17 580例肺部疾病患者血清ANA、ANCA檢測結果分析及臨床價值研究*

漆 星,張君龍,楊 濱,牛 倩,黃卓春△

(1.四川大學華西醫院實驗醫學科，四川成都 610041；2.四川大學華西醫院資陽醫院/資陽市第一人民醫院檢驗科，四川資陽 641300)

部分自身免疫性疾病患者早期以干咳、胸悶、活動后氣短、呼吸困難、發紺等為首發癥狀[1]，該類患者極易誤診為肺部感染、慢性阻塞性肺疾病、胸膜炎或特發性肺間質纖維化等，導致延誤最佳治療時機。選擇靈敏度及特異度高的檢測指標，對該類早期癥狀不典型的患者而言，具有重要意義。本研究以四川大學華西醫院呼吸科收治的首發癥狀為呼吸困難，反復咳嗽、咳痰或有其他呼吸受限癥狀的17 580例肺部疾病患者為研究對象，探討抗核抗體(ANA)、抗中性粒細胞胞質抗體(ANCA)在該類患者中的陽性率分布情況，為ANA、ANCA在自身免疫性疾病臨床早期診斷中的運用提供參考依據，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2016年1月至2017年12月就診于四川大學華西醫院呼吸科，以呼吸困難、反復咳嗽、咳痰或其他以呼吸受限癥狀為首發癥狀的17 580例患者的臨床資料，其中男9 483例，女8 097 例；年齡 2～104歲，平均(56.3±16.9)歲。所有患者中，有10 687例進行了ANA檢測，6 893例進行了ANCA檢測。納入標準：(1)以呼吸受限癥狀為首發癥狀的患者，且符合獲得性肺炎診斷標準[2]；(2)經高分辨率CT或病理活檢確診為間質性肺炎或肺纖維化的患者[3]；(3)至少有一次初診時進行了ANA或ANCA檢測的患者。排除標準：(1)既往已確診自身免疫性疾病的患者；(2)臨床資料不完整患者。

1.2儀器與試劑 德國歐蒙公司Sprinter XL全自動間接免疫熒光系統，EUROPattern全自動免疫熒光核型及滴度判讀系統，德國歐蒙公司ANA、ANCA抗體檢測試劑盒(間接免疫熒光法)。

1.3檢測方法 研究對象采集晨起空腹靜脈血4 mL，3 000 r/min 離心15 min，分離血清后按照德國歐蒙公司ANA、ANCA抗體檢測試劑盒(間接免疫熒光法)說明書操作步驟進行檢測。ANA檢測步驟：將待測血清標本以1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200、1∶10 000的比例進行稀釋，然后分別滴加25 μL稀釋后的血清至加樣板的反應區中，室溫溫育30 min后置于PBS洗液缸浸泡5 min，流水沖洗載片，加入20 μL熒光素標記的抗人球蛋白，置于反應區室溫(18～25 ℃)反應30 min后，再次置于PBS洗液缸浸泡5 min，用吸水紙吸干水分，封片，熒光顯微鏡下讀片。ANCA檢測步驟：加入1∶10稀釋的待檢血清標本、陰性和陽性血清對照標本各25 μL到反應區，置于室溫溫育30 min后置于PBS洗液缸浸泡5 min，在每個反應區加入熒光素標記的抗人球蛋白20 μL，室溫反應30 min后再次置于PBS洗液缸浸泡5 min，用吸水紙吸干水分，封片，熒光顯微鏡下讀片。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0軟件進行數據分析。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同性別患者ANA陽性分布情況 在進行ANA檢測的患者中，男5 761例，女4 926例，檢出ANA陽性3 726例，陽性率為34.86%(3 726/10 687)。其中男性患者陽性率為28.83%(1 661/5 761)，女性患者陽性率為41.92%(2 065/4 926)，女性患者的ANA陽性率明顯高于男性，差異有統計學意義(χ2=166.846，P<0.05)。ANA陽性患者滴度為1∶10 000的占0.69%(74/10 687)，1∶3 200的占2.16%(231/10 687)，1∶1 000的占5.27%(563/10 687)，1∶320的占6.99%(747/10 687)，1∶100占19.75%(2 111/10 687)。ANA陽性患者中，滴度為1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320的女性患者所占比例均高于男性，差異有統計學意義(P<0.05)；ANA滴度為1∶100的男、女性患者所占比例比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2ANA陽性不同滴度患者主要核型分布情況 在3 726例ANA陽性患者中，各滴度單一核型以斑點型為主，各滴度(1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320、1∶100)所占比例分別為55.41%、30.74%、18.47%、16.87%、30.46%。混合核型以斑點型+胞質型為主，各滴度(1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320、1∶100)所占比例分別為9.46%、14.29%、12.43%、13.79%、18.33%。見表2。

