基于DPPH清除法測定紅藍(lán)草多糖的抗氧化能力

謝宇奇 奚文權(quán)

摘 ?要：以紅藍(lán)草為原料，提取多糖并對其抗氧化性進(jìn)行研究。采用酶提法聯(lián)合溶劑提取法，提取紅藍(lán)草粗多糖，經(jīng)Sevage法脫蛋白后，測定紅藍(lán)草多糖的含量，并研究其對有機(jī)自由基DPPH的清除效果。結(jié)果顯示，紅藍(lán)草多糖對有機(jī)自由基DPPH的IC50為121.50mg/L。

關(guān)鍵詞：紅藍(lán)草;多糖;DPPH清除法;抗氧化性

1引 言

多糖是由多個單糖通過特定的化學(xué)鍵連接而成的，具有廣泛生物活性的天然大分子化合物。多糖廣泛存在于植物、動物和微生物體內(nèi)，具有降血糖、抗氧化、提高免疫力等多種生物活性[1]。紅藍(lán)草（Peristrophe baphica（Spreng）Bremek）又稱紅絲線、山藍(lán)，具有清肺止咳，涼血止血的功效[2]。目前對紅藍(lán)草的揮發(fā)油、黃酮類、萜類等成分的研究較多[3-5]，而多糖的研究鮮見報道。本實(shí)驗采用DPPH清除法，對紅藍(lán)草多糖的抗氧化性能進(jìn)行研究，為綜合開發(fā)紅藍(lán)草資源提供實(shí)驗數(shù)據(jù)參考。

2 ?實(shí)驗材料與方

2.1 實(shí)驗材料

2.1.1供試材料 ?紅藍(lán)草（購買于廣西百色市菜市場），烘干、粉碎并過80目。

2.1.2主要儀器與試劑

UV-2700紫外可見分光光度計（日本島津公司），BS110S電子分析天平（北京賽多利斯電子天平有限公司）。鄰苯三酚、鄰二氮菲、氯仿、正丁醇等均為國產(chǎn)分析純。

2.2 實(shí)驗方法

2.2.1 紅藍(lán)草多糖的提取和純化

使用酶提法與溶劑提取法相結(jié)合提取紅藍(lán)草多糖。參考文獻(xiàn)做法[6]。在脫色多糖粗品溶液中依次加入一定體積的氯仿和正丁醇，震蕩混勻，離心分離，經(jīng)分液漏斗分離，重復(fù)操作3～4次，得到除去蛋白質(zhì)的多糖溶液。將其濃縮、烘干后得到多糖樣品。

2.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)定紅藍(lán)草多糖的質(zhì)量濃度

配制系列葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，并測定490 nm 處吸光度 A 值，得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線算出多糖的含量及提取率。樣品含量的計算公式如下：

曲線回歸方程計算濃度（C）=（A490+0.0264）/0.0132

多糖提取率=（C×v/2）/W×1 000

2.2.3紅藍(lán)草多糖對有機(jī)自由基DPPH的清除測定步驟

首先在10 mL 比色管中分別加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和1.0 mL 95 %乙醇，混勻，參比對象為95 %乙醇液，測出517 nm處A0的吸光值。分別將不同體積的待測樣液與體積為4.0 m L，濃度為257.7 mg/L的 DPPH 溶液的溶劑（95 %的乙醇溶液）按順序倒到量程為10 mL的比色管中，混勻，參比對象為95 %乙醇液，測出517 nm處Ar的吸光值。最后在10 mL 比色管中依次加入4.0 m L 257.7 mg/L DPPH 溶液和不同體積紅藍(lán)草多糖樣品，待反應(yīng)結(jié)束，參比對象為95 %乙醇液，測出517 nm處As的吸光值。計算自由基清除率（Y）。

3結(jié)果與分析

3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)定紅藍(lán)草多糖的質(zhì)量濃度

選取490nm為測定波長。在此波長下，得到不同濃度所對應(yīng)的吸光度值，然后繪制得到A與c的線性關(guān)系圖，見圖1。經(jīng)過計算得：A=0.013 2 C+0.0264，相關(guān)系數(shù) R2=0.999 5，表明在選定的濃度內(nèi)，葡萄糖的吸光度與濃度顯現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。相同實(shí)驗條件下，測定紅藍(lán)草多糖的吸光值，用該曲線計算樣品中紅藍(lán)草多糖的濃度。

3.2紅藍(lán)草多糖對有機(jī)自由基DPPH的清除實(shí)驗結(jié)果

依照2.2.3的實(shí)驗步驟和公式，計算獲得Y%與參加反應(yīng)試樣液的濃度c，然后繪制得到它們的線性關(guān)系圖（如圖2）。通過計算得到：Y=0.4183c-0.8221，R2=0.9996。由此可以看出Y與c呈良好的線性關(guān)系。當(dāng)清除率 Y 取 50% 則其所對應(yīng)的 c 值就是 IC50，待測液對有機(jī)自由基DPPH清除水平的高低與IC50值成反比。

4 ?結(jié)論

考察紅藍(lán)草多糖提取物對DPPH自由基的清除效率，IC50 值為121.50mg/L。實(shí)驗結(jié)果表明，紅藍(lán)草多糖具有一定的抗氧化性。紅藍(lán)草具有一定的綜合開發(fā)利用價值，具有開發(fā)成功能保健食品、飲料的前景。

參考文獻(xiàn)

[1] ?秦樹森，劉笑甫，張可鋒. 紅絲線多糖對大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 華西藥學(xué)雜志，2010，25（05）：559-560.

[2] ?韋正，黃秀香，賴紅芳.紅藍(lán)草的化學(xué)成分、藥理活性及開發(fā)應(yīng)用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2016，28（12）：2035-2043.

[3] ?蔣紅芝，陸春何.分光光度法測定紅藍(lán)草中總黃酮的含量[J].廣西輕工業(yè)，2009（09）：18-20.

[4] ?謝運(yùn)昌，蔣小華，張冕.紅絲線揮發(fā)油的化學(xué)成分[J].廣西植物，2008（01）：136-138.

[5] ?葛利，藍(lán)柳鳳，暴惠賓，等.山藍(lán)化學(xué)成分的初步研究[J].廣西植物，2014，34（02）：155-159.

[6] ?郭雪峰，岳永德，湯鋒，等. 用清除有機(jī)自由基 DPPH 法評價竹葉提取物抗氧化能力 [J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2008，28（7）：1578-1582.

作者簡介：謝宇奇（1979-），男，廣西靖西人，碩士，高級實(shí)驗師，研究方向：天然有機(jī)化學(xué)和光譜分析。

基金項目：廣西高校中青年教師基礎(chǔ)能力提升項目（KY2016YB419）