血清因子GRP78對抗結核藥物性肝損傷的診斷效果評價

朱晗瑀　李金鳳　張咪　王雪　吳冬雪　孫淑豐　馮福民

摘要 目的 通過檢測抗結核藥物性肝損傷（ADLI）患者中GRP78的定量表達，分析血清因子GRP78診斷ADLI的能力，為解決“ADLI 的發生要依靠臨床指標加經驗豐富的臨床醫生來共同判定”這一臨床困境，提供更多理論依據。方法 以唐山市第四醫院2016 年 7—12 月期間肺結核患者為研究對象，將有肝損傷患者63例作為病例組，按照成組匹配原則，選擇同時期63例非肝損傷患者為對照組，酶聯免疫吸附測定（ELISA）法檢測GRP78的表達。SPSS23.0進行統計分析，檢驗水準α為0.05。結果 病例組和對照組之間在年齡、性別、體質量指數（BMI）、吸煙、飲酒、文化程度方面差異均無統計學意義（P>0.05）。而病例組血清因子的含量明顯高于對照組（P<0.05）。GRP78曲線下面積為0.83，診斷的臨界值為1.17（ng/mL），診斷結果與臨床診斷具有中度一致性（Kappa=0.50），靈敏度和特異度分別為74.60%和79.37%。結論 GRP78對ADLI患者具有一定的診斷能力，但效果一般。

關鍵詞 抗結核藥物性肝損傷;GRP78;結核病

中圖分類號? R965? ? 文獻標識碼? A? ? 文章編號? 1671-0223（2020）10-085-03

EVALUATION OF THE DIAGNOSTIC EFFECT OF SERUM FACTOR GRP78 IN ANTI-TUBERCULOSIS DRUG-INDUCED LIVER INJURY Zhu Hanyu，Li Jinfeng，Zhang Mi，et al. School of Public Health， North China University of Science and Technology， Tangshan 063210， China

Abstract? Objective To detect the quantitative expression of GRP78 in patients with ADLI and analyze the ability of serum factor GRP78 to diagnose ADLI， in order to solve the clinical dilemma of "the occurrence of ADLI depends on clinical indicators and experienced clinicians to jointly determine"， provide more theoretical basis. Methods Taking the pulmonary tuberculosis patients in the Fourth Hospital of Tangshan City from July to December 2016 as the research object，63 patients with liver injury as a case group.According to group matching principle，63 cases of non liver injury in the same period were selected as the control group.Detect the expression of GRP78 by ELISA.SPSS23.0 for statistical analysis，the test level α is 0.05.Results There was no significant difference in age，gender，BMI，smoking，drinking and education between the case group and the control group （P>0.05）.The content of serum factor in case group was significantly higher than in control group （P<0.05）.The area under GRP78 curve was 0.83.The critical value of diagnosis was 1.17 （ng/mL），and the diagnostic results were in moderate agreement with clinical diagnosis （Kappa=0.50），The sensitivity and specificity were 74.60% and 79.37%， respectively.Conclusion GRP78 has a certain diagnostic ability for ADLI patients， but the effect is not so good.

Key words? ADLI; GRP78; Tuberculosis

在過去幾十年里，人類與結核病的戰爭未曾間斷，并在預防和控制結核疾病方面取得了巨大的成就。但是，目前我國仍是全球30個結核病高負擔國家之一，每年新發結核病患者約90萬例，位居全球第3位[1]，要實現“消滅結核”的終極目標仍需要進一步的努力。長期持續聯合化療是保證結核病治療效果的唯一措施。但是，在4種一線抗結核藥物中，異煙肼（INH）、利福平（RFP）和吡嗪酰胺（PZA）均有不同程度的肝細胞毒性，治療結核病過程中經常伴隨著肝損傷的發生[2]，從而使標準化療方案的實施受到限制。而肝損傷的發生往往會伴隨著肝細胞的過度凋亡，細胞凋亡主要由死亡受體途徑、線粒體途徑和內質網應激途徑3條通路共同介導。其中，內質網應激途徑是細胞受到相關刺激時最先做出的保護性反應，而葡萄糖調節蛋白78（GRP78）又稱為免疫球蛋白重鏈結合蛋白（Bip），被認為是內質網應激途徑的關鍵標志性因子[3]。本研究基于人群，旨在通過檢測抗結核藥物性肝損傷（ADLI）患者血清中GRP78的定量表達，分析血清因子GRP78診斷ADLI的能力，為解決“ADLI 的發生要依靠臨床指標加經驗豐富的臨床醫生來共同判定”這一臨床困境，提供更多理論依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

