川黃連對大鼠化學灼燒型口腔潰瘍的抗炎作用觀察

李簡 蘇雪蓮 楊華飛

摘要：目的 ?探究川黃連對大鼠化學灼燒型口腔潰瘍的抗炎作用機理。方法 ?利用化學灼燒的方法，在30只SD大鼠的舌背部制造口腔潰瘍模型，按照隨機抽樣分為實驗組和對照組，每組15只。實驗組使用川黃連粉末直接覆蓋于潰瘍表面，對照組不進行處理，造模后48 h、第3天，比較兩組大鼠水腫面積變化率、口腔潰瘍組織學分級，分別以肉眼和切片比較兩組大鼠由于化學燒灼而導致的粘膜水腫恢復情況。結果 ?①造模后48 h可見大鼠舌腹粘膜發生炎性水腫反應，水腫部位粘膜泛白，表面多個小水泡，凹凸不平，稍隆起，內含清亮液體，邊緣清晰，也可由多個小水泡融合而形成的邊緣不規則的較大水泡;造模后第3天，實驗組粘膜水腫基本消退，個別水腫未完全消失但也基本局限與潰瘍附近;對照組粘膜水腫也有消退，但水腫面積與實驗組有所差別。②造模后48 h粘膜水腫形成面積達到最大值，隨后逐漸縮小;造模后第3天，實驗組水腫面積變化率為（0.873±0.020）%，高于對照組的（0.714±0.064）%，差異有統計學意義（P<0.05）。③實驗組口腔潰瘍組織學分級中Ⅰ、Ⅱ及大鼠少于對照組，Ⅲ、Ⅳ級多于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;HE染色顯示，實驗組炎細胞浸潤程度較低，細胞形態多完整，組織水腫程度低，壞死組織少，部分切片可見肉芽組織充填于潰瘍創面;對照組炎細胞浸潤程度高，可見部分炎細胞破裂死亡，壞死組織少，鮮見肉芽組織長入潰瘍創面。結論 ?川黃連對化學灼燒型口腔潰瘍引起的炎癥性水腫有促進消退的作用，同時可以降低潰瘍組織內炎細胞的浸潤。對化學刺激性潰瘍有抗感染，抗炎癥的作用。

關鍵詞：口腔潰瘍;黃連;化學灼燒;大鼠

中圖分類號：R781.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.11.019

文章編號：1006-1959（2020）11-0061-03

Abstract：Objective ?To explore the anti-inflammatory mechanism of Chuanhuanglian on chemically burned oral ulcer in rats.Methods ?Using chemical burning method， an oral ulcer model was created on the back of the tongue of 30 SD rats， which were divided into an experimental group and a control group according to random sampling， with 15 rats in each group. The experimental group used Chuanhuanglian powder to directly cover the surface of the ulcer， and the control group did not process it. At 48 h and 3 d after the model， the rate of change in edema area and the histological grade of oral ulcer were compared between the two groups. Recovery of mucosal edema caused by chemical burning in two groups of rats. Results ?①At 48 h after modeling， an inflammatory edema reaction occurred in the mucous membrane of the tongue and abdomen of the rat. The mucosa of the edema site was whitened， with multiple small blisters on the surface， uneven， slightly raised， containing clear liquid， clear edges， and can also be fused by multiple small blisters the large blisters with irregular edges formed; on the third day after modeling，the mucosal edema in the experimental group basically subsided， and some individual edema did not completely disappear but was basically limited to the vicinity of the ulcer; the mucosal edema in the control group also subsided， but the edema area was different from the experimental group. ②The area of formation of mucosal edema reached the maximum at 48 h after modeling， and then gradually reduced; on the third day after modeling， the rate of change of edema area in the experimental group was （0.873±0.020）%， higher than that of the control group （0.714±0.064）% ，the difference was statistically significant （P<0.05）. ③The histological grade of oral ulcers in the experimental group was less than that of the control group Ⅰ， Ⅱ and rats， and the grades Ⅲ and Ⅳ were more than the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）; HE staining showed that the degree of inflammatory cell infiltration in the experimental group was low， more complete cell morphology， low degree of tissue edema， less necrotic tissue， granulation tissue filled in ulcer wounds in some sections; high degree of infiltration of inflammatory cells in the control group， partial inflammatory cell rupture and death， few necrotic tissues， rarely seen granulation tissue growth into the ulcer wound.Conclusion ?Chuanhuanglian can promote the resolution of inflammatory edema caused by chemical burn oral ulcer， and can reduce the infiltration of inflammatory cells in ulcer tissue. It has anti-infection and anti-inflammatory effects on chemically stimulated ulcers.

Key words：Oral ulcer;Coptis rhizoma;Chemical burn;Rat

口腔潰瘍（canker ulcer）又稱為阿弗他潰瘍，是口腔科最常見的一種黏膜疾病，患者常有明顯的疼痛感，嚴重時可影響其生活質量，目前尚缺乏有效的根治方法。一般可通過局部涂抹外用藥物，改善疼痛狀態，促進愈合的方式進行治療。黃連（coptidis rhizoma）含有小檗堿、黃連堿、表小檗堿、甲基黃連堿、巴馬汀、小柴紅堿及藥根堿等多種生物堿[1];具有消炎抗菌，促進潰瘍愈合等多種功效[2]。本實驗擬通過建立SD大鼠口腔潰瘍模型研究川黃連是否具有抗炎及促進潰瘍愈合的作用，并探討其作用機制，旨在為臨床應用黃連治療口腔潰瘍提供實驗依據，報道如下。

1材料與方法

1.1實驗動物 ?選取6～8周齡SD雄鼠，體重300 g左右，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，生產許可證SCXK（湘）2019-0004，飼養環境溫度為22～25℃，相對濕度40%～70%，12 h光照循環;動物自由飲水、進食。

