住院兒童常見呼吸道病毒抗原檢出情況分析

羅 麗，龍博文，陳小金，劉 洪

目前在全球范圍內，急性呼吸道感染(acute respiratory infections，ARI)因其高致病率和病死率仍然是公共衛生威脅，尤其是在發展中國家[1,2]。在兒童，ARI是5歲以下兒童最常見的死亡原因[3,4]。現已確定病毒是引起不同人群ARI的主要原因[5-7]。常見的引起ARI的病毒有：呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、 腺病毒(adenovirus，ADV)、甲型流感病毒(influenza virus A，IFVA)、乙型流感病毒(influenza virus B，IFVB)以及副流感病毒Ⅰ型(parainfluenza virus Ⅰ,PIVⅠ)、副流感病毒Ⅱ型(parainfluenza virus Ⅱ,PIVⅡ)、副流感病毒Ⅲ型(parainfluenza virus Ⅲ,PIVⅢ)等。本研究旨在了解ARI的流行病學特征，為防止濫用抗生素及防治ARI提供參考。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2018-07至2019-06在萍鄉市婦幼保健院住院年齡<15歲的急性呼吸道感染患兒，共7656例。其中，男4585例，女3071例，男女比例：1.49∶1。<1歲 2571例，1～<3歲2745例，3～<6歲 1743例，≥6歲597例。年齡最小1個月，最大14歲，平均年齡：2.08歲。ARI的診斷標準參照《諸福棠實用兒科學》第8版。納入標準： (1)病程<7 d；(2)符合急性呼吸道感染診斷；(3)年齡<15歲；(4)每個患兒不重復入組。排除標準：病例資料不全者。

1.2 方法 采用直接免疫熒光法檢測患兒鼻咽分泌物中7種常見呼吸道病毒的抗原。采集鼻咽拭子標本，專用植絨鼻咽拭子從患兒鼻腔插入至鼻咽部約5 cm后輕輕轉動拭子2～3圈取樣，抽出鼻咽拭子，放入含2 ml生理鹽水的塑料試管中(生理鹽水沒過拭子)，盡快送檢，樣本收集完成至檢驗≤24 h。呼吸道病毒抗原檢測試劑盒為美國 Diagnostic Hybrids公司產品，細胞涂片制備均嚴格按照呼吸道病毒抗原檢測試劑盒說明進行相關操作。200倍熒光顯微鏡(OLYMPUS CX22型顯微鏡購自日本 OLYMPUS公司)下每視野找到≥2個蘋果綠色熒光細胞即為陽性，否則為陰性。陰性細胞被伊文斯藍染成紅色。

1.3 統計學處理 采用 SPSS19.0軟件對數據進行統計分析,計數資料用百分率表示,組間計數資料率的比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 呼吸道7種病毒感染的總體檢出情況 本組7656例標本中，檢出至少一種病毒的1958例，總陽性檢出率為25.57%，其中，男1186例，女772例，男女比例：1.49∶1。檢出率排名前三的病毒為：RSV(13.39%),ADV(4.79%)，IFVA(3.24%)。其他病毒檢出情況：PIVⅢ(2.64%)，IFVB(0.99%)，PIVⅠ(0.50%)，PIVⅡ(0.05%)。

2.2 不同年齡組呼吸道病毒感染檢出情況 各年齡組患兒病毒檢出情況：<1歲組30.11 %(774/2571)，1～<3歲組25.90 %(711/2745)，3～<6歲 21.80%(380/1743)，≥6歲16.08 %(96/597)。各年齡組病毒陽性檢出率差異無統計學意義(表1)。

表1 不同年齡組患兒病毒檢出率比較 (n；%)

2.3 不同性別患兒7種病毒檢出情況 1958例陽性樣本中，男1186例，女772例，男性7種病毒陽性檢出率為25.87%,女性7種病毒陽性檢出率為25.20%，不同性別病毒陽性檢出率差異無統計學意義(表2)。

表2 不同性別患兒病毒檢出率 (n；%)

