色釘菇多糖抗運動病作用的分析*

張永剛

（重慶郵電大學移通學院體育部，重慶 401520）

色釘菇（Chroogomphus rutilus） 又稱血紅鉚釘菇，俗稱紅蘑、肉蘑、松樹傘、松蘑等，隸屬于擔子菌亞門 （Basidiomycotina） 層菌綱 （Hymenomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 鉚釘菇科 （Gomphidiaceae） 色釘菇屬（Chroogomphus）；其肉質(zhì)肥嫩且鮮美可口，是一種名貴的野生食用菌，但無法人工栽培。色釘菇富含氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、內(nèi)酯等多種化學成分，具有抗氧化、增強免疫功能、抗運動病的作用。研究表明，植物神經(jīng)功能紊亂而引發(fā)的惡心、眩暈等是導致患者產(chǎn)生運動病的主要原因[1]。隨著交通出行的不斷便捷，運動病的發(fā)病率呈不斷遞增的趨勢。對于一般患者而言，其造成的影響主要體現(xiàn)在影響生活質(zhì)量和身心健康方面，但對于航天飛行員來說，患病造成的影響較為嚴重。因此，對于運動病的研究重點在于如何提高藥物的適用性，降低毒副作用[2]。此外，對于運動病的行為檢測指標則體現(xiàn)在條件性味覺厭惡，主要利用復制運動病前予以大鼠糖精水喂養(yǎng)建立起的條件性味覺厭惡反射，使大鼠的糖精水攝取量減少，以作為檢測運動病程度的主要指標。為更好的發(fā)揮色釘菇的藥理活性，通過行為學和生化等檢測方法，探討色釘菇多糖對大鼠抗運動病的防治效果，為抗運病藥物的研制提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗動物為成年雄性SD大鼠20只，平均體重為210 g～240 g。色釘菇、食用糖精、氯化鈉、戊巴比妥鈉、大鼠胃動素ELISA試劑盒、大鼠5-HT ELISA試劑盒。偏離垂直軸旋轉(zhuǎn)儀、冷凍離心機、磁力加熱攪拌器、電子分析天平。

1.2 試驗方法

1.2.1 色釘菇多糖的制備

采用試驗室標準蒸餾水對所選色釘菇子實體進行洗滌，完全洗滌干凈后于45℃的烘箱恒溫烘干，后予以粉碎稱重。用1∶10的比例混合色釘菇子實體粉末與蒸餾水，并放入水浴鍋內(nèi)80℃水浴加熱，輔以電動攪拌棒充分攪拌，浸提8 h，3 000 r·min-1離心處理15 min后提取上清液，并將子實體進行回收處理，水浴離心浸提3次，將3次離心提取的上清液混合并蒸發(fā)濃縮，后加入95%的3倍體積乙醇，4℃過夜沉淀，直至產(chǎn)生色釘菇多糖絮狀物，用無水乙醇反復沖洗后采用真空冷凍方式獲取色釘菇多糖。

1.2.2 試驗分組處理

將20只大鼠采用隨機分配的方式分為試驗組和對照組，每組10只，每組中的5只用于行為學檢測，另外5只用于血清5-羥色胺（5-HT）和胃動素水平含量檢測。大鼠購入后飼養(yǎng)3 d以適應環(huán)境，禁水24 h后使大鼠自由飲用0.15%糖精水45 min。

1.2.3 血清5-HT和胃動素含量檢測試驗

對照組大鼠灌胃2 mL 0.9%的10 mL·kg-1氯化鈉溶液，試驗組大鼠灌胃2 mL 200 mg·kg-1的色釘菇多糖溶液，30 min后對2組大鼠進行OVAR旋轉(zhuǎn)刺激（偏離垂直軸10°、旋轉(zhuǎn)頻率1.5 Hz、持續(xù)旋轉(zhuǎn)時間1.5 h） 誘發(fā)運動病，然后進行試驗指標檢測，并檢測大鼠血清5-羥色胺及胃動素含量水平。

1.2.4 行為學檢測試驗

1）糖精水條件性味覺厭惡試驗

將空白對照組與試驗組進行OVAR旋轉(zhuǎn)刺激（方法參照1.2.3）。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后，各組大鼠均即刻進行曠場試驗檢測，并在第2天8:00自由飲用0.15%糖精水45 min，記錄2組糖精水的飲用量，連續(xù)記錄3 d。

2） 曠場試驗

將大鼠放入曠場中央格內(nèi)，用錄像機記錄大鼠10 min在曠場內(nèi)的活動情況。每次試驗結(jié)束后用消毒酒精擦拭箱底和四壁，以去除上只大鼠尿液、糞便的影響。統(tǒng)計大鼠潛伏期（曠場底面中央的9個格為中央?yún)^(qū)域，在中央?yún)^(qū)域的停留時間）、修飾行為（舔毛、舔足、兩前肢理毛、撫嘴等）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

將所有研究數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件處理，其中計量資料對比通過（±s） 表示，t值檢驗；最后，判定統(tǒng)計學差異的標準為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量的試驗結(jié)果對比

2組大鼠血清5-HT和胃動素含量的試驗對比結(jié)果見表1。

表1 血清神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量的試驗結(jié)果對比Tab.1 Comparison of experimental results of serum neurotransmitters and hormones

