羊肚菌多糖對小鼠抗運動疲勞及耐缺氧的影響*

曹 亮

（燕山大學體育學院，河北 秦皇島 066004）

近年來，隨著食用菌相關研究不斷深入，人們利用的食用菌已存有350多種[1]。食用菌主要是指可食用的子實體較大的真菌，主要包括木耳（Auricularia auricula）、松茸 （Tricholoma matsutake）、松露（Tuber spp.）等，羊肚菌（Morchella esculenta）作為食用菌當中較為珍貴的菌類，其外形與羊肚形狀較為接近，因此而得名羊肚菌[2]。羊肚菌生長環境較為特殊，大多生長在火山附近，產量較為稀少且珍貴[3]。現階段，針對羊肚菌的研究不斷深入，作為公認的珍稀食用菌種類，一方面需要通過深層發酵技術來獲取羊肚菌的菌絲體[4]。根據相關調查研究顯示，羊肚菌具有一定的藥用功效，對于人體喘咳、食積氣滯等具有良好的治療效果[5]。食用羊肚菌不僅能夠有效增強人體免疫力，同時還具備抗疲勞、抗衰老的作用，在保健方面發揮著良好功效。現代社會隨著人們生活壓力的不斷增加，日常工作的壓力和疲勞度大大提高，長期處于亞健康狀態下，導致健康狀況受到影響，而對抗疲勞的相關藥物的需求不斷提高。通過抗疲勞試驗，實現對羊肚菌多糖成分的有效提取，并測定小鼠服用多糖后對運動功能所起到的有效促進作用，進而分析多糖在對抗疲勞和增強機體運動能力方面的效果。

1 材料

1.1 試驗動物

ICR小鼠共選取60只雄性，將重量控制在28 g左右，所購入小鼠均由中國農業大學動物中心所提供，并具有相應的合格證號SCXK2016-0013[6]。

1.2 主要材料與試劑

羊肚菌菌株由雪開野生靈芝銷售有限公司所提供，所購入羊肚菌均符合研究標準；試驗中所用的血乳酸試劑盒以及檢測試劑盒，均由上海依科賽生物制品有效公司提供，符合試驗所需要使用的材料與試劑標準。

1.3 主要儀器

便攜式血乳酸測定儀，德國EKF lactate scout公司；超微粉碎機，康和機械制造有效公司。試驗主要儀器有可見光光度計、旋轉蒸發儀、電熱恒溫水浴鍋以及離心機等。

2 方法

2.1 羊肚菌多糖的制備

胞外多糖的提取：提取羊肚菌培養液300 mL，過濾，并在50℃恒溫水中進行攪拌從而使體積濃縮；為去除蛋白，采用Sevage方法，將去蛋白后的培養液加入其3倍體積的95%乙醇在-20℃沉降24 h，析出絮狀白色物質，以4 000 r·min-1離心20 min得到白色沉淀，加入50 mL蒸餾水溶解后，50℃水浴除去樣品中殘留的乙醇，得到胞外多糖，備用經過相關操作后，最終得出胞外多糖留著后續試驗操作備用[7]。

胞內多糖的提取：為獲取菌絲沉淀物，采用蒸餾水離心洗滌的方式進行，通過將水浴溫度控制在85℃恒溫條件下，按照50∶1的比例增加去離子水，整個浸提時間控制在120 min，在經過離心去除菌絲、離心去沉淀等操作后，最終得到胞內多糖[8]。

采用乙醇對羊肚菌內的多糖進行相應的提取，得知羊肚菌多糖主要是由摩爾比1∶1.059的甘露糖與半乳糖組成。將提取得到的羊肚菌多糖調制成一定的濃度，作為試驗的主要材料。

2.2 試驗動物分組與給藥

試驗中，將每組小鼠15只，分4個組進行試驗，各小組需要保持在正常飼養的情況下，對照組小鼠給予去離子水（10 mg·kg-1）灌胃，低劑量、中劑量、高劑量組分別灌胃羊肚菌多糖10 mg·kg-1、20 mg·kg-1、30 mg·kg-1，灌胃持續時間為 30 d[10]，所有試驗均在小鼠灌胃羊肚菌多糖30 min后進行相關操作。

2.3 負重游泳時間測定試驗

小鼠負重游泳測試放置在水溫28℃的水中，并讓各個小組分別進行負重游泳試驗，游泳箱內的水深控制在35 cm左右。在試驗過程當中，對小鼠進行鉛絲捆綁負重，詳細記錄小鼠負重游泳的時間。

