miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a與阿爾茨海默病嚴(yán)重程度的關(guān)系及預(yù)測(cè)療效的價(jià)值

尚曉峰 冉秀榮 李虹

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）被證實(shí)與（Alzheimer's disease，AD）患病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，并在AD 患者治療后明顯降低［1］。微小核糖核酸-146a（microRNA-146a，miR-146a）在AD 動(dòng)物的海馬中表達(dá)顯著增加，故推測(cè)可能與AD 有關(guān)［2］。微小核糖核酸-193b（microRNA-193b，miR-193b）是AD 患者和正常人群的外周血轉(zhuǎn)錄差異表達(dá)基因之一，與AD發(fā)病有關(guān)［3］。且國(guó)外相關(guān)報(bào)道［4］顯示，miR-146a 等多種微小RNA 與AD 患者認(rèn)知功能和大腦皮質(zhì)變化有關(guān)，有作為認(rèn)知功能變化、治療效果預(yù)測(cè)標(biāo)志物的潛質(zhì)。且曹舸等［5］研究發(fā)現(xiàn)，心肌梗死患者微小RNA 表達(dá)與Lp-PLA2 呈正相關(guān)，可調(diào)控Lp-PLA2 水平。因此推測(cè)miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 可能以AD 為媒介，具有某種關(guān)系，共同參與了AD 發(fā)病，但現(xiàn)階段關(guān)于三者之間關(guān)系及其在AD 病程作用報(bào)道的鮮見。鑒于此本研究將探討miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 與AD 嚴(yán)重程度的關(guān)系及預(yù)測(cè)療效的價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年6月本院收治的114 例AD 患者，根據(jù)病情分為輕度組（n=35）、中度組（n=49）、重度組（n=30）。入組患者法定監(jiān)護(hù)人均對(duì)本研究知情，自愿簽署知情同意書。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合AD 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；②臨床癡呆量表（Clinical Dementia Scale，CDR）≥0.5 分；③Hachineski 缺血指數(shù)＜4 分；④年齡≥65 歲；⑤無急慢性感染類疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他疾病的導(dǎo)致的癡呆或認(rèn)知功能障礙者；②合并譫妄者；③有藥物濫用史者；④以往有嚴(yán)重創(chuàng)傷性腦損傷者；⑤有抑郁癥、精神分裂癥者；⑥合并帕金森病者。

1.2 方法

1.2.1 病情嚴(yán)重程度評(píng)估［7］

采用CDR 量表評(píng)估、簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查量表（Mini-mental State Examination，MMSE）、神經(jīng)精神問卷（Neuropsychiatric Inventory，NPI）評(píng)估。

1.2.2 標(biāo)本采集與檢測(cè)

于患者入院后治療前，采集空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心15 min，采用南京諾曼生物技術(shù)有限公司免疫增強(qiáng)發(fā)光法檢測(cè)血漿Lp-PLA2 水平；采用熒光定量PCR 法檢測(cè)血清miRNA-193b mRNA、miR-146a mRNA 表達(dá)。

1.2.3 治療方法

鹽酸多奈哌齊片（重慶植恩藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20010723）5 mg/次，1 次/d，臨睡前口服；薯蕷健脾益智合劑由本院中藥室統(tǒng)一煎制成真空包裝，250 mL/袋，15 ml/次，2次/d，口服。共治療2個(gè)月。

1.2.4 療效判斷

根據(jù)臨床療效總評(píng)量表（Clinical Global Impression，CGI）--療效指數(shù)（Efficacy index，EI）［8］評(píng)估療效，分為顯效、有效、稍有效、無效或惡化，其中顯效、有效、稍有效為總有效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，多組間比較以單因素方差分析，兩兩比較以LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗(yàn)，采用Spearman 分析miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 與病情分級(jí)的相關(guān)性，采用Pearson 分析各指標(biāo)與MMSE、NPI 評(píng)分的相關(guān)性，采用接收者操作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲線及ROC 下面積（Area under the curve，AUC）分析各指標(biāo)預(yù)測(cè)療效的價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組一般資料比較

3 組年齡、病程、體質(zhì)量指數(shù)、性別、受教育層次、合并疾病等資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 比較各組miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平及MMSE、NPI 評(píng)分

輕度組、中度組、重度組隨著病情加重，miRNA-193b mRNA、MMSE 評(píng)分依次降低，Lp-PLA2、miR-146a mRNA、NPI 評(píng)分依次升高（P＜0.05）。見表2、圖1。

表1 各組臨床資料對(duì)比［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups［n（%），（±s）］