表1 不同性別ANA陽性患者不同滴度所占比例比較[n(%)]

滴度n斑點型+高爾基體型胞質型+核膜型斑點型+均質型+核仁型斑點型+紡綞體型均質型+胞質型著絲點型+胞質型斑點型+核仁型其他核型1∶10 000743(4.05)0(0.00)0(0.00)2(2.70)2(2.70)2(2.70)0(0.00)4(5.41)1∶3 2002310(0.00)23(9.96)14(6.06)3(1.30)8(3.46)7(3.03)4(1.73)15(6.49)1∶1 0005635(0.89)8(1.42)3(0.53)5(0.89)27(4.80)20(3.55)15(2.66)84(14.92)1∶3207472(0.27)5(0.67)3(0.40)14(1.87)22(2.95)6(0.80)18(2.41)141(18.88)1∶1002 11110(0.47)9(0.43)4(0.19)24(1.14)56(2.65)3(0.14)68(3.22)226(10.71)

注：其他核型為例數較少的核型之和，未分別列出。

2.3不同性別患者ANCA陽性分布情況 在進行ANCA檢測的患者中，男3 722例，女3 171例，檢出ANCA陽性200例，陽性率為2.90%。其中男性患者陽性率為2.98%(111/3 722)，女性患者陽性率2.81%(89/3 171)，男、女ANCA陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.208，P>0.05)。核周型(p-ANCA)陽性率為1.94%(134/6 893)，其主要靶抗原髓過氧化物酶(MPO)的陽性率為76.12%；胞漿型(c-ANCA)陽性率為0.52%(36/6 893)，其主要靶抗原蛋白酶3(PR3)的陽性率為38.38%；非典型型(a-ANCA)陽性率為0.44%(30/6 893)。ANCA陽性患者中，男、女不同ANCA分型所占比例比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同性別ANCA陽性患者分型情況比較[n(%)]

3 討 論

約15%的自身免疫性疾病患者合并有肺部病變，常見的病變類型包括細支氣管炎、支氣管擴張、肺動脈高壓、間質性肺病等，其中間質性肺病是最嚴重的類型，具有較高的病死率[4-5]。常見的易合并間質性肺病的自身免疫性疾病包括系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、硬皮病、多發性肌炎等[6-7]。該類疾病的部分患者早期表現為肺部炎癥，病變可從急性演變為慢性，肺間質逐漸纖維化，嚴重者肺實質結構破壞，易反復發生肺部感染，最終因肺部感染或呼吸衰竭而死亡，嚴重影響患者預后[8]。隨著對自身免疫性疾病伴發間質性肺病認識的逐漸加深，臨床上對于肺部疾病患者是否伴有自身免疫相關抗體陽性日益重視。但目前關于肺部疾病患者ANA及ANCA檢測的相關研究較少，缺乏基于臨床的大數據研究，故本研究以四川大學華西醫院呼吸科肺部疾病患者17 580例為研究對象進行了相關臨床分析。相關文獻報道，肺部疾病患者ANA陽性率高于健康受試者[9]。ANA陽性患者發生自身免疫性疾病的可能性大，且相關研究認為自身抗體滴度越高，患自身免疫性疾病的可能性越大[10]。部分研究還發現，自身抗體的出現遠早于臨床癥狀的出現和發病，自身抗體陽性是自身免疫性疾病的預測因子[11-12]。本研究17 580例患者中，有10 687例患者進行了ANA檢測，陽性率為34.86%，6 893例患者進行了ANCA檢測，陽性率為2.90%。該結果提示肺部疾病患者ANA、ANCA的陽性率較高，該部分陽性患者存在患自身免疫性疾病的風險。進一步對不同性別患者的ANA陽性率進行比較發現，男性患者ANA陽性率為28.83%，明顯低于女性患者的41.92%(χ2=166.846，P<0.05)，與李晞等[13]的研究結果一致。本研究ANA陽性患者中，女性患者ANA滴度為1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320的例數所占比例均高于男性，差異有統計學意義(P<0.05)。提示女性患自身免疫性疾病的風險高于男性，考慮男女ANA陽性率存在差異的原因可能與女性體內的雌激素相關，雌激素與其受體ERα結合具有調節T細胞激活、增殖和生存等功能，在自身免疫性疾病的發生、發展過程中發揮重要作用[14]。

