冷凍胚胎解凍后過(guò)夜培養(yǎng)增殖與否對(duì)移植結(jié)局的影響

黃芬 楊冠群

（柳州市人民醫(yī)院 廣西 柳州 545006）

近年來(lái)，隨著人類輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展，冷凍胚胎移植技術(shù)（frozen-thawed embryo transfer，F(xiàn)ET）得以廣泛應(yīng)用[1]。研究表明，提前解凍過(guò)夜培養(yǎng)有助于評(píng)價(jià)胚胎的發(fā)育潛能，改善凍融周期妊娠結(jié)局[2]。本研究回顧性分析在我院進(jìn)行的195例凍融胚胎移植周期的臨床資料，旨在探討D3 卵裂期胚胎提前解凍行過(guò)夜培養(yǎng)，胚胎有無(wú)卵裂球增殖對(duì)移植結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019 年1 月—10 月195 例在我科進(jìn)行凍融胚胎移植周期的臨床資料，均為玻璃化冷凍，解凍后胚胎完全復(fù)蘇，患者年齡22 ～48 歲，平均（36.42±5.81）歲。按過(guò)夜培養(yǎng)后有無(wú)卵裂球增殖劃分為A 組（有增殖組）161 周期，和B 組（無(wú)增殖組）34 周期。

1.2 方法

1.2.1 冷凍胚胎的選擇 胚胎冷凍前進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)分，選擇正常受精、D2 發(fā)育至2 ～4 細(xì)胞胚胎且D3 天持續(xù)發(fā)育到6 ～8細(xì)胞碎片較少的胚胎進(jìn)行冷凍[3]。

1.2.2 胚胎解凍方法 采用日本玻璃化解凍液套裝（KITAZATO Corporation），嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行解凍操作。將冷凍載桿從液氮中取出后迅速插入由二甲基亞砜、乙二醇和蔗糖組成的解凍液(TS 液、DS 液、WS1 液、WS2 液)中，先置于TS液中，38℃熱臺(tái)上保持1min，然后將胚胎移入DS 液室溫下保持3min，再移入WS1 液中室溫下保持5 min，最后移入WS2 液38℃熱臺(tái)上保持5min，解凍完成后充分洗滌，將胚胎放入已平衡好的蓋油G2 培養(yǎng)液中過(guò)夜培養(yǎng)。

1.2.3 胚胎分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及胚胎完全復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn) 胚胎分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]：Ⅰ級(jí)：卵裂球大小均勻，形狀規(guī)則，透明帶完整，胞質(zhì)均勻清晰，沒(méi)有顆粒現(xiàn)象；碎片在0%～5%；Ⅱ級(jí)：卵裂球大小略不均勻，形狀略不規(guī)則，胞質(zhì)有顆粒現(xiàn)象；碎片在6%～20%；Ⅲ級(jí)：卵裂球大小明顯不均勻，形狀不規(guī)則，胞質(zhì)有粗大的顆粒；碎片在21%～50%；Ⅳ級(jí)：卵裂球大小嚴(yán)重不均勻，胞質(zhì)可有嚴(yán)重顆粒現(xiàn)象；碎片在50%以上。以解凍后復(fù)蘇胚胎的卵裂球無(wú)形態(tài)學(xué)可觀察到的損傷作為胚胎完全復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 移植子宮內(nèi)膜準(zhǔn)備方案 對(duì)于月經(jīng)規(guī)律和正常排卵患者，選擇自然周期。如果月經(jīng)缺少規(guī)律性，且排卵障礙，則選擇人工周期。

1.2.5 移植及妊娠判定 B 超引導(dǎo)下施行胚胎移植術(shù)，術(shù)后予以黃體支持，在移植后11 ～14 天，行血清HCG 檢查，判斷是否妊娠；若血清HCG 為陽(yáng)性，繼續(xù)黃體支持，在移植28 ～35 天超聲檢查見(jiàn)孕囊、胚芽或胎心搏動(dòng)確定為臨床妊娠。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

195 例周期中，40 例采用自然周期，155 例人工周期；完全復(fù)蘇胚胎375 枚，移植胚胎370 枚，每例患者移植胚胎為（1.89±0.39）枚。

2.1 兩組患者基本資料比較

A 組161 個(gè)周期，B 組34 個(gè)周期，兩組間一般情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般情況比較

2.2 增殖影響

有增殖的A 組的臨床妊娠率與種植率均高于沒(méi)有增殖的B組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 增值影響[%（n/N）]

3.討論

影響FET 結(jié)局的因素復(fù)雜，除患者年齡、子宮內(nèi)膜容受性等原因外，移植胚胎的發(fā)育潛能是其中一個(gè)重要影響因素。本研究提示，凍融胚胎復(fù)蘇后過(guò)夜培養(yǎng)，卵裂球進(jìn)一步增殖的胚胎具有較好的發(fā)育潛能，臨床妊娠率及胚胎種植率均優(yōu)于未增殖的胚胎。表明提前解凍過(guò)夜培養(yǎng)觀察復(fù)蘇后胚胎的進(jìn)一步發(fā)育情況對(duì)胚胎技術(shù)人員及臨床醫(yī)生選擇高質(zhì)量的胚胎提供有價(jià)值的參考。有研究發(fā)現(xiàn)，隨著胚胎復(fù)蘇后卵裂求數(shù)目的進(jìn)一步增加，臨床妊娠率似有逐漸升高的趨勢(shì)[5]。

凍融胚胎經(jīng)過(guò)一段時(shí)間體外培養(yǎng)卵裂球未發(fā)生增殖的胚胎大多數(shù)存在染色體異常。而此類胚胎進(jìn)行移植，會(huì)影響臨床著床率，即使著床成功，也會(huì)因?yàn)槿旧w異常而發(fā)生流產(chǎn)[6]。LAVERGE[7]等對(duì)復(fù)蘇后無(wú)生長(zhǎng)的胚胎進(jìn)行熒光原位雜交，發(fā)現(xiàn)這類胚胎大多數(shù)有單倍體、三倍體、四倍體甚至六倍體和嵌合體的發(fā)生，僅有20%左右的胚胎表現(xiàn)為正常二倍體，因此建議不要移植此類胚胎。

可見(jiàn)凍融胚胎提前解凍行過(guò)夜培養(yǎng)，觀察卵裂球的增殖情況有助于評(píng)價(jià)胚胎的種植潛能，為胚胎的選擇提供可靠依據(jù)，也有利于臨床醫(yī)生對(duì)患者妊娠結(jié)局進(jìn)行預(yù)判。