表1 各組臨床資料對(duì)比［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups［n（%），（±s）］

資料年齡(歲)病程（月）體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）性別（男/女）受教育層次小學(xué)及以下初中高中大專及以上合并疾病高脂血癥糖尿病心臟病高血壓輕度組（n=35）72.49±7.38 28.97±9.11 22.26±2.01 16/19 5（14.29）16（45.71）10（28.57）4（11.43）5（14.29）7（20.00）1（2.86）2（5.71）中度組（n=49）72.69±8.57 29.26±8.75 22.07±1.89 20/29 4（8.16）24（48.98）18（36.73）3（6.12）7（14.29）11（22.45）2（4.08）4（8.16）重度組（n=30）69.06±8.03 27.46±9.03 22.51±1.72 12/18 3（10.00）15（50.00）10（33.33）2（6.67）4（13.33）5（16.67）2（6.67）3（10.00）F/χ2值0.105 0.401 0.508 0.275 2.023 0.017 0.387 0.578 0.417 P 值0.917 0.671 0.603 0.872 0.918 0.992 0.824 0.749 0.812

表2 比較各組miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 及MMSE、NPI 評(píng)分（±s）Table 2 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA，MMSE，and NPI scores in each group（±s）

注：與重度組相比，aP＜0.05；與中度組相比，bP＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F 值P 值例數(shù)35 49 30 miRNA-193b mRNA 0.96±0.23ab 0.87±0.19a 0.66±0.15 20.156＜0.001 Lp-PLA2（ng/mL）185.64±47.93ab 223.51±50.29a 259.14±55.83 16.790＜0.001 miR-146a mRNA 1.86±0.54ab 3.05±1.01a 5.36±1.17 114.257＜0.001 MMSE 評(píng)分（分）23.84±3.49ab 15.15±3.02a 6.45±1.27 302.453＜0.001 NPI 評(píng)分（分）41.22±8.59ab 71.18±10.35a 96.54±12.48 227.992＜0.001

2.3 分析各指標(biāo)與病情分級(jí)、MMSE、NPI 評(píng)分的相關(guān)性

miRNA-193b mRNA（r=-0.358）與病情分級(jí)呈負(fù)相關(guān)（見圖2A），Lp-PLA2（r=0.377）、miR-146a mRNA（r=0.749）（見圖2B、C）與病情分級(jí)呈正相關(guān)（P均＜0.05）；miRNA-193b mRNA（r=0.413）與MMSE 評(píng)分呈正相關(guān)（見圖2D），Lp-PLA2（r=-0.339）、miR-146a mRNA（r=-0.707）與MMSE 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（P均＜0.05）（見圖2E、F）；miRNA-193b mRNA（r=-0.348）與NPI 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（見圖2G），Lp-PLA2（r=0.390）、miR-146a mRNA（r=0.609）與NPI 評(píng)分呈正相關(guān)（P均＜0.05）（見圖2H、I）。（病情分級(jí)賦值：1=輕度，2=中度，3=重度）。

2.4 miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 之間的相關(guān)性

miRNA-193b mRNA 與Lp-PLA2（r=-0.235，P=0.012）、miR-146a mRNA（r=-0.337，P＜0.001）呈負(fù)相關(guān)，Lp-PLA2 與miR-146a mRNA 呈正相關(guān)（r=0.287，P=0.002）。

2.5 比較不同療效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平

總有效患者miRNA-193b mRNA 高于無效或惡化患者，Lp-PLA2、miR-146a mRNA 低于無效或惡化患者（P均＜0.05）。見表3。

表3 比較不同療效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平（±s）Table 3 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA levels in patients with different curative effects（±s）

表3 比較不同療效者miRNA-193b mRNA、Lp-PLA2、miR-146a mRNA 水平（±s）Table 3 Comparison of miRNA-193b mRNA，Lp-PLA2，miR-146a mRNA levels in patients with different curative effects（±s）

組別總有效無效或惡化t 值P 值n 83 31 miRNA-193b mRNA 0.88±0.22 0.73±0.11 3.624＜0.001 Lp-PLA2（ng/mL）213.36±57.44 242.41±68.99 2.272 0.025 miR-146a mRNA 3.06±0.85 3.91±1.07 4.418＜0.001

