭頸部癌及絨毛膜上皮癌、惡性葡萄胎等，在腫瘤內科治療中占有極其重要的地位[1-5]。5-Fu本身并無生物學活性，在體內先轉變為一磷酸脫氧核糖氟尿嘧啶核苷及三磷酸氟尿嘧啶核苷后才能發揮作用，能在分子水平上代替正常代謝物，摻入生物大分子，干擾DNA的合成，發揮細胞毒素作用從而殺滅腫瘤細胞[6-9]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 產品信息 產品名稱：氟尿嘧啶；分子式：C4H3FN2O2；相對分子質量：130.08；化學結構式見圖1。

圖1 氟尿嘧啶化學結構式

1.1.2 儀器與試劑 NICOLET 380FT-IR紅外分析儀、島津LC-20AT液相色譜儀、DZF-6020真空干燥箱、氟尿嘧啶標準品（IOG371，含量：99.62%）、氟尿嘧啶原料藥（自制）等。乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

1.1.3 質量標準 （1）性狀：本品為白色至類白色無味結晶性粉末。（2）鑒別：本品的紅外光譜圖與對照品的紅外光譜圖一致。（3）干燥失重：取本品適量，按《中國藥典》2010年版（二部）相關內容依法測定[10]，干燥失重小于或等于0.5%（真空）。（4）熾灼殘渣：取本品適量，置已恒重的鉑坩堝中，按《中國藥典》2010年版（二部）相關內容依法測定，熾灼殘渣小于或等于0.1%。（5）重金屬：取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，按《中國藥典》2010年版（二部）相關內容依法測定，含重金屬小于或等于0.002%。（6）含量：按無水物計算，含氟尿嘧啶應為98.0%～102.0%。（7）有關物質：按“1.2.1”項的方法，精密量取標準溶液10 μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%～25%[11]。再精密量取標準溶液和供試品溶液各10 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜至主峰保留時間的2倍，供試品溶液如顯雜質峰，各雜質峰面積之和不得大于標準溶液主峰的峰面積（0.5%）。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備

1.2.1.1 標準溶液 精密稱取氟尿嘧啶標準品10 mg，加超純水溶解并稀釋至100 mL，取此溶液1 mL至10 mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度。

1.2.1.2 樣品溶液 精密稱取氟尿嘧啶樣品20 mg，加超純水溶解并稀釋至200 mL，取此溶液1 mL至10mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度。

1.2.1.3 含量測試方法 色譜柱為SymmetryRC18（5 μm，4.6 mm×250.0 mm），緩沖液為6.8 g/L的磷酸二氫鉀水溶液，用5 mol/L的氫氧化鉀調節pH值為5.7±0.1，流動相為乙腈∶緩沖液（5∶95），流速為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm；柱溫為室溫25℃；進樣量為20 μL。進樣順序：第1針進空白，然后進5針標準溶液，接著進樣品溶液，最后再進1針標準液，連續進樣品的針數不得超過10針，多于10針則每10針之間交叉進1針標準液[相對標準偏差（RSD）≤0.73%]。系統適應性：標準溶液重復性RSD≤0.73%，拖尾因子范圍0.95～1.05。按照外標法以峰面積進行計算，即得含量。

1.2.2 標準曲線測定方法 標準儲備溶液：精密稱取標準品10 mg，加入超純水溶解并稀釋至100 mL。分別精密吸取標準儲備溶液 0.75、1.50、3.00、4.50、6.00 mL置容量瓶中，用超純水稀釋至50 mL，配制成質量濃度為1.51、3.02、6.04、9.06、12.08 μg/mL，進樣量為20 μL，每個質量濃度連續進樣3次。得平均峰面積。以平均峰面積值（A）對質量濃度（C）進行線性回歸。

1.2.3 精密度測試方法 按1.2.1項的樣品溶液配制方法配制6份相同質量濃度的標準樣連續進樣，計算其RSD；然后將此6份標準溶液放置2 d后由另一名化驗員連續進樣，計算其RSD，再將2名化驗員的測試結果共12針，計算其RSD。

1.2.4 準確度測試方法 在不含氟尿嘧啶的空白溶劑（超純水）中，加入氟尿嘧啶標準品，配置成3種氟尿嘧啶的質量濃度為7.05、10.07、13.10 μg/mL的溶液，放置至容量瓶中，進樣量為20 μL。準確度測定：加入濃度為樣品配置濃度，檢出濃度為樣品通過液相色譜檢測出峰面積然后換算成濃度，回收率=檢出濃度/加樣濃度×100%。

