炎癥性腸病患兒血漿25(OH)D、Hepc、Hb水平變化及意義

楊會云，吳成，龍云，夏先明

1安徽省兒童醫(yī)院，合肥 230000；2安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院

炎癥性腸病(IBD)是不明原因的慢性非特異性胃腸道炎性病變，可分為潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)兩種。兒童IBD多見于4～16歲，主要表現(xiàn)為反復(fù)、遷延難愈的腹痛、腹瀉，還可有生長發(fā)育落后、體質(zhì)量減輕等腸外癥狀，且有較高的結(jié)腸切除風(fēng)險[1]。目前IBD的治療包括藥物治療、手術(shù)治療及營養(yǎng)治療等方案，但由于IBD患兒病情具有個體化及變化快的特點，可發(fā)生穿孔、感染、出血及腸梗阻等并發(fā)癥[2]。因此深入研究IBD的病因及發(fā)病機制，尋找早期診斷及評估IBD患兒病情程度的血漿標志物有重要意義[3]。研究表明，各種因素導(dǎo)致胃腸道黏膜屏障功能受損會促進對腸腔發(fā)生異常的固有免疫反應(yīng)，刺激樹突狀細胞并激活炎癥級聯(lián)反應(yīng)，從而導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，25-羥維生素D[25(OH)VitD]能通過直接或間接影響T淋巴細胞、樹突狀細胞來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，避免過度的免疫反應(yīng)發(fā)生，發(fā)揮保護胃腸道黏膜的功能[5]。血紅蛋白(Hb)可作為反映IBD患兒貧血程度及病情的指標[6]。鐵調(diào)素(Hepc)是一種主要由肝細胞分泌入血的抗菌蛋白，具有調(diào)節(jié)免疫及調(diào)節(jié)鐵代謝的作用。本研究通過檢測IBD患兒血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平及指標間的相關(guān)性，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年2月～2019年2月安徽省兒童醫(yī)院診治的187例IBD患兒臨床資料。納入標準:①年齡1～13歲；②均接受胃腸道造影檢查確診；③參考中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)會消化學(xué)組兒童炎癥性腸病協(xié)作組制定的《兒童炎癥性腸病診斷規(guī)范共識意見》中IBD診斷標準進行診斷[7]。排除標準：①既往無白血病、地中海貧血等血液系統(tǒng)疾病；②排除腸道細菌性感染、病毒性感染、腸道結(jié)核及腸道寄生蟲等疾病；③患兒既往無非甾體消炎藥、激素類藥物治療史。IBD患兒中，UC 131例(UC組)，CD 56例(CD組)。UC組男61例、女70例，年齡3～16(6.4±2.5)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18.12～27.39(23.45±4.5)kg/m2；疾病活動性：活動期67例，緩解期64例；病變范圍：局限于直腸86例，左半結(jié)腸36例，全結(jié)腸9例；病程25～40(31.2±4.1)個月。CD組男31例、女25例，年齡2～15(6.1±2.3)歲；BMI 19.21～26.45(22.30±5.1)kg/m2；疾病活動性：活動期29例，緩解期27例；病變范圍：回腸末端22例，結(jié)腸9例，回結(jié)腸25例；病程26～41(32.7±4.5)個月。以40例健康兒童作為對照組，男27例、女13例，年齡2～15(6.1±2.3)歲；BMI 17.78～28.21(22.21±4.10)kg/m2。三組兒童性別、年齡及BMI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。本研究入選對象及家屬均簽署知情同意書，并通過本院倫理委員會批準。