如表1所示，對照組大鼠5-HT水平含量顯著增加，試驗組大鼠5-HT水平含量顯著降低P＜0.05；對照組大鼠胃動素水平含量降低，試驗組大鼠胃動素水平含量增高，P＜0.05。

2.2 兩組大鼠糖精水條件性味覺厭惡檢測結(jié)果對比

2組大鼠糖精水條件性味覺厭惡檢測結(jié)果見表2。

表2 2組大鼠糖精水條件性味覺厭惡檢測結(jié)果對比Tab.2 Comparison of test results of conditional taste aversion in saccharin water between two groups of rats

如表2所示，對照組大鼠與OVAR旋轉(zhuǎn)刺激轉(zhuǎn)后相比，糖精水攝入量顯著減少P＜0.05，直至轉(zhuǎn)后第3天攝入量才開始恢復增加，與轉(zhuǎn)前相比，仍差距顯著P＜0.05。試驗組大鼠與OVAR旋轉(zhuǎn)刺激轉(zhuǎn)前相比，糖精水攝入量無明顯差異P＞0.05。

2.3 兩組大鼠潛伏期及修飾時間對比

試驗組大鼠行為表現(xiàn)正常，意識清楚、行動正常、肢體活動靈敏，探索行為正常，飲食行為與飲水狀態(tài)均處于正常水平。對照組大鼠在經(jīng)過OVAR旋轉(zhuǎn)刺激后表現(xiàn)為顯著的運動病狀態(tài)，行為遲緩、呼吸急促、顫抖炸毛、自主行為活動減少，存在大小便失禁等癥，修飾行為增加。2組大鼠潛伏期及修飾時間對比見表3。

表3 試驗結(jié)果對比Tab.3 Comparison of test results

如表3所示，對照組大鼠自主活動顯著減少，多呈靜臥的狀態(tài)，試驗組大鼠活動正常，自主探究行為較多，對照組的潛伏期顯著高于試驗組，P＜0.05。對照組大鼠轉(zhuǎn)后，自主探究活動減少，為顯著的運動病狀態(tài)，行為遲緩、呼吸急促、顫抖炸毛、存在大小便失禁等癥，修飾時間長；試驗組大鼠轉(zhuǎn)后自主活動正常，修飾行為正常，意識清楚、肢體活動靈敏，探索行為正常，飲食行為與飲水狀態(tài)均處于正常水平。修飾時間短于對照組P＜0.05。

3 討論

目前，對于運動病的發(fā)病機制進行了較多研究并存在多種假說，主要以中樞神經(jīng)遞質(zhì)失衡、內(nèi)分泌功能異常為主要原因，且抗運動病藥物研制多以檢測血液內(nèi)激素變化，并輔以觀察動物行為變化，以確定藥效。目前廣泛使用的抗運動病藥物均具有良好的減輕癥狀效果，但大多都存在一定的副作用，如視力模糊、注意力下降等，無法滿足航空領域人員的專業(yè)需求[3]。通過采取偏離垂直軸旋轉(zhuǎn)復制運動病模型的方式對成年雄性SD大鼠進行抗運動病藥物的研究，運動病模型復制成功的大鼠主要表現(xiàn)為自主活動減少，鼠類修飾行為增多，修飾時間增加，且顫抖、炸毛情況增多。研究表明，在對大鼠進行復制運動病前予以灌胃色釘菇多糖可有效改善大鼠的運動病癥狀。5-HT與胃動素是調(diào)節(jié)胃腸激素分泌的關(guān)鍵因素，而運動病的主要臨床表現(xiàn)為患者出現(xiàn)惡心嘔吐、胃腸功能紊亂，主要體現(xiàn)在胃動素含量的降低與5-HT分泌的增加[4]。相關(guān)研究表明[5]，運動病患者普遍存在胃腸道5-HT分泌增加，導致無法通過血腦屏障在血液中充分內(nèi)擴散，進而使得腸壁內(nèi)迷走神經(jīng)被激活而傳入末梢，導致信號傳至孤束核而引發(fā)反射。抑制5-HT的分泌是治療運動病的關(guān)鍵所在，且目前臨床研究將抗運動病的藥物治療方向轉(zhuǎn)移到了5-HT受體拮抗劑方向，并取得了一定的研究成果[6]。此外，胃動素的水平含量也是影響運動病的主要指標之一。通過研究發(fā)現(xiàn)，大鼠服用色釘菇多糖后，可有效降低運動病的臨床癥狀，降低大鼠血清中的神經(jīng)遞質(zhì)含量，促進胃動素的分泌。不僅表明了抗運動病的治療關(guān)鍵與5-HT與胃動素有關(guān)，還證實了色釘菇多糖具有良好的抗運動病作用[7]；對比2組大鼠的行為表現(xiàn)、潛伏期時間、糖精水條件性味覺厭惡檢測結(jié)果、修飾時間與血清中神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量等試驗結(jié)果，皆體現(xiàn)出色釘菇多糖具有顯著的抗運動病療效，促進大鼠胃動素分泌且抑制其5-HT分泌，該結(jié)果可作為臨床醫(yī)學的研究依據(jù)，為防止和開發(fā)與選擇抗運動病藥物提供新方向。