1.2.5 耐用性測試方法 分別設定流動相流速為0.9﹑1.0、1.1 mL/min，計算氟尿嘧啶主峰保留時間、峰面積及拖尾因子。分別設定色譜柱溫度為23﹑25﹑27℃，計算氟尿嘧啶主峰保留時間、峰面積及拖尾因子。分別采用同一生產商2個不同批號的色譜柱，計算氟尿嘧啶主峰保留時間、峰面積及拖尾因子。

1.2.6 樣品測試方法 對 3批樣品（批號分別為FLU1407601、FLU1407602、FLU1407603）質量控制項目（性狀、鑒別、干燥失重、重金屬、含量、有關物質、熾灼殘渣）進行檢測。

1.2.7 高溫、高濕試驗方法 對氟尿嘧啶樣品進行高溫、高濕測試，將氟尿嘧啶樣品置80℃、90%的溫、濕度條件下，放置3～12 d，定期于3、7、9、10、11、12 d時檢測其含量變化。

1.2.8 光照試驗方法 對氟尿嘧啶樣品進行光照測試，將氟尿嘧啶樣品開口放置于光照度為（4 500±500）Lx的光照裝置內5～10 d，定期于5、10 d時檢測其含量變化。

1.2.9 加速穩定性試驗方法 取3批樣品（批號分別為FLU1407601、FLU1407602、FLU1407603）置于加速穩定性試驗條件下[（40±2）℃、相對濕度75%±5%]，定期于0、1、2、3、4、6個月時分別取樣并檢測。

1.2.10 長期穩定性試驗方法 取3批樣品（批號分別為FLU1407601、FLU1407602、FLU1407603）置于長期穩定性試驗條件下[（25±2）℃、相對濕度60%±5%]，定期于0、3、6、9個月時分別取樣并檢測。

2 結 果

2.1 樣品含量結果 測試 3批樣品，批號分別為FLU1407601、FLU1407602、FLU1407603，含量分別為99.62%、99.60%、99.58%。

2.2 標準曲線測試結果 回歸方程A=38 187C+8 501.8，回歸系數R=0.999 6。結果表明1.51～12.08 μg/mL濃度范圍內，呈現良好的線性關系，見圖2。

圖2 峰面積-質量濃度的函數圖

2.3 精密度測試結果 按照1.2.3項的方法，3次RSD結果均小于0.73，表明含量測定的進樣精密度良好，滿足測試要求。

2.4 準確度測試結果 準確度測試要求回收率為98.0%～102.0%，含量測定準確度結果滿足測試要求，準確度良好。見表1。

表1 準確度測試結果

2.5 耐用性測試結果 根據測試，所得結果可知流速微小變化（0.9～1.1 mL/min）、柱溫微小變化（23～27℃）、同一生產商不同批號的色譜柱對含量的測定影響不大。見表2、3、4。

表2 流速對主峰含量影響結果

表3 色譜柱溫度對主峰含量影響結果

表4 色譜柱型號對主峰含量影響結果

2.6 樣品測試結果 3個批次FLU1407601、FLU1407602、FLU1407603樣品性狀、紅外光譜、干燥失重、熾灼殘渣、重金屬、含量、有關物質各項指標均符合質量標準。

2.7 高溫、高濕試驗結果 氟尿嘧啶樣品在高溫、高濕條件下3、7、9、10 d含量下降約1%；11、12 d含量下降約2%。表明樣品在高溫、高濕條件下沒有明顯的降解。

2.8 光照試驗結果 氟尿嘧啶樣品光照5、10 d含量均無明顯變化。

2.9 加速穩定性試驗結果 氟尿嘧啶樣品在加速試驗條件下1、2、3、4、6個月后質量標準中各項檢測指標與0個月數據比較均無明顯變化，表明本品在加速試驗條件下放置6個月時質量較為穩定。

2.10 長期穩定性試驗結果 氟尿嘧啶樣品在長期試驗條件下0、3、6、9個月后質量標準中各項檢測指標與0個月數據比較均無明顯變化，表明本品在長期試驗條件下放置9個月時質量較為穩定。

3 討 論

本研究根據《中國藥典》（二部）對原料藥的要求，探討了氟尿嘧啶原料藥的各項質量指標，建立了質量控制方法，包括性狀、鑒別、干燥失重、熾灼殘渣、重金屬、有關物質、含量的測定，可以很好地控制氟尿嘧啶原料藥產品質量，樣品檢測結果均在規定的限度內，表明氟尿嘧啶原料藥質量可控。