1.2 血漿25(OH)VitD、Hepc及Hb檢測方法 采集IBD患兒入院后第1天、對照組健康查體時清晨空腹靜脈血約5 mL，取約3 mL靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，4 ℃下3 000 r/min離心10 min，取上清-80 ℃冰箱保存待測。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)雙抗體夾心法檢測血漿中25(OH)VitD、Hepc水平。實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行，試劑盒購自上海穎心有限公司。以標準品的濃度梯度為橫坐標，以酶標儀測定的各標準品的OD值為縱坐標，繪制標準曲線。將樣品以1∶20 000稀釋，酶標儀檢測樣品OD值，根據(jù)血清樣品的OD值，計算相應(yīng)的樣品濃度。取約2 mL靜脈血，應(yīng)用全自動五分類血球計數(shù)儀(美國雅培CELL-DYN3200)檢測外周血的Hb。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿中25(OH)VitD、Hepc、Hb水平比較 UC組與CD組血漿25(OH)VitD、Hepc及Hb水平比較,P均>0.05；UC組、CD組血漿25(OH)VitD、Hepc及Hb水平與對照組比較,P均<0.05。見表1。

表1 三組血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.2 IBD患兒血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平與患兒臨床特征的關(guān)系 UC組血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平與疾病活動性有關(guān)(P均<0.05)，與患兒性別、年齡、疾病類型、病變范圍無關(guān)(P均>0.05)。與緩解期UC患兒相比，活動期UC患兒血清25(OH)VitD、Hb降低，而Hepc升高(P均<0.05)。CD組血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平與疾病活動性有關(guān)(P均<0.05)，與患兒性別、年齡、疾病類型、病變范圍無關(guān)(P均>0.05)。與緩解期CD患兒相比，活動期CD患兒血清25(OH)VitD、Hb降低，而Hepc升高(P均<0.05)。見表2、3。

表2 UC組血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平與IBD患兒臨床特征的關(guān)系

表3 CD組血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平與IBD患兒臨床特征的關(guān)系

2.3 IBD患兒血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb間的相關(guān)性 UC組血漿25(OH)VitD水平與Hepc呈負相關(guān)(r=-0.634，P=0.000)，與Hb呈正相關(guān)(r=0.611，P=0.000)，而Hepc與Hb間無相關(guān)性(r=0.212，P=0.451)；CD組血漿25(OH)VitD水平與Hepc呈負相關(guān)(r=-0.620，P=0.000)，與Hb呈正相關(guān)(r=0.589，P=0.000)，而Hepc與Hb間無相關(guān)性(r=0.162，P=0.415)。

3 討論

UC是炎癥由直腸連續(xù)性向近端擴散至結(jié)腸，且多累及黏膜，而CD則以不連續(xù)的方式累及胃腸道任何部位，多累及黏膜更深的組織。20歲以下罹患IBD的患兒約占所有IBD病例的30%[8]。目前認為，IBD與遺傳易感因素、免疫因素及腸道微生物等因素有關(guān)，而兒童IBD的發(fā)生與遺傳因素密切相關(guān)[9]。胃腸道黏膜上皮是阻止細菌等進入循環(huán)的物理屏障，IBD時腸黏膜上皮損傷，腸免疫系統(tǒng)功能失調(diào)，腸道固有免疫細胞及適應(yīng)性免疫細胞大量浸潤，大量炎癥因子進入血循環(huán)。因此檢測血炎癥因子水平對于評估IBD患兒病情及預(yù)后有重要臨床意義[10]。

維生素D是脂溶性的，小腸吸收后進入靜脈血循環(huán)中，進而與維生素D結(jié)合蛋白(DBPs)結(jié)合轉(zhuǎn)運到肝臟，在肝25-羥化酶轉(zhuǎn)化為25(OH)VitD。25(OH)VitD沒有活性，但其是維生素D的主要循環(huán)形式，亦是維生素D狀態(tài)的最佳指標[11]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，維生素D在先天和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中均發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，免疫細胞如巨噬細胞和樹突狀細胞等能表達相應(yīng)受體和將25(OH)VitD轉(zhuǎn)化為1,25(OH)2D所需的羥化酶，局部產(chǎn)生的1,25(OH)2D可發(fā)揮特定的自分泌和旁分泌作用，發(fā)揮抑制局部炎癥反應(yīng)的作用，并且不會產(chǎn)生不必要的全身作用[12]。本研究中，UC組和CD組血漿25(OH)VitD水平低于對照組，其原因可能與維生素D缺乏或維生素D受體功能失調(diào)有關(guān)。研究表明，維生素D缺乏時可能通過改變自噬內(nèi)穩(wěn)態(tài)中維生素D受體信號傳導(dǎo)的變化，導(dǎo)致包括TNF-α等促炎細胞因子誘導(dǎo)的自噬增加，進而引起IBD的發(fā)生[13]。此外，IBD患兒血漿25(OH)VitD水平與疾病的活動性有關(guān)，活動期患兒血漿25(OH)VitD水平低于緩解期。目前其機制尚不清楚，但有研究發(fā)現(xiàn)，在IBD活動期，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-12(IL-12)等細胞因子的大量產(chǎn)生促進腸道局部微環(huán)境中25(OH)VitD水平降低，進而導(dǎo)致樹突狀細胞(DC)成熟障礙，而補充25(OH)VitD后DC成熟障礙則得以逆轉(zhuǎn)[14]。

