酒精性肝病患者血清LP、LPO、NOS水平和腸道菌群分布變化分析*

栗紅江，何福亮，陳來印

酒精性肝病 (alcoholic liver disease，ALD)病因明確，為長期大量飲酒導致的肝損傷。ALD初期僅表現為輕度酒精性脂肪肝(AFL)，可逐漸發展為酒精性肝炎(alcoholic hepatitis，AH)、酒精性肝硬化(alcoholic liver cirrhosis，ALC)，甚至肝功能衰竭，但目前其發病機制尚未明確[1, 2]。因此，探討 ALD 發生發展過程中患者血清學指標改變及相關的病理生理學變化對于早期診治、防止病情惡化等具有重要的臨床意義。酒精不僅會在肝臟代謝過程中誘發氧化應激反應，損傷肝細胞，還會對腸粘膜產生刺激作用，進而打破腸道微生態平衡[3, 4]。本研究檢測了不同類型ALD患者和健康人血清脂肪酶(lipase，LP)、過氧化脂質(lipid peroxide，LPO)、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase ，NOS)水平和腸道菌群分布的變化，旨在為臨床診斷和治療提供依據，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2017年1月～2019年6月我院肝病科收治的ALD患者88例，男83例，女5例；年齡35～68歲，平均年齡為(49.1±5.2)歲。診斷符合酒精性肝病防治指南(2018 年更新版)[5]，其中AFL患者 36例， AH患者 27 例，ALC患者 25 例(Child-Pugh A 級8例，B 級 11 例， C 級6例)。排除標準：①非酒精性脂肪性肝病；②伴有心、腦、腎等重要器官功能異常、精神疾病或伴嚴重的內分泌或遺傳代謝性疾病；③伴有乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或人類免疫缺陷病毒感染；④造血系統功能障礙；⑤自身免疫性肝病、藥物性肝損傷、肝外梗阻性黃疸或肝臟原發或轉移性惡性腫瘤或嚴重的肝功能衰竭；⑥孕婦或哺乳期婦女；⑦接受過肝移植；⑧入組前8周內應用過免疫功能調節劑、抗生素、皮質激素、微生態制劑或應用過肝損害性藥物。另選擇同期健康體檢者40例作為對照組，男37例，女3例；年齡34～67歲，平均年齡為(48.2±3.5)歲。所有研究對象簽署知情同意書，本研究經我院醫學倫理委員會批準并全程監管。

1.2 檢測方法 采用比濁微板法檢測血清LP水平(青島捷世康生物科技有限公司)；采用ELISA法檢測血清LPO水平(南京信帆生物技術有限公司)；采用熒光法檢測血清NOS水平(上海雅吉生物科技有限公司)；采用麥康凱瓊脂板、MERCK 腸球菌培養基和BS 培養基 250行糞便細菌培養(上海信裕生物技術有限公司)；采用快速微生物檢測系統(CelsisRAdvance IITM，湛江安度斯生物有限公司)行細菌鑒定，以菌落形成單位的對數值(lg CFU/g)表示檢測結果。

2 結果

2.1 四組人群血清LP、LPO和NOS水平比較 AFL組、AH組和ALC組患者血清LP、LPO和NOS水平均顯著高于健康人，差異有統計學意義(P<0.05)，而ALC組血清LP、LPO和NOS水平顯著高于AFL組和AH組，AH組顯著高于AFL組(P<0.05，表1)。

2.2 四組人群腸道菌種數量和主要腸道菌群數比較 AFL組糞雙歧桿菌數顯著低于健康人(P<0.05)；AH組和ALC組糞菌種數量和雙歧桿菌數顯著低于健康人(P<0.05)，而糞大腸埃希菌數和糞腸球菌數顯著高于健康人(P<0.05)，即隨著肝臟損害程度的加重，腸道菌種和雙歧桿菌數逐漸下降，而大腸埃希菌和糞腸球菌數逐漸增多(P<0.05，表2)。

