錦燈籠醇提取物對肝癌細胞SMMC-7721增殖的抑制作用研究

武蕾蕾　于浩臣　陳麗麗　孟令鍇　梁啟超　張波　展濤　許曉義

【摘 要】 目的：研究錦燈籠醇提取物對肝癌細胞SMMC-7721細胞增殖的抑制作用。方法：采用噻唑藍（MTT）法測定研究組、陰性對照組和陽性對照組的光密度值（OD值），同時利用倒置顯微鏡觀察三組癌細胞形態的改變。結果：肝癌SMMC-7721細胞經錦燈籠醇提取物誘導后發生邊緣不整、體積減小等形態學的改變，其折光度和貼壁細胞能力下降;錦燈籠醇提取物對肝癌SMMC-7721細胞的增殖抑制作用隨濃度的增加及時間的延長而逐漸增強，表現為藥物劑量依賴性和作用時間依賴性。結論：錦燈籠醇提取物對肝癌SMMC-7721細胞增殖有抑制作用，表明具有體外抗腫瘤的生物學活性。

【關鍵詞】 錦燈籠;醇提取物;MTT;抑制癌細胞增殖

錦燈籠（Calyx seu Fructus Physalis）又名紅姑娘、掛金燈，為茄科植物酸漿[Physalis alkekengi L.Var.franchetii （Mast.）Makino]的干燥宿萼或帶果實的宿萼，其味酸苦性寒，具有清熱解毒、利咽化痰、利尿的功效[1]，為《中華人民共和國藥典》收載的品種。近幾年許多國內外學者對錦燈籠的抗腫瘤活性成分（酸漿苦素類物質）進行了研究。王偉等發現PB可抑制非小細胞肺癌（NSCLC）A549細胞的增殖并誘導細胞凋亡[2]。曹聰等發現酸漿苦素B（pB）對人非小細胞肺癌A549細胞具有增殖抑制作用[3]。趙珍東等發現酸漿苦素B對人乳腺癌MDA-MB-231細胞具有增殖抑制及促凋亡的作用[4]。C.C.Hsu研究發現酸漿苦素B對人黑素瘤細胞（A375和A2058）具有抗增殖的作用[5]。錦燈籠作為一種藥食同源的天然植物，在抗腫瘤研究方面具有很高的開發前景，可避免化療藥物對機體正常細胞產生的毒性作用。本研究采用MTT法研究錦燈籠醇提取物對肝癌細胞SMMC-7721增殖的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 材料

研究對象：人肝癌SMMC-7721細胞，牡丹江醫學院抗腫瘤研究所提供并凍存細胞株。研究藥品：錦燈籠醇提物;噻唑藍（MTT，Amresco公司批號0973）

1.2 方法

MTT法檢測錦燈籠醇提取物對肝癌細胞SMMC-7721的體外增殖抑制試驗。具體操作步驟如下將人肝癌細胞SMMC-7721細胞株體外培養于RPMI-1640培養基（含10%熱滅活小牛血清）中，在37℃、5% CO2、完全飽和濕度條件下的培養箱中培養。取對數生長期的肝癌細胞SMMC-7721，經過胰蛋白酶消化后，再用含有10%小牛血清的培養基配成濃度為1×105個/mL的細胞懸液。用倒置顯微鏡觀察肝癌細胞SMMC-7721未經錦燈籠醇提取物作用時的細胞形態（臺盼藍染色），然后用倍比稀釋法調整細胞濃度為5×104/mL。將調整好濃度的細胞懸液接種在96孔培養板中，將接種細胞的96孔板放入37℃、5% CO2培養箱內培養24h。研究組每孔加入含不同濃度（12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL）的錦燈籠醇提取物;陰性對照組加入等體積RPMI-1640細胞培養液;陽性對照組加入5-FU（50μg/mL）。每組設5個平行孔。把加好樣的96孔板置于37℃、5% CO2培養箱中分別培養24h、48h、72h。棄去上清液，用培養液洗3次以去除藥液。然后每孔加入20μL 5mg/mL MTT溶液，在37℃培養4h后終止培養。小心棄去上清液，每孔加入200μL DMSO（二甲基亞砜），用振蕩器低速振蕩10min后，在酶標儀490nm處測定每孔的光密度值（OD值）。按下列公式計算錦燈籠醇提取物對腫瘤細胞的增殖抑制率。

腫瘤細胞增殖抑制率（IR）=（1-OD研究組/OD對照組）×100%

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0處理數據，計數資料（n，%）和計量資料（±s）分別行卡方和t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

在12.5～100μg/mL濃度，錦燈籠醇提取物對肝癌SMMC-7721細胞均表現出明顯的增殖抑制，且抑制作用隨劑量的增加和作用時間的延長而逐漸增強。結果見表1、表2和圖1。

3 討論

本研究采用MTT法研究錦燈籠醇提取物對肝癌SMMC-7721細胞增殖的抑制作用，結果表明錦燈籠醇提取物對肝癌細胞SMMC-7721細胞增殖的抑制作用隨濃度的提高及時間的延長而逐漸增強，表現為藥物劑量依賴性和作用時間依賴性。用倒置顯微鏡觀察到不同濃度的錦燈籠醇提取物對肝癌SMMC-7721細胞增殖有不同程度的抑制作用，癌細胞經誘導后發生邊緣不整、體積減小等形態學改變，其折光度和貼壁細胞能力下降。該研究說明錦燈籠醇提取物具有體外抗腫瘤的生物學活性。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015版一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：360-361.

[2] 王偉，劉擁征，李嶺.酸漿苦素B對人非小細胞肺癌細胞增殖、遷移及凋亡的影響[J].山東大學學報（醫學版），2019，57（03）：19-24.

[3] 曹聰.酸漿苦素B對人非小細胞肺癌A549細胞增殖與凋亡的影響及其機制探究[D].杭州：浙江大學，2017.

[4] 趙珍東，方春生，謝小霞，等.酸漿苦味素B對人乳腺癌MDA-MB-231細胞的抑制作用[J].中成藥，2017，39（07）：1502-1506.

[5] Hsu C C，Wu Y C，Farh L，et al.Physalin B from Physalis angμLata triggers the NOXA-related apoptosis pathway of human melanoma A375 cells[J].Food & Chemical Toxicology，2012，50（3-4）：619-624.