抗環(huán)瓜氨酸肽抗體檢測在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用

馮丹丹，李晶晶

(河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 中心實(shí)驗室，河南 洛陽 471000)

抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(cyclic citrullinated peptide，CCP)是一種自身抗體，以環(huán)化瓜氨酸多肽為抗原，已有研究證明，其對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)有較高的敏感性和特異性，可作為RA早期診斷的高度特異指標(biāo)[1]。抗CCP抗體臨床檢測多采用酶聯(lián)免疫吸附法，其檢測原理是將含有抗CCP抗體的待測血清與微孔板上包被環(huán)化瓜氨酸多肽抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)記抗人lgG，形成CCP-抗CCP抗體-酶標(biāo)記抗人lgG復(fù)合物，再加入底物顯色，顯色深淺與抗CCP抗體水平成正比，用不同濃度抗CCP抗體標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，對抗CCP抗體進(jìn)行定性和定量[2-3]。RA是一種以炎性滑膜炎為主要臨床表現(xiàn)的慢性風(fēng)濕免疫性疾病，其發(fā)病原因尚不明確，可能與自身免疫因素、感染、遺傳因素等有關(guān)，臨床診斷多依賴于癥狀、實(shí)驗室檢測及影像學(xué)檢查[4]。RA患者發(fā)病2 a內(nèi)即可出現(xiàn)不可逆的骨關(guān)節(jié)破壞，嚴(yán)重危害患者運(yùn)動系統(tǒng)并可累及全身其他重要臟器，給工作和生活帶來沉重負(fù)擔(dān)[5]，因此RA的早期診斷對本病的預(yù)后具有非常重要的作用。有報道指出，抗CCP抗體可較早的在RA患者血清中被檢測到[6]。本研究旨在進(jìn)一步分析及評價抗環(huán)瓜氨酸肽抗體檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的臨床應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年8月至2019年9月于河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的RA患者150例為研究對象，設(shè)為觀察組，選取同期入院治療且年齡段一致的非RA自身免疫性疾病患者150例為對照組A；同期入院體檢且年齡段一致的健康人150例為對照組B。觀察組男56例，女94例，年齡37～66歲，平均(46.6±7.1)歲，病程1～8 a，平均(2.3±0.8)a；對照組A男57例，女93例，年齡37～66歲，平均(44.9±6.7)歲，非RA自身免疫性疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者30例、混合型結(jié)締組織病28例、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮病28例、干燥綜合征41例、原發(fā)性膽汁性肝硬化11例、特發(fā)性血小板減少性紫癜12例；對照組B包括男56例，女94例，年齡37～66歲，平均(46.6±6.9)歲。3組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)觀察組患者診斷依據(jù)參照1978年美國風(fēng)濕病學(xué)會制定的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]和2015年美國風(fēng)濕病學(xué)會/歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟發(fā)表的痛風(fēng)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行RA的臨床診斷[8]；對照組A各類型的自身免疫性疾病診斷依據(jù)均參照國內(nèi)或國際相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；對照組B均為健康人群。觀察組和對照組A兩組患者的臨床信息均收集完整，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會通過，所有研究對象均自愿簽署知情同意書，排除藥物過敏者、合并其他臟器嚴(yán)重功能障礙者、活動性感染者、意識障礙不能配合者及臨床病例資料不全者。

1.3 檢測方法對3組研究對象均進(jìn)行CCP及類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)檢測，所有研究對象清晨空腹，采集靜脈血2～3 mL(紅色促凝真空釆血管，河北超然醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))，待血標(biāo)本凝固后，以離心半徑10 cm，3 000 r·min-1離心處理5 min，取上層血清立即檢測或分離血清-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?。采用歐蒙(德國) 醫(yī)學(xué)實(shí)驗診斷有限公司生產(chǎn)的抗CCP 抗體定量檢測試劑盒檢測抗CCP 抗體，檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附法，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作；采用羅氏cobas 800全自動生化分析儀測定血清RF，試劑盒及配套質(zhì)控品由貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司生產(chǎn)，檢測方法為免疫比濁法，檢驗操作嚴(yán)格按照實(shí)驗室制定的SOP進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)比較3組患者的抗CCP抗體與RF水平，分析抗CCP抗體與RF的相關(guān)性，及其在RA診斷中的敏感性及特異性。抗CCP抗體與RF的陽性標(biāo)準(zhǔn)：抗CCP抗體≥45 U·mL-1即為陽性，RF≥20 IU·mL-1即為陽性[10-11]。