表1 四組血清LP、LPO和NOS水平比較

與健康人比，①P<0.05；與AFL組比，②P<0.05；與AH組比，③P<0.05

表2 四組腸道菌種數和主要腸道菌群數比較

與健康人比，①P<0.05；與AFL組比，②P<0.05；與AH組比，③P<0.05

3 討論

ALD是一種有過度飲酒造成的慢性進行性肝臟疾病。隨著國內人均收入水平的提高，生活方式、飲食結構和習慣等均出現重大改變，ALT的發病率逐年上升[6, 7]。雖然單一致病因素為長期大量攝入乙醇，但是其發生發展與各種發病因素相互作用，乙醇代謝紊亂、氧化應激、內毒素、腸道菌群失調和基礎疾病等均在ALD的發生發展中發揮著至關重要的作用[8, 9]。現有關于ALD的研究多集中于如何提高其臨床治療效果方面，關于ALD患者血清相關指標及腸道菌群變化的系統性分析報道還需要加強。

本研究結果顯示，AFL組、AH組和ALC組患者血清LP、LPO和NOS水平均顯著高于健康人，且ALC組血清LP、LPO和NOS水平顯著高于AFL組和AH組，AH組顯著高于AFL組，說明隨著病情的加重，患者血清LP、LPO和NOS水平逐漸升高。考慮原因為，長期大量酒精攝入大大增加了機體活性氧的產生，導致自由基產生過多，但抗氧化物質被大量消耗，激活了脂質和蛋白質的過氧化反應，促發氧化應激反應[10, 11]。該反應所產生的多種生物活性物質可促進炎癥產生、影響線粒體功能，進而誘導肝細胞病變。其中，內毒素的主要毒性成分LP是誘導細胞損傷和凋亡的重要物質，其水平升高可能與酒精濃度升高導致腸道通透性增高有關[12]。研究指出，LP可通過血液循環進入肝臟，引起局部慢性炎癥[13]。LPO則可有效反映脂質過氧化程度。在正常生理情況下，LPO水平極低，但ALD患者由于自由基產生過多，導致線粒體內脂質過氧化而破壞不飽和脂肪酸，使得LPO產生增加，易損傷細胞及細胞膜的結構和功能，進而導致線粒體膜流動性下降，通透性增強[14]。此外，酒精的攝入還可激活誘導型NOS，并使其大量表達，后者催化左旋精氨酸產生大量的 NO自由基，極易與O2作用產生具有明顯細胞毒性的活性產物，改變肝細胞膜通透性，造成肝細胞不可逆的損傷[15]。

本研究還發現，AFL組糞雙歧桿菌數顯著低于健康人，AH組和ALC組菌種數和雙歧桿菌數顯著低于健康人，而大腸埃希菌數和糞腸球菌數顯著高于健康人。隨著肝臟損害程度的加重，腸道菌種和雙歧桿菌數逐漸下降，大腸埃希菌和糞腸球菌逐漸增多。ALD與健康人群腸道菌群分布差異較大[16-19]。分析原因為長期大量飲酒后，破壞了腸道粘膜的完整性，高濃度酒精可刺激腸道上皮，其代謝產物乙醛亦可影響腸道上皮滲透活性，改變了腸粘膜的正常結構，再加上短鏈脂肪酸等有機酸的產生導致腸道酸性化，使其正常定植的細菌開始發生移位，而大腸埃希菌和糞腸球菌等革蘭陰性菌得以大量繁殖和生長，抑制了雙歧桿菌等益生菌的活性，部分弱勢菌種的生存環境亦受到限制而導致腸道菌種和雙歧桿菌數逐漸下降，腸道菌群出現失調，且隨著病情的加重，腸道內環境變化更明顯[20-22]。此外，腸道菌群失調后，可導致內毒素和多肽等腸源性產物水平大量增加，后者激活肝臟及其他器官的吞噬細胞，引起炎癥反應，刺激肝細胞氧化應激的產生[23-25]，導致血清LP、LPO和NOS水平變化，使病情進一步惡化。因此，對于早期 ALD患者，應重視腸道菌群的調整，戒酒，適當補充益生菌，這些綜合措施的應用可能有助于控制ALD病情發展成為AH或ALC。

綜上所述，ALD患者存在血清LP、LPO和NOS水平增高和腸道微生態失調。隨著病情加重或進展成為AH或ALC，這些變化程度更明顯。血清LP、LPO和NOS水平與腸道菌群的變化存在某種因果關系，需要進一步明確。在臨床診療活動中，醫師應當對以上變化加以重視，并給予積極的干預措施。ALD存在較為廣泛的疾病譜，每種實體的診斷還缺乏特異性的手段，可能造成了選擇偏倚。選擇非侵入性的診斷手段需要組織病理學診斷的證實，這些均需在以后的研究中加以重視。