血清MMP-9和LCN-2水平在乳腺癌患者中表達(dá)意義及相關(guān)性分析

趙凌云

乳腺癌屬國(guó)內(nèi)女性常見(jiàn)且高發(fā)的惡性腫瘤疾病，因乳腺癌生物學(xué)特性影響，其癌細(xì)胞可經(jīng)血液循環(huán)途徑與淋巴途徑呈隱匿性轉(zhuǎn)移，進(jìn)而誘導(dǎo)癌細(xì)胞浸潤(rùn)其他器官組織致功能衰竭，導(dǎo)致患者死亡率較高［1］。近年臨床針對(duì)乳腺癌的診治技術(shù)發(fā)展，乳腺癌患者5年生存期得以延長(zhǎng)，但依舊有25%～37%的患者因乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移致死［2］。故如何有效防控乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移成為業(yè)界研究熱點(diǎn)。張冬冬等［3］指出，乳腺癌復(fù)發(fā)及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移均與毛細(xì)血管再生及細(xì)胞外基質(zhì)損傷有關(guān)。研究認(rèn)為［4］，基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）可降解細(xì)胞基底膜，促毛細(xì)血管生長(zhǎng)效應(yīng)，亦增強(qiáng)癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移功能。曹亞男等［5］研究指出，脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2（Lipocalin-2，LCN-2）與諸多惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展有密切關(guān)聯(lián)。對(duì)此本研究將，探析血清MMP-9 和LCN-2 表達(dá)水平在乳腺癌患者中的意義及臨床病理特征的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集本院2018年3月至2019年12月收治的乳腺癌患者80 例，設(shè)為乳腺癌組，年齡36～71 歲，平均年齡（53.76±9.74）歲。29 例腫瘤直徑＜2 cm，51 例腫瘤直徑≥2 cm，48 例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。病理診斷符合中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）《乳腺癌診療指南》標(biāo)準(zhǔn)［6］。基于《乳腺及女性生殖器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)［7］，收集同期收治的乳腺良性病變患者43 例，設(shè)為乳腺良性病變組。另收集醫(yī)務(wù)志愿者40 例，對(duì)照組。各組年齡比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①乳腺癌經(jīng)病理診斷；②臨床資料齊全；③檢測(cè)前未開(kāi)展放化療或激素干預(yù)；④知情同意，經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)理論委員會(huì)討論批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并代謝性疾病者；②肝腎功能不全；③伴嚴(yán)重感染者；④合并心血管疾病。

1.2 方法

取各組外周靜脈血（空腹、晨間）3 mL，離心10 min（3 000 r/min），分離血清。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清LCN-2（RD 公司生產(chǎn)試劑盒）、MMP-9（晶美生物技術(shù)公司生產(chǎn)試劑盒）表達(dá)水平，嚴(yán)格遵循試劑盒操作標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算LCN-2、MMP-9 含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（）表示組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman 法，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較

血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)水平比較結(jié)果為：乳腺癌組＞乳腺癌良性病變組＞對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表1。

表1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

表1 各組血清MMP-9、LCN-2 的含量比較（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

注：與乳腺良性病變組比較a P＜0.05，與健康對(duì)照組比較b P＜0.05。

組別乳腺癌組乳腺良性病變組對(duì)照組F 值P 值n 80 43 40 MMP-9（ng/mL）96.02±23.25ab 27.26±14.47 23.22±11.85 286.44＜0.001 LCN-2（ng/mL）95.27±27.68ab 54.39±21.23 48.57±19.09 66.99＜0.001

2.2 血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)水平與腫瘤直徑、TNM 分期期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR 明顯相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與年齡、分化程度、組織學(xué)類型無(wú)相關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

表2 血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

項(xiàng)目年齡（歲）＜50≥50腫瘤直徑（cm）＜2≥2 TNM 分期Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無(wú)ER+-PR+-分化程度低分化中分化高分化組織學(xué)類型特殊型非特殊型n 27 53 29 51 49 31 48 32 58 22 50 30 13 52 15 14 66 MMP-9（ng/mL）91.05±28.54 97.33±34.07 80.25±21.04 127.85±35.19 87.25±20.22 133.76±41.08 119.25±30.86 73.06±20.41 124.73±30.58 85.62±24.07 108.69±33.46 76.89±23.58 92.66±24.29 86.24±29.33 83.67±28.26 90.28±31.46 98.77±24.21 t/F 值0.822 6.631 6.753 7.443 5.391 4.565 0.38 1.129 P 值0.414＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.687 0.262 LCN-2（ng/mL）89.67±31.02 95.33±27.54 67.29±24.36 113.07±35.72 71.08±19.33 107.36±31.82 99.35±30.85 68.92±21.03 93.17±18.25 79.36±31.05 99.28±27.63 76.15±31.07 101.22±39.56 91.69±35.52 96.25±31.13 91.68±30.74 95.14±27.61 t/F 值0.833 6.131 6.352 4.871 2.459 3.459 0.41 0.418 P 值0.408＜0.001＜0.001＜0.001 0.016 0.001 0.665 0.677

