DNA結合抑制因子、Rab5基因在子宮內膜異位癥患者中的表達及其意義

陳豫中 賴威 張國安 李正英

子宮內膜異位癥（Endometriosis，EMS）為孕齡期女性常見疾病，由于EMS 的臨床表現有時與病變程度很不相符，給臨床診斷、治療帶來諸多困難［1-2］。有學者認為細胞生物學相關因子與EMS 的發生發展有關，病理過程與腫瘤組織的增殖及遷移等相似，因此，積極探索EMS 診斷及治療的生物學標志物一直是臨床研究的重點問題［3-4］。近年研究提示，DNA 結合抑制因子2（Inhibitor of differentiation/DNA binding 2，ID2）與腫瘤細胞的增殖及遷移關系密切［5-6］。此外，Rab5 是三磷酸鳥苷（Guanosine triphosphate，GTP）結合蛋白家族的一員，具有促進細胞遷移、侵襲及血管生成等作用［7-8］。因EMS 具有類似惡性腫瘤的增殖、侵襲及遠處轉移等生物學行為，推測EMS 患者內膜組織中也可能存在Rab5、ID2 的變化。基于此，本研究嘗試綜合分析ID2、Rab5 基因在EMS 患者中的表達及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月至2019年8月院138 例EMS 患者作為研究組，年齡29～46 歲，體質量48～73 kg，疾病類型：卵巢型35 例，腹膜型43 例，深部浸潤型60 例。另選取同期120 例行輸卵管絕育手術患者作為對照組，年齡30～48 歲，體質量47～71 kg。

納入標準：①EMS 的診斷參照世界子宮內膜異位癥學會（World Endometriosis Society，WES）制定的相關標準［9］；②對照組均經檢查確認無EMS；③入組前6 個月無性激素藥物使用史；④認知功能、溝通能力正常；⑤患者均知曉本研究，已簽署同意書。排除標準：①嚴重肝腎功能障礙者；②合并卵巢囊腫、先天性子宮發育異常、瘢痕子宮等疾病者；③自身免疫性疾病患者；④內分泌功能紊亂者；⑤合并嚴重呼吸、消化系統疾病及血液系統疾病者；⑥惡性腫瘤患者。研究組病變分期：參照美國生育學會修訂的內異癥分期標準評分：Ⅰ期（微型）1～5 分，Ⅱ期（輕型）6～15 分，Ⅲ期（中型）16～40分，Ⅳ期（重型）大于40 分。

1.2 方法

Rab5mRNA、ID2mRNA 表達量檢測方法：入組當天，由專業檢測師取受檢者子宮內膜組織，采用磷酸緩沖鹽溶液清洗標本組織，并采用實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）法檢測Rab5mRNA、ID2mRNA 表達量，應用公式2-ΔΔct進行定量分析。

血清癌胚抗原125（Carcinoembryonic antigen 125，CA125）、子宮內膜抗體（Endometrial antibody，EmAb）檢測方法：入組當天清晨，取受檢者空腹狀態下靜脈血3 mL，由專業檢測師采用上海利鑫堅離心機有限公司生產的L-400 離心機，以3 000 r/min轉速處理10 min，取血清，采用美國Bio-RAD 公司生產的Bio-RAD550型酶標儀與配套試劑盒，以酶聯免疫吸附法測定血清CA125、EmAb 水平。

1.3 觀察指標

①兩組子宮內膜組織中Rab5mRNA、ID2mRNA 表達量。②分析Rab5mRNA、ID2mRNA 診斷EMS 的價值。③不同病情分期EMS 患者Rab5mRNA、ID2mRNA、血清CA125、EmAb 水平。④分析Rab5mRNA、ID2mRNA、血清CA125、Em-Ab 水平與EMS 患者病情分期的相關性。⑤分析EMS 患者Rab5mRNA、ID2mRNA 與血清CA125、EmAb 水平的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行數據處理，計量資料以（）表示、t檢驗，多組間比較以單因素方差進行分析，采用Spearman 和Pearson 進行相關性分析，采用受試者工作（Receiver operating characteristic，ROC）曲線分析預測價值，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料對比

對比兩組分娩情況、年齡、婚姻狀況、體質量、子宮內膜情況，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料的比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of 2 groups of general information［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料的比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of 2 groups of general information［n（%），（±s）］

項目年齡（歲）體質量（kg）子宮內膜情況（例）增殖期分泌期婚姻狀況（例）已婚未婚分娩情況（例）有無研究組（n=138）38.64±3.65 56.43±4.21 72（52.17）66（47.83）129（93.48）9（6.52）117（84.78）21（15.22）對照組（n=120）39.52±4.21 55.57±4.09 68（56.67）52（43.33）114（95.00）6（5.00）100（83.33）20（16.67）t/χ2值1.798 1.658 0.5220.470 0.2710.602 0.1010.751 P 值0.073 0.099

2.2 兩組患者子宮內膜組織中Rab5 mRNA、ID2 mRNA 表達量

研究組子宮內膜組織中Rab5mRNA 表達量（2.75±0.34）、ID2mRNA 表達量（2.32±0.27）高于對照組Rab5mRNA 表達量（1.07±0.13）、ID2mRNA 表達量（1.10±0.11）（t=50.974、46.263）差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 Rab5 mRNA、ID2 mRNA 診斷EMS 的價值