以唐山市第四醫院2016 年 7—12 月期間確診為結核病的住院患者為研究對象，將經抗結核治療 6 個月內發生 ADLI 的63例初治患者納入肝損傷組（病例組），并根據組間匹配的原則，選擇抗結核藥物治療 6 個月內未發生 ADLI 的初治患者63例作為非肝損傷組（對照組）。結核病診斷標準為 WS288-2008 肺結核診斷標準[4]，排除患有其他肝臟疾病的患者;服用可導致肝功異常藥物的患者;結核病復治患者;抗結核藥物應用前肝臟即存在異常者。患者均簽署了知情同意書，臨床資料及標本采集經華北理工大學倫理委員會審查同意。

1.2 相關概念定義

1）吸煙：每日≥1 支，連續吸煙時間≥1 年。

2）飲酒：次數≥2 次/周，數量≥50 克，連續飲用≥1 年。

3）戒煙：原吸煙，現平均每日吸煙數< 1支，持續至少6個月。

4） 戒酒：原飲酒，現平均每周飲酒次數< 2次，飲酒量< 50克，持續至少6個月。

5）初治患者：首次被診斷為肺結核，從未接受過抗結核治療，或者接受不規則治療但治療時間不滿一個月的肺結核患者。

1.3 人群血清因子GRP78表達水平的檢測

采用GRP78酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（購于北京冬歌偉業生物科技有限公司），按照試劑盒說明書進行操作檢測。

1.4 統計學分析

資料經整理后錄入Excel表格中，選用SPSS 23.0軟件進行統計分析。計量資料用“均數±標準差”表示，組間均數比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數資料組間比較采用χ2檢驗;采用ROC曲線分析評價GRP78的診斷效能及臨界值的篩選。計算靈敏度、特異度、約登指數評價診斷的真實性，計算Kappa值評鑒診斷的一致性。檢驗水準α=0.05。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組研究對象基本情況比較

病例組與對照組之間年齡、性別、體質量指數、吸煙、飲酒、文化程度比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。而病例組血清因子GRP78的含量為2.64±1.52ng/mL，對照組為0.97±0.26ng/mL，組間比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 血清因子GRP78用于ADLI診斷的效能及臨界值

GRP78 ROC曲線下面積為0.83（95%CI：0.72-0.91，P<0.05），根據約登指數最大點，篩選臨界值為1.17（ng/mL）。

2.3 血清因子GRP78 診斷ADLI的效果評價

以血清因子GRP78>1.17（ng/mL）作為診斷ADLI標準，診斷結果見表2。與臨床診斷結果比較，二者具有中度一致性，具有一定的臨床使用意義，但診斷的漏診率和誤診率偏高。

3 討論

GRP78 表達上調已經在多種疾病中被證實，包括喉鱗狀細胞癌、腎臟疾病、酒精性肝病、CCL4 誘導的肝硬化等[5-9]，大量研究證實，GRP78 可以和多個分子伴侶、信號分子等協作，在內質網穩態調控方面發揮核心作用，促使未折疊蛋白轉移至內質網并進行降解，保持細胞內 Ca2+ 穩態等，因而 GRP78 是內質網應激的主要調節者，并逐步成為癌癥治療的研究靶點[10]。而本研究的這一結果初步證明 GRP78 表達含量與 ADLI 有關，此為本研究的目的之一，推測在臨床常規指導用藥情況下，ADLI 患者中會存在激活內質網應激途徑，從而介導 ADLI 的發生。

本研究的目的之二是為了解決“ADLI 的發生要依靠臨床指標加經驗豐富的臨床醫生來共同判定”這一臨床困境。通過 ROC 曲線下面積分析，血清因子 GRP78 曲線下面積高達0.83，證明 GRP78 成為結核患者診斷 ADLI 標志物的潛力。在之前的研究中，Huang等人利用收集251例肺癌患者和105例健康對照者的血漿，采用商品化的ELISA試劑盒檢測每個樣本中GRP78的表達，同樣是受試者工作特征曲線（ROC曲線）分析GRP78在肺癌診斷中的作用，發現血漿循環因子GRP78可作為肺癌早期診斷的生物標志物[11]。而Kwon同樣發現，GRP78的高表達預示著肺腺癌患者的不良預后[12]。在2019年，Ardic等人通過小鼠實驗，發現內質網應激標志物GRP78和CHOP的水平及其與急性腸系膜缺血相關腸損傷程度存在強相關性，并提出內質網應激標志物GRP78和CHOP可用于急性腸系膜缺血疾病的診斷和預后假設[13]。GRP78的重要價值逐漸得到了人們認可和挖掘。

本研究為首次發現循環因子GRP78在ADLI中的價值，但仍有一定的不足，具體的內質網應激標志物GRP78的相關調控網絡仍需要進一步的研究和挖掘。

血清因子 GRP78 可能是介導 ADLI 發生的重要標志物;血清因子GRP78對ADLI具有一定的診斷價值。

4 參考文獻

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[2020-05-04收稿]

作者單位：063210 河北省唐山市，華北理工大學公共衛生學院（朱晗瑀、張咪、王雪、吳冬雪、馮福民）;期刊社（李金鳳）;護理與康復學院（孫淑豐）;生命科學學院（馮福民）

*通訊作者