新冠疫情下復合酚消毒效果的試驗研究

牛志勇，陳淑芳，趙素娟

（1.河北省獸用液體制劑創新中心 050200；2.河北科星藥業有限公司 050200）

復合酚為酚（41.0%～49.0%）、醋酸（22.0%～26.0%）及十二烷基苯磺酸等配制而成的水溶性混合物， 由河北科星藥業有限公司生產。 本品為國內生產的新型、廣譜、高效消毒劑，能殺滅多種細菌、霉菌和病毒，對多種寄生蟲卵也有殺滅作用，主用于畜禽舍、籠具、飼養場地、排泄物的消毒。 但國內對此報道較少，為了進一步了解其殺菌效果，為臨床提供依據，我公司特對其進行消毒效果實驗，本實驗采用懸液定量法進行試驗研究，現將結果報告如下。

1 方法

1.1 菌種

金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌8099（購自中國獸醫藥品監察所）、某公司F-5 棟車間的常在菌。

1.2 標準培養基

營養肉湯培養基（NB）、普通營養瓊脂培養基（購自北京奧博星生物技術有限公司）。

1.3 標準菌懸液的制備

開封凍干菌種后，以普通肉湯溶化懸浮菌體，然后接種到固體培養上劃線培養，37℃培養至細菌達到生長平衡期時選擇典型的單體菌落在試管固體培養基斜面上傳代， 于37℃培養24h。 挑取上述第2 代培養物中典型菌落，接種于試管固體培養基，于37℃培養24h，即為第3 代培養物。 取菌種第3 代的試管固體培養基斜面新鮮培養物， 用稀釋液洗下并配制成試驗菌懸液。

1.4 常在菌懸液的制備

將6 塊固體營養培養基，開蓋放置于雞舍內，分別于不同的方位，0.5h 后蓋蓋，膜封口，于37℃培養18～24h。 分別挑取不同方位固體營養上的培養物中典型菌落， 接種于試管固體培養基中，于37℃培養24h，取試管固體培養基斜面新鮮培養物，用稀釋液洗下并配制成試驗常在菌懸液。

1.5 試驗菌的活菌計量

1.5.1 稀釋： 先將菌懸液用比濁法初步估測菌液含菌濃度，然后用營養肉湯做10 倍系列稀釋。 取0.1mL 菌懸液至0.9mL 營養肉湯中做101倍稀釋標記為1 號稀釋度； 從1 中取0.1～0.9mL營養肉湯中做102倍稀釋標記為2 號稀釋度； 依次類推稀釋至107倍標記為7 號稀釋度。

1.5.2 接種： 4～7 號各吸取0.1mL 菌液于營養瓊脂平皿內。每個稀釋度接種3 個平皿。 將平皿上的菌懸液搖勻后置37℃恒溫箱培養24h。

1.5.3 計數：選每個平皿菌落數在30～300 個者計數。將計數換算成每毫升原液的菌落數，并計算平均菌數。 平板間的誤差率不能超過10%。

1.6 中合劑鑒定試驗

用金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌8099、某F-5 棟車間的常在菌，設計6 組，用懸液法進行試驗。 結果判定，以第1組無試驗菌，或僅有極少數試驗菌菌落生長，第2 組有較第1 組為多，但較第3、4、5（組）為少的試驗菌菌落生長，第3、4、5（組）有相似量試驗菌生長，且1×107cfu/mL～5×107cfu/mL 之間，其組間菌落數誤差率應不超過15%，第6 組無菌生長，則判定中合劑合格。 連續3 次試驗取得合格評價。 分組情況見下表

1.7 懸液定量法殺菌試驗

將復合酚進行稀釋，分別制成200、400、800 和1600 的稀釋倍數。

1.7.1 將制備好的菌懸液進行活菌計數，然后用0.9%氯化鈉水溶液進行稀釋含菌量1.63×107個/mL 的試驗菌液。

1.7.2 吸取0.5mL 菌液于不同稀釋倍數的復合酚4.5mL 內。

1.7.3 置20℃水浴中作用5min。

1.7.4 立即吸取上述菌混合菌液1.0mL， 加入9.0mL 已滅菌的硫代硫酸鈉溶液中混勻。

1.7.5 以0.9%氯化鈉水溶液代替復合酚， 同時進行上述步驟，作為對照組。

1.7.6 中和10min 后，吸取1.0mL 于固體培養基上，進行活菌計數、計算殺菌率。

2 結果

2.1 中和劑試驗結果

試驗結果表明， 用0.75%硫代硫酸鈉溶液作為復合酚的中合劑，可有效中和復合酚對試驗菌的殘留作用。

2.2 懸液定量法殺菌試驗結果

2.2.1 對大腸桿菌8099 的殺菌試驗結果

2.2.1.1 稀釋倍數200 結果

結果：經計數細菌個數分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前或對照組活菌數；Nt：為消毒后或實驗組活菌數

2.2.1.2 稀釋倍數400 結果

結果：經計數細菌個數分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前或對照組活菌數；Nt：為消毒后或實驗組活菌數

2.2.1.3 稀釋倍數800 結果

結果：經計數細菌個數分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前活菌數；Nt：為消毒后活菌數

2.2.1.4 稀釋倍數1600 結果

結果：經計數細菌個數分別為1、2、5。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-2.66*102）/8.15×106×100%

=100%

滅菌指數：KI= N0/ Nt

= 104

N0：為消毒前活菌數；Nt：為消毒后活菌數

3 結論

根據消毒劑判斷標準， 殺滅指數達到103或殺菌率達99.9%的深度，才評為該消毒液有效消毒濃度。 從以上試驗可以看出，復合酚稀釋400 倍無論對大腸桿菌8099、金黃色葡萄球菌ATCC6538、某公司F-5 棟車間常在菌，都100%殺滅，稀釋400倍為有效消毒深度。