Hb是臨床評價貧血程度的重要指標，IBD患兒發(fā)病后，由于胃腸道出血、慢性炎癥等因素導(dǎo)致營養(yǎng)缺乏，常有貧血的表現(xiàn)，Hb水平降低，本研究中UC組和CD組患兒Hb水平均低于對照組，并且活動期患兒Hb水平低于緩解期，因而檢測Hb水平可作為診斷及反映IBD病情程度的指標之一。鐵是Hb合成的原料之一，功能上其能作為Hb攜氧的組分，而Hb的合成及缺氧均能調(diào)節(jié)Hepc的合成。Hepc是肝臟合成的25個氨基酸的小肽，主要經(jīng)腎臟排泄，具有抗菌、免疫調(diào)節(jié)及鐵代謝調(diào)節(jié)的作用。近年來研究報道，IBD患兒血清Hepc存在異常表達的現(xiàn)象，Hepc能抑制腸道鐵吸收，并抑制單核巨噬細胞中鐵釋放，在鐵代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。因此檢測血清Hepc水平可能有助于IBD臨床治療的選擇[15。本研究中，UC組和CD組血漿Hepc水平高于對照組。其原因與缺鐵性貧血時，Hepc的編碼基因HAMP表達增加有關(guān)。有研究表明，血清鐵濃度的降低能磷酸化激活Smad信號傳導(dǎo)通路，進而促進HAMP基因表達[16]。而Hepc水平升高后，誘導(dǎo)各器官中鐵的再分配，進而導(dǎo)致鐵缺乏相關(guān)疾病，進一步加重貧血癥狀。此外，活動期患兒血漿Hepc水平高于緩解期。目前其機制尚不清楚，可能是活動期腸道微環(huán)境中骨形態(tài)生成蛋白6(BMP-6)水平增加，進而促進Hepc表達，而在抑制BMP-6表達后，Hepc水平降低，體內(nèi)鐵含量水平上升，同時機體炎癥過程亦顯著減輕[17]。

本研究結(jié)果顯示，IBD患兒血漿25(OH)VitD水平與Hepc呈負相關(guān)，與Hb呈正相關(guān)。原因可能是IBD患兒VitD缺乏影響VitD對腸道免疫的調(diào)節(jié)作用，腸道免疫功能失衡，胃腸道黏膜損傷出血，導(dǎo)致Hb水平降低的同時，大量炎癥因子促進Hepc表達，Hepc雖能增加腸道鐵的吸收，但IBD時Hepc能結(jié)合脾臟巨噬細胞上的膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白，抑制巨噬細胞中鐵的釋放，導(dǎo)致大量衰老紅細胞在脾臟吞噬后，鐵蓄積于脾臟中，鐵利用障礙，導(dǎo)致患兒貧血癥狀進一步加重[18]。

綜上所述，IBD患兒血漿25(OH)VitD、Hepc水平降低，而Hb水平升高，三者與IBD疾病疾病活動性有關(guān)，參與IBD疾病發(fā)生發(fā)展，檢測血漿25(OH)VitD、Hepc、Hb水平有助于IBD患兒病情判斷。