2.4 爬桿時間測定試驗

將小鼠放置在長30 cm的玻璃棒上，玻璃棒的直徑控制在10 mm左右，從而使小鼠身體各部位肌肉保持緊張感覺。在整個試驗過程當中，注意記錄小鼠攀爬玻璃棒的疲勞時間，詳細記錄爬桿時間。

2.5 常壓耐缺氧時間測定試驗

將小鼠放置在放有15 g石灰的大瓶中，在小鼠進入大瓶后及時進行瓶口的密封，根據實際情況詳細記錄小鼠耐缺氧時間。

2.6 生化指標的測定方法

2.6.1 血清尿素氮含量

對小鼠進行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90 min后，對小鼠進行采血，同時分離血清，測其中尿素氮含量.

2.6.2 肝糖原含量

對小鼠進行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90 min后，處死后進行取小鼠肝組織200 mg，將其勻漿，檢測肝糖原含量[11]。

2.6.3 血乳酸含量

對小鼠進行末次灌胃30 min后，將小鼠尾部系上鉛絲，重量為其身體重量的5%，進行負重游泳，泳池水溫約為35℃，游泳90 min后，休息20 min，從小鼠眼球位置取血，測血乳酸含量。

2.6.4 TNF-α和IL-6含量檢測

根據ELISA試劑盒的相關說明書進行血清含量的檢測。

3 結果與分析

3.1 羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿及常壓耐缺氧時間的影響

羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿、耐缺氧時間的影響情況見表1。

表1 羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿、耐缺氧時間的影響Tab.1 Effects of Morchella esculenta polysaccharides on weightbearing swimming,climbing pole and hypoxia tolerance time in mice

根據表1相關數據可知，在經過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其各項運動指標都發生了顯著變化，游泳時間得到了明顯增加，由對照組的（13.25±3.05） min，提高到高劑量組的（53.52±3.02） min，同時小鼠負重游泳的時間也將隨著劑量的提升而得到延長，充分說明羊肚菌多糖劑量的用量越大，小鼠耐缺氧時間則延長越久[12]。充分證明羊肚菌多糖增強小鼠運動能力的積極作用，在抗疲勞和耐缺氧方面具有良好效果。

3.2 羊肚菌多糖對小鼠生化指標的影響

羊肚菌多糖對小鼠各項生化指標的影響情況見表2。

表2 羊肚菌多糖對小鼠各項生化指標的影響Tab.2 Effect of Morchella esculenta polysaccharides on biochemical indexes in mice

根據表2結果顯示，經過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其生化指標得到了明顯提高，隨著灌胃劑量的不斷增加，其體內生化指標的數據也有相應變化。其中，最明顯的變化特征為小鼠體內血清尿素氮的含量，隨著羊肚菌劑量的增加而出現了顯著降低，對照組尿素氮含量為 (8.76±0.21)mmol·L-1；低劑量、中劑量、高劑量組尿素氮含量分別為（7.24±0.44） mmol·L-1、 （5.93 ± 0.15） mmol·L-1、 （4.49 ±0.36） mmol·L-1，尤其是在羊肚菌多糖劑量達到20 mg·kg-1時，其體內血清尿素氮含量顯著下降[13]。小鼠的運動能力，將隨著羊肚菌多糖劑量的增加得到明顯增強，不僅有效提高小鼠運動后疲勞的有效恢復，同時也使得恢復速度得到提高。因此，試驗結果表明，灌胃羊肚菌多糖的小鼠抗疲勞能力得到了有效增強。

4 結論

試驗中，經過灌胃羊肚菌多糖的小鼠其運動能力以及抗疲勞能力得到有效增強，根據研究結果顯示小鼠的各項生理生化指標都得到了提高。隨著灌胃劑量的增加，小鼠在參與負重游泳時的游泳時間得到了顯著延長，小鼠的耐缺氧時間也得到了顯著的提高。除此之外，經過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其體內血乳酸以及血清尿素含量都出現了顯著下降的特征，小鼠體內的肝糖原含量則得到了顯著增加。因此，試驗結果表明，羊肚菌多糖能夠有效增強小鼠運動能力，提高運動后疲勞恢復效果，并有效增強小鼠的抗疲勞性。