2.4 不同月份常見呼吸道病毒感染的檢出情況 7種病毒在全年不同月份中的檢測結果表明部分呼吸道病毒感染存在明顯季節流行特征(圖1)。RSV的感染主要集中在11月至第二年的2月，IFVA的感染集中在1-3月，ADV的感染集中在4-6月，IFVB感染高峰集中在5、6月，其他病毒沒有明顯的季節流行特點，呈全年散發。

圖1 患兒不同月份7種呼吸道病毒檢出情況

2.5 7種呼吸道病毒合并感染檢出情況 1958例陽性樣本中僅檢出12例2種病毒協同感染，檢出率為0.16%。RSV和ADV協同感染有7例，PIVⅢ和ADV協同感染2例，IFVA和RSV協同感染1例，PIVⅠ和RSV感染1例。無3種以上病毒協同感染病例。

3 討 論

本研究中7656例急性呼吸道感染住院患兒7種常見呼吸道病毒總體檢出率為25.57%，這與國內張莉、馬琳等[8]的報道(34.47%)及在匹茲堡[9](59.7%)和巴西東南部[10](54.3%)的研究中報告的發病率不一致，分析原因可能為：(1)研究采用的檢測方法為直接免疫熒光法，該方法應盡量使拭子毛刷獲取多一點上皮細胞，這樣能最大限度獲取感染病毒的組織樣本，而本研究所有患兒鼻咽拭子的采集非同一操作者，標本的取樣非同質化可能影響了病毒檢出率，今后可在標本采集上通過加強同質化培訓及雙人雙份標本采集來加強標本質量控制；(2)研究對象僅為住院患兒，未涵蓋門診呼吸道感染患兒，可能也是檢出率低于上述研究的原因；(3)檢測的病原種類有限，未覆蓋鼻病毒、副流感病毒Ⅳ、腸道病毒、冠狀病毒等常見引起呼吸道感染的病毒，在今后的研究中可考慮覆蓋病毒種類更廣一些。此外對于病毒檢測陰性的標本今后的研究中可進一步應用核酸檢測的方法進行再次檢測，以提高病毒檢出率。

在所有檢測的病毒中RSV檢出率最高，尤其在<1歲組(21.51%),這與國內外的報道一致[11,12]，說明目前住院患兒中RSV是ARI中最常見的病毒。2015年，Shi等[13]報告了全球每年估計的RSV負擔為3310萬(占所有急性下呼吸道感染(ALRI)費用發作生的22%)，導致320萬人次住院和5.96萬5歲以下兒童死亡。其次檢出率較高的病毒為腺病毒(4.79%)、甲型流感病毒(3.24%)和副流感病毒Ⅲ(2.64%)，與段亞麗等[14]的多中心研究結果一致, 說明腺病毒近年在我國發病率呈現上升趨勢，AdV是引起兒童ARI的重要病原之一。

通過全年不同月份病毒檢出情況分析，發現部分病毒感染存在明顯季節流行特征，呼吸道病毒檢出率前三位的病毒的流行特征是：RSV的感染主要集中在11月至次年的2月，ADV的感染集中在4-6月份，IFVA的感染集中在1-3月，IFVB感染高峰集中在5-6月。

本研究中2種病毒協同感染的檢出率不高(0.16%)，這與謝正德等[15](35.58%)及余春梅等[16](26.7%)報道的檢出率不一致，考慮可能與病例的選擇標準、地理、氣候以及檢測病原體種類、實驗室檢測方法有關。

病毒性呼吸道疾病的實驗室診斷方法中，抗原檢測直接免疫熒光法需時短，標本在送到實驗室2 h內就可得出結果，在普通實驗室就可開展，與其他方法相比，具有快速、簡便、特異性及敏感性高的特點[17]，適合基層醫療機構選用。

急性呼吸道感染具有高發病率及死亡率，病毒感染是ARI的主要病原，ARI臨床表現如發熱、咽痛、咳嗽、疲勞等缺乏特異性，而且目前可用于預防呼吸道病毒感染的疫苗很少，因此,了解急性呼吸道感染的病原學流行特征，對今后有效預防和控制病毒流行具有重要意義；選擇快速、靈敏的實驗室檢測手段，早期明確ARI的病原體對于臨床醫生明確疾病診斷及選擇合理診治方案具有指導意義。