1.2實驗藥品 ?川黃連（購于四川省洪雅縣瓦屋山黃連種植基地，為當地野生黃連取根莖部位進過消毒后直接研磨）、75%酒精（湖南科倫）、冰醋酸（天津市風帆化學）、2500 ml蘇木素-伊紅染色液（Wexis）、100 g中性樹膠（中國上海標本模型廠）、塑AR2500 ml無水乙醇（湖南匯虹）、AR500 ml二甲苯（湖南匯虹）。

1.3實驗器材 ?10 cm解剖剪（上海金鐘）、10 cm解剖鑷（上海金鐘）、4號半針、1 ml一次性注射器（湘江）、10 cm玻璃滴管（華鷗）、JK-6生物組織攤烤片機（武漢俊杰電子有限公司）、DM2000 LED顯微鏡（萊卡）、62022100蓋玻片（Wexis）、188105載玻片（億洲）。

1.4方法

1.4.1模型構建 ?30只SD大鼠實驗室適應性喂養1周，使用生理鹽水配制60%冰醋酸，避光室溫保存備用。按照每100 g體重腹腔注射0.4 ml的10%水合氯醛劑量麻醉大鼠，造模部位選取大鼠舌腹進行造模，先行生理鹽水清洗2～3次，吹干后采用同一口徑的玻璃平口膠頭滴管吸取60%冰醋酸，將液面稍突出膠頭滴管口，使其平穩放置在大鼠腹部粘膜處，確定口腔潰瘍的形成面與膠頭滴管口一致，放置燒灼60 s，取開后立即用大量生理鹽水沖洗。實驗組大鼠處理：在燒灼部位涂抹經過研磨的黃連粉末60 s后用生理鹽水沖洗，連續使用3 d。造模后第3天依照上述方法麻醉大鼠，觀察各組大鼠口腔潰瘍形成情況，拍照記錄。對兩組大鼠實行安樂死，拍照后取舌放入福爾馬林固定。

1.4.2切片染色 ?取大鼠燒灼部位組織進行切片染色，脫蠟：70 ℃烤片30 min，二甲苯（Ⅰ）中脫蠟10 min;二甲苯（Ⅱ）中脫蠟10 min，100%乙醇（Ⅰ）中5 min洗去二甲苯，100%乙醇（Ⅱ）中5 min洗去二甲苯。水化：95%乙醇中水化5 min，85%乙醇中水化5 min，75%乙醇中水化5 min，蒸餾水中水化待用。染色：蘇木素染色3 min，流水沖洗2 min，1%鹽酸酒精分化2 s，流水沖洗切片15 min，蒸餾水過洗1～2 s，伊紅染色30 s。分化：根據顏色深淺用80%的乙醇分化，85%乙醇脫水5 min，95%乙醇脫水5 min，無水乙醇脫水10 min，無水乙醇繼續脫水10 min。透明：二甲苯（Ⅰ）透明10 min;二甲苯（Ⅱ）再次透明10 min。封片：在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。鏡檢：顯微鏡下觀察拍照。

1.5觀察指標 ?比較兩組大鼠水腫面積變化率、燒灼部位組織學分級，分別以肉眼和切片比較兩組大鼠由于化學燒灼而導致的粘膜水腫恢復情況。水腫面積變化率：根據潰瘍面積變化率=（初始潰瘍面積-現潰瘍面積）/初始潰瘍面積×100%[3]可以推得水腫面積變化率=（初始水腫面積-現水腫面積）/初始水腫面積×100%。按照公式可以推出：水腫面積變化率=（1-現水腫面積所占舌腹面積比例/初始水腫面積所占舌腹面積比例）。水腫面積所占舌腹面積比例的測量方法按照填補法進行，將刻有寬度為3 mm網格線的透明玻璃板輕壓至大鼠舌腹部（注意保護舌系帶），數出水腫面積所占格數占舌腹總面積格數即可較為準確的故算出水腫面積占舌腹總面積的百分比。組織學分級：在光學顯微鏡下觀察大鼠舌腹部口腔黏膜結構，口腔潰瘍組織學分級標準參考文獻[4]進行，正常為0 分，Ⅰ級為1～3分，Ⅱ級為4～6分，Ⅲ級為7～9分，Ⅳ級為10～12 分，見表1。

1.6統計學方法 ?采用SPSS 19.0軟件處理數據，計量資料采用（x±s）表示，比較行雙樣本t檢驗;計數資料采用（n）表示，比較行非參數檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組大鼠舌腹部水腫情況 ?造模48 h后可見冰醋酸對大鼠舌腹粘膜的刺激，舌腹粘膜發生炎性水腫反應，水腫部位表現為粘膜泛白，由多個小水泡起所組成的表面凹凸不平的不規則形態，稍隆起，內含清亮液體，邊緣與正常粘膜組織分界較清晰，也可由多個小水泡融合而形成的邊緣不規則的較大水泡。個體之間存在差異但均屬于炎性水腫的病理范疇。用藥3 d后，實驗組大鼠粘膜水腫基本消退，個別水腫未完全消失但也基本局限與潰瘍附近。對照組粘膜水腫也有消退，但水腫面積依然與實驗組有一定差距，見圖1。

2.2兩組大鼠舌腹水腫面積變化趨勢比較 ?建模48 h后，兩組粘膜水腫形成面積達到最大值，隨后逐漸縮小。用藥3 d后，實驗組黏膜水腫基本完全消退，對照組尚未完全消退。實驗組水腫變化率為（0.873±0.020）%，高于對照組的（0.714±0.064）%，差異有統計學意義（P<0.05）。