ROC 曲線分析顯示，Rab5mRNA 診斷EMS 的曲線下面積（Area under the curve，AUC）為0.747（95%CI為0.689～0.799），大于ID2 mRNA 的0.733（95%CI為0.675～0.786），二者聯合診斷EMS 的AUC 為0.802（95%CI為0.748～0.849），聯合診斷的最佳敏感度為78.99%，特異度為69.17%，見圖1。

2.4 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb

隨著EMS 患者病情分期增高，Rab5mRNA、ID2mRNA 表達及血清CA125、EmAb 水平逐漸提高（P＜0.05），見表2。

表2 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb 比較（±s）Table 2 Comparison of Rab5 mRNA，ID2 mRNA，serum CA125 and EmAb in patients with different stages of disease（±s）

表2 不同病情分期患者Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb 比較（±s）Table 2 Comparison of Rab5 mRNA，ID2 mRNA，serum CA125 and EmAb in patients with different stages of disease（±s）

組別Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F 值P 值n 27 42 36 33 Rab5 mRNA 2.02±0.30 2.33±0.35 2.85±0.41 3.77±0.56 108.381＜0.001 ID2 mRNA 1.81±0.28 2.14±0.32 2.36±0.34 2.92±0.45 54.148＜0.001 CA125（kU/L）21.63±3.71 24.42±4.06 29.80±4.38 35.02±5.03 59.891＜0.001 EmAb（OD 值）0.36±0.04 0.40±0.05 0.45±0.07 0.52±0.08 38.597＜0.001

2.5 Rab5 mRNA、ID2 mRNA 與血清CA125、Em-Ab 相關性

Pearson 相關性分析，Rab5mRNA（r1=0.568；r2=0.468）、ID2mRNA（r1=0.522；r2=0.542）與血清CA125、EmAb 呈正相關（P＜0.05），見圖2。

2.6 Rab5 mRNA、ID2 mRNA、血清CA125、EmAb與病情分期的關系

Spearman 相關性分析，Rab5mRNA（r=0.397）、ID2mRNA（r=0.511）、血清CA125（r=0.682）、EmAb（r=0.701）與EMS患者病情分期呈正相關（P均＜0.05）。

3 討論

EMS 可累及子宮肌層、盆腔、卵巢等部位，形成痛經、慢性盆腔痛、盆腔黏連及不孕等癥狀，危害性較大，尋求特異性分子標志物對EMS 的診斷及治療均具有重要臨床意義［10-11］。

子宮內膜發生異位增殖的關鍵在于在位內膜基因的表達，是引發EMS 的內在因素［13］。ID2 是近年發現的新型轉錄因子，其異常表達與腫瘤惡性生物學行為存在密切關系［14］。國內外大量研究顯示，EMS 同樣具有類似惡性腫瘤的增殖、侵襲及遠處轉移等生物學行為［15］。此次研究發現，EMS患者子宮內膜組織中ID2基因表達量顯著升高，與EMS 的發生發展密切相關。ID2 可與堿性螺旋-環-螺旋類轉錄因子結合形成異源二聚體，導致ID2缺失，影響其與靶基因的結合，進而抑制相關基因表達，而ID2 的異常高表達則能促進腫瘤細胞的增殖及遷移，從而參與EMS 的發展［16］。相關研究指出，EMS 患者機體內存在較強的炎癥反應，白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α 等炎性因子水平增高［17］。Rab5 作為一種GTP 酶，是細胞內膜運輸的關鍵調節劑，具有調節炎癥因子合成的作用，從而參與細胞炎癥反應。本研究發現Rab5 基因異常高表達可促進EMS 發生和病情進展，與林慧芳等［18］研究結果相近，且Rab5mRNA、ID2mRNA 聯合將有助于改善臨床診斷EMS 敏感性，Ⅰ期EMS患者子宮內膜組織中Rab5mRNA、ID2mRNA 表達水平明顯高于子宮內膜正常女性，且隨著EMS患者病情分期增高，Rab5mRNA、ID2mRNA 表達水平逐漸提高，檢測Rab5mRNA、ID2mRNA 表達水平有助于EMS 的早期發現和治療。

Jelodar 等［19］研究發現，在無EMS 的機體血清中CA125 的濃度較低，而在有EMS 的機體血清中CA125 的濃度較高。CA125 是一種存在于細胞表面的糖蛋白，在某些特定類型惡性腫瘤或其他良性病癥患者的血液中升高［20］。EMS 患者血清CA125水平與病情分期存在正相關關系，CA125 可通過損傷EMS 病灶組織中的線粒體而提高腺體細胞的黏附能力，最終嚴重損傷基底膜層上皮組織，因此CA125 可在一定程度上反映EMS 病情嚴重程度。EmAb 是子宮內膜內的特異性抗體，當女性子宮內膜發生炎癥時，可能轉化成抗原或半抗原，刺激機體自身產生相應的抗體［21］。近年來，EmAb 的測定被廣泛應用于EMS 的診斷和輔助治療，研究發現EMS 患者細胞和體液免疫均有變化，異位的內膜使機體產生免疫誘導進而產生EmAb［22］。國外研究指出，EMS 發生過程中，患者血清和子宮內膜中的EmAb 對疾病的進展具有重要促進作用，與患者病情關系密切［23］。本研究發現EmAb 水平與患者病情分期存在正相關，可指導臨床評估EMS 病情程度。本研究雖然明確了Rab5和ID2基因表達在EMS 診斷及病情程度評估方面具有較高臨床價值，但研究是在較理想的實驗條件下進行，實際工作中Rab5和ID2基因表達能否則為EMS 診斷及病情程度評估的生物學指標，仍需以后開展大量研究及臨床試驗證實，也是我們后續研究的方向。