2.6 分析各指標(biāo)預(yù)測(cè)療效的價(jià)值

miR-146a mRNA 預(yù)測(cè)療效的AUC 為0.796（95%CI：0.710～0.866），截?cái)嘀禐椋?.73，敏感度為64.52%，特異度為81.93%（P＜0.05）；miRNA-193b mRNA 預(yù)測(cè)療效的AUC 為0.766（95%CI：0.678～0.840），截?cái)嘀禐椤?.87，敏感度為93.55%，特異度為51.81%（P＜0.05）；Lp-PLA2 預(yù)測(cè)療效的AUC為0.741（95%CI：0.651～0.819），截?cái)嘀禐椋?45.95 ng/mL，敏感度為45.16%，特異度為97.59%（P＜0.05）；各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC 為0.870（95%CI：0.794～0.926），敏感度為77.42%，特異度為89.16%（P＜0.05）。見圖3。

3 討論

miRNA-193b 是微小核糖核酸成員之一，與惡性腫瘤、心肌缺血再灌注損傷等有關(guān)，以往研究指出，其在AD 患者中呈低表達(dá)，有望成為AD 早期診斷的生物標(biāo)志物［9］。本研究檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miRNA-193b mRNA 與病情分級(jí)、認(rèn)知功能均有關(guān)。可見從基因水平上調(diào)miRNA-193b mRNA 表達(dá)可能為預(yù)防AD 病情進(jìn)展提供了一個(gè)新靶點(diǎn)。Kong Y等［10］報(bào)道顯示，與正常動(dòng)物相比，miRNA-193 在AD 動(dòng)物大腦中表達(dá)降低。Yang TT 等［11］臨床實(shí)驗(yàn)指出，miRNA-193 在AD 患者血清中表達(dá)低于正常人群。均支持本研究結(jié)論。

miR-146a 亦是微小核糖核酸成員之一，和多種神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、腦血管疾病等有關(guān)，近年來報(bào)道發(fā)現(xiàn)，miR-146a 還與帕金森病、AD 等神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病有關(guān)［12］。因此本研究發(fā)現(xiàn)miR-146a mRNA 參與AD 病情進(jìn)展與認(rèn)知功能損害，提示采用相關(guān)藥物或技術(shù)抑制miR-146a mRNA 表達(dá)可能為預(yù)防AD 病情進(jìn)展提供了一個(gè)新思路。Xue L等［13］報(bào)道顯示，與對(duì)照人群相比，AD 患者的血miR-146a 水平明顯更高，本研究觀點(diǎn)與之相似。miR-146a 的表達(dá)受核因子-κB 的調(diào)控，當(dāng)miR-146a高表達(dá)時(shí)，可反映核因子-κB 信號(hào)通路被激活，而核因子-κB 信號(hào)通路的激活已被證實(shí)與AD 神經(jīng)退行病變息息相關(guān)，故miR-146a 可能是聯(lián)系核因子-κB信號(hào)通路、AD 神經(jīng)退行病變的橋梁之一，從而影響AD 患者病情［14］。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，miR-146a mRNA 預(yù)測(cè)療效可為臨床選取合適的預(yù)測(cè)療效指標(biāo)提供參考。

本研究結(jié)果提示靶向Lp-PLA2，降低Lp-PLA2表達(dá)，可能有助于AD 病情的改善，能為抗AD 藥物的研發(fā)提供參考。Lp-PLA2 作為一種促炎物質(zhì)，可增加神經(jīng)元凋亡率，且還能介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，除對(duì)神經(jīng)元造成直接損傷外，還能通過其導(dǎo)致的血管損傷，間接誘發(fā)神經(jīng)元缺血、壞死，從而參與AD 病情的進(jìn)展。同時(shí)Lp-PLA2 預(yù)測(cè)療效能為臨床預(yù)測(cè)療效提供循證依據(jù)。

本研究提示3 指標(biāo)可相互影響，共同參與AD病情的進(jìn)展。但由于研究觀點(diǎn)的新穎性，尚不明確3 個(gè)指標(biāo)相互影響的詳細(xì)機(jī)制，有待后續(xù)的進(jìn)一步探討。此外ROC 分析顯示，miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 聯(lián)合預(yù)測(cè)療效的AUC 高于任一單一指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)3 個(gè)指標(biāo)能為臨床提供更可靠的參考信息。本研究不足之處在于，未具體觀察抑制或上調(diào)miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a 表達(dá)對(duì)病情的影響，故靶向各指標(biāo)是否真正意義上有助于防止AD 病情進(jìn)展仍需后續(xù)的進(jìn)一步探討。

綜上所述，miRNA-193b、Lp-PLA2、miR-146a與AD 嚴(yán)重程度顯著相關(guān)，3 者可相互影響，共同參與AD 病情進(jìn)展，檢測(cè)3 者表達(dá)有望成為預(yù)測(cè)療效的新型方案。