本研究同時對氟尿嘧啶原料藥的穩定性進行了考察，通過影響因素試驗、加速穩定性試驗和長期穩定性試驗檢測產品質量，結果提示，氟尿嘧啶樣品在高溫、高濕條件下沒有明顯的降解。在光照5、10 d條件下含量均無明顯變化。加速穩定試驗1、2、3、4、6個月后質量標準中各項檢測指標與0個月數據比較均無明顯變化，表明產品穩定性良好。長期穩定性試驗3、6、9個月后質量標準中各項檢測指標與0個月數據比較均無明顯變化，表明產品穩定性良好。

采用高效液相色譜法測定氟尿嘧啶含量，方法簡便、準確，可作為該原料藥的質量控制方法，并對線性試驗、精密度試驗、準確度試驗、耐用性試驗進行方法驗證，表明該控制方法重復性好，專屬性強，檢測結果準確、可靠，可以有效控制該產品的質量。

[1]Kugimiya N，Nishimoto A，Hosoyama T，et al.The c-MYC-ABCB5 axis plays a pivotal role in 5-fluorouracil resistance in human colon cancer cells[J].J Cell Mol Med，2015，19（7）：1569-1581.

[2]Shakeel F，Haq N，Al-Dhfyan A，et al.Chemoprevention of skin cancer using low HLB surfactant nanoemulsion of 5-fluorouracil：a preliminary study[J].Drug Deliv，2015，22（4）：573-580.

[3]Wu BB，Gong YP，Wu XH，et al.Fourier transform infrared spectroscopy for the distinction of MCF-7 cells treated with different concentrations of 5-fluorouracil[J].J Transl Med，2015，13：108.

[4]Matsusaka S，Lenz HJ.Pharmacogenomics of fluorouracil-based chemotherapy toxicity[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol，2015，11（5）：811-821.

[5]Kassab HJ，Khalil YI.5-Fluorouracil mucoadhesive liquid suppository formulation and evaluation[J].World J Pharm Res，2014，3（9）：119-135.

[6]van Kuilenburg AB.Dihydropyrimidine dehydrogenase and the efficacy and toxicity of 5-fluorouracil[J].Eur J Cancer，2004，40（7）：939-950.

[7]Ragnhammar P，Blomgren H.How to optimize the effect of 5-fluorouracil modulated therapy in advanced colorectal cancer[J].Med Oncol，1995，12（3）：187-201.

[8]Sloan KB，Wasdo S.Designing for topcial delivery：prodrugs can make the difference[J].Med Res Rev，2003，23（6）：763-793.

[9]Smith NF，Figg WD，Sparreboom A.Recent advances in pharmacogenetic approaches to anticancer drug development[J].Drug Development Res，2004，62：233-253.

[10]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版：二部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅥE、ⅧM、ⅧN、ⅧH。

[11]《化學藥物質量標準建立的規范化過程技術指導原則》課題研究組.化學藥物質量標準建立的規范化過程技術指導原則[EB/OL].[2005-6-30].http：//www.doc88.com/p-3347597235110.html.

Study on quality control and stability of fluorouracil bulk drug

Yan Bin，Zhang Weinan
（Nantong Co.，Ltd.，of Jinhua Pharmaceutical Group，Nantong，Jiangsu 226407，China）

ObjectiveTo establish the quality control method of antitumor drug fluorouracil bulk drug and to investigate its stability.MethodsThe content and related substances in fluorouracil bulk drug were determined by high performance liquid chromatography（HPLC）and its stability was investigated.ResultsThe quality control method of fuorouracil bulk drug was established，including character，identification，drying loss（≤0.3%），residue on ignition（≤0.1%），heavy metals（≤0.002%），related substances（≤0.5%）and content determination（98.0%-102.0%）.The sample test results were all within the limits specified.Meanwhile，the fuorouracil sample was performed the influencing factor test，the results showed that there was no obvious fluorouracil degradation under the condition of high temperature and high humidity，there were no obvious changes under the condition of 5，10 d illumination，the 6-month and 9-month stability tests were performed in the condition of the accelerated testing[（40±2）℃，relative humidity（RH）75%±5%]and the long-term testing[（30±2）℃，RH 60%±5%]respectively，the various indicators had no obvious changes during the stability investigation period.ConclusionThe established quality control method of fluorouracil bulk drug has good repeatability，strong specificity，and accurate and reliable results，the detection results of the durability test are within the limits specified，fluorouracilbulk drug has good stability.

Antineoplastic agents； Fluorouracil； Quality control； Reference standards； Chromatography，high pressure liquid； Drug stability

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.20.009

A

1009-5519（2015）20-3070-03

2015-07-22）

嚴賓（1980-），男，江蘇南通人，碩士研究生，工程師，主要從事醫藥化工研究工作；E-mail：yanbin19800918@163.com。