2.4 血清MMP-9、LCN-2 相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表達(dá)與ER、PR 均呈正相關(guān)（P＜0.05），乳腺癌患者血清MMP-9 與LCN-2 亦呈正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 血清MMP-9、LCN-2 相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of serum MMP-9 and LCN-2

3 討論

乳腺癌復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移屬預(yù)后結(jié)局高危獨(dú)立影響因素［8］。因細(xì)胞基底膜損傷，導(dǎo)致細(xì)胞與細(xì)胞連接基質(zhì)防御結(jié)構(gòu)異常，致使腫瘤原發(fā)病灶周?chē)Y(jié)締組織浸潤(rùn)，進(jìn)而引發(fā)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)［9］，MMP-9 則是細(xì)胞外基質(zhì)降解重要參與蛋白水解酶之一，可降解細(xì)胞基底膜，破壞基底膜屏障，提高癌細(xì)胞組織浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。研究指出［10］，正常人機(jī)體內(nèi)MMP-9 含量較低，但受癌細(xì)胞及相關(guān)致癌因子刺激，可誘導(dǎo)分泌MMP-9，造成血清MMP-9 表達(dá)增高。Ra?i? 等［11］研究，MMP-9 可對(duì)腫瘤基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，降解纖維粘連蛋白、Ⅳ型膠原，還能增加癌細(xì)胞黏附能力，在腫瘤復(fù)發(fā)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等環(huán)節(jié)均有促進(jìn)作用。周寧等［12］發(fā)現(xiàn)，乳腺癌病理特征與MMP-9 水平有明顯關(guān)聯(lián)。故眾學(xué)者認(rèn)為，通過(guò)測(cè)定患者血清MMP-9 水平表達(dá)可評(píng)估惡性腫瘤進(jìn)展程度。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清MMP-9 含量明顯高于健康人員及乳腺良性病變患者，且血清MMP-9 水平與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR表達(dá)相關(guān)；與患者年齡、分化程度、組織學(xué)類型并無(wú)關(guān)聯(lián)。證實(shí)血清MMP-9 表達(dá)水平可評(píng)估乳腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移情況。李金濤等［13］動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9 與腫瘤毛細(xì)血管生成因子有明顯協(xié)同作用，且血清MMP-9 表達(dá)水平越高，其腫瘤血管生成率越大。本研究中，乳腺癌患者ER、PR 表達(dá)與血清MMP-9 呈正相關(guān)，說(shuō)明在乳腺癌病變進(jìn)展過(guò)程MMP-9、ER、PR 存在相互協(xié)同效應(yīng)，但受研究樣本限制，相關(guān)協(xié)同機(jī)制尚未解析。

早期研究證實(shí)，LCN-2 對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳遞、內(nèi)環(huán)境調(diào)控及免疫調(diào)節(jié)均有積極參與。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)［14］，LCN-2 在肺癌、肝癌、食管癌、乳腺癌等諸多惡性腫瘤中均呈表達(dá)上調(diào)，推論LCN-2 在常見(jiàn)惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展扮演重要角色。Bauer 等［15］研究，乳腺癌細(xì)胞的凋亡、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中LCN-2 均有參與。畢泗成等［16］研究，血清LCN-2 水平與惡性腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER2/neu 過(guò)表達(dá)及Ki67 均有明顯相關(guān)性。研究指出［17］，LCN-2 基因抑制可延緩乳腺癌腫瘤生長(zhǎng)，抑制癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移。反之LCN-2 高表達(dá)可誘導(dǎo)EMT，增加癌細(xì)胞復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果提示LCN-2 高表達(dá)參與乳腺癌病理進(jìn)展過(guò)程。

研究報(bào)道［18］，惡性腫瘤患者血清LCN-2 過(guò)表達(dá)可抑制MMP-9 降解效率，LCN-2 與MMP-9 可生成復(fù)合產(chǎn)物NGAL/MMP-9，提高癌細(xì)胞浸潤(rùn)反應(yīng)。張萍等［19］研究亦發(fā)現(xiàn)，血清LCN-2 與MMP-9 高表達(dá)患者5年預(yù)后生存質(zhì)量較差，存活率顯著低于LCN-2 與MMP-9 低表達(dá)患者。本研究中乳腺癌患者血清LCN-2 與MMP-9 表達(dá)呈正相關(guān)，經(jīng)分析可能與LCN-2 保護(hù)調(diào)節(jié)MMP-9 活性，促進(jìn)乳腺癌生長(zhǎng)進(jìn)展相關(guān)。提示LCN-2 與MMP-9 高表達(dá)屬乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的主要影響因素，與病情進(jìn)展相關(guān)。

綜上所述，乳腺癌患者血清LCN-2、MMP-9 均呈高表達(dá)，增加乳腺癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)；聯(lián)檢血清LCN-2、MMP-9 表達(dá)水平，有助于預(yù)測(cè)評(píng)估乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況。