在ANA陽性患者中，熒光核型種類較多。本研究中，各滴度單一核型以斑點型為主，滴度1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320、1∶100所占比例分別為55.41%、30.74%、18.47%、16.87%、30.46%。混合核型以斑點型+胞質型為主，滴度1∶10 000、1∶3 200、1∶1 000、1∶320、1∶100所占比例分別為9.46%、14.29%、12.43%、13.79%、18.33%。提示ANA陽性患者不同滴度熒光核型分布存在差異。ANA熒光核型的分析對于自身免疫性疾病的診斷具有一定的提示意義[15]。有研究顯示，系統性紅斑狼瘡和類風濕關節炎患者中，單一核型以斑點型、均質型為主,混合核型以斑點型+均質型為主；干燥綜合征患者以斑點型和均質型為主要核型。熒光核型對自身免疫性疾病的臨床診斷具有一定價值，但因同種抗體也可在細胞中產生不同的熒光核型,故不能作為唯一診斷指標[16]。臨床醫生除了應重視自身抗體在肺部疾病中的應用外，還需結合診斷標準中的其他臨床癥狀，以及其他實驗室指標來支持自身免疫性疾病的早期診斷，以避免低滴度核型所帶來的診斷困難。相對于高分辨率CT、肺組織病理活檢、肺功能檢查等，血清ANA檢測具有操作簡單、特異度高、結果容易判讀等優點，更適用于自身免疫性疾病伴發間質性肺病的篩查[17]。

ANCA是一組針對中性粒細胞和單核細胞質成分的自身抗體[18]。本研究中，男性患者ANCA陽性率與女性患者比較，差異無統計學意義(P>0.05)，且男女不同ANCA分型患者所占比例比較，差異也均無統計學意義(P>0.05)，提示肺部疾病患者ANCA陽性率與性別無明顯關系，與高琦等[19]的研究結果一致。本研究結果顯示，p-ANCA陽性率為1.94%，其主要靶抗原MPO的陽性率為76.12%；c-ANCA陽性率為0.52%，其主要靶抗原PR3的陽性率為38.38%，與丁艷芩等[20]的研究結果類似。ANCA是ANCA相關性血管炎的特異性抗體，ANCA通過與MPO和PR3等結合，產生相應的抗原抗體復合物，進而促進炎癥的活化，造成機體小血管及毛細血管纖維樣病變，導致管腔狹窄、閉塞，可累及肺和腎臟等器官[21-22]。ANCA相關疾病由于存在多組織、多器官損傷，臨床表現復雜多樣，常常要與ANA和ANA譜進行聯合檢測來提高診斷的特異度。

4 結 論

肺部疾病患者ANA、ANCA陽性率較高，其中女性患者ANA陽性率高于男性，而男、女ANCA陽性率差異無統計學意義。ANA各滴度單一核型以斑點型為主，混合核型以斑點型+胞質型為主。對肺部疾病患者篩查ANA及ANCA有利于早期診斷自身免疫性疾病，避免漏診和誤診。