2 結(jié)果

2.1 3組抗CCP抗體和RF陽性率間的比較觀察組患者抗CCP抗體陽性率和RF陽性率均高于對照組A、對照組B，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；對照組A抗CCP抗體和RF陽性率均高于對照組B，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 3組抗CCP抗體和RF的陽性率比較[n(%)]

注：與對照組A比較，aχ2=177.12，P<0.001；bχ2=31.91，P<0.001；與觀察組比較，cχ2=215.91，P<0.001；dχ2=89.75，P<0.001；與對照組B比較，eχ2=8.04，P=0.004；fχ2=16.68，P<0.001；抗CCP抗體—抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；RF—類風(fēng)濕因子。

2.2 抗CCP抗體和RF對RA的診斷價值分析受試者工作特征曲線分析顯示，抗CCP抗體診斷RA的最佳臨界點(diǎn)為41.75 U·mL-1，曲線下面積為0.90，敏感性為78.75%，特異性為93.25%；RF診斷RA的最佳臨界點(diǎn)為20.39 IU·mL-1，曲線下面積為0.74，敏感性為88.33%，特異性為79.89%。見圖1。

2.3 觀察組患者抗CCP抗體和RF的相關(guān)性分析相關(guān)性分析結(jié)果顯示，觀察組患者抗CCP抗體與RF水平呈正相關(guān)(r=0.916，P<0.001)。見圖2。

圖1 抗CCP抗體和RF對RA的診斷價值分析

圖2 觀察組患者抗CCP抗體和RF的相關(guān)性分析

3 討論

RA是一種以炎性滑膜炎為主要損害的慢性自身免疫性炎癥性疾病，目前病因尚未完全明確，臨床主要表現(xiàn)為晨僵、關(guān)節(jié)畸形、手足腕踝等關(guān)節(jié)炎癥，且易反復(fù)發(fā)作，預(yù)后不良，多出現(xiàn)關(guān)節(jié)強(qiáng)直、功能嚴(yán)重障礙[12]。如不及時治療，可累及運(yùn)動系統(tǒng)、心肺腎等重要臟器，由此引發(fā)一系列并發(fā)癥，如心包炎、壞死性脈管炎、貧血、干燥綜合征等，致殘率極高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。根據(jù)疾病的易復(fù)發(fā)及預(yù)后不良等特點(diǎn)，RA治療關(guān)鍵還在于早發(fā)現(xiàn)及早預(yù)防，因此對RA的早診斷、早治療及功能鍛煉等對RA患者至關(guān)重要[13]。

RF是RA患者血清中的自身免疫性抗體，與IgG FC片段上的抗原表位結(jié)合，是目前公認(rèn)的診斷RA的主要標(biāo)準(zhǔn)之一，敏感性高，但特異性低，除了在RA患者可被檢測到，還可在其他風(fēng)濕性疾病及一部分健康人血清中被檢測到[14-15]?？笴CP抗體也是RA患者血清中的自身免疫性抗體，其本質(zhì)是環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段，抗CCP抗體具有較高的特異性及敏感性，可作為RA篩查的可靠指標(biāo)[4]。本研究中，觀察組患者抗CCP抗體陽性率和RF陽性率均高于對照組A及對照組B；抗CCP抗體和RF在RA患者的敏感性及特異性分別為78.75%、93.25%和88.33%、79.89%。Iannone等[15]的研究結(jié)果也顯示，抗CCP抗體對RA診斷特異性高達(dá)90%以上，敏感性為50%～80%。在牟曉月等[16]的研究中，抗CCP抗體在RA早期血清中即可被檢測出，甚至早于RA患者臨床癥狀而被檢測到。本研究通過比較3組研究對象抗CCP抗體與RF水平，分析抗CCP抗體與RF的相關(guān)性，提示了抗CCP抗體在RA的診斷中具有較好的敏感性及特異性。

抗CCP抗體是診斷RA較好的血清學(xué)標(biāo)志物，具有較高的臨床應(yīng)用價值，研究結(jié)果還顯示抗CCP抗體與RF呈正相關(guān)關(guān)系。但谷磊[6]認(rèn)為抗CCP抗體診斷RA的敏感性較低，遠(yuǎn)不及RF，因此聯(lián)合RF檢測，可有效提高RA的診斷準(zhǔn)確率。本研究出于臨床應(yīng)用研究的實(shí)驗條件及病例采集等方面的限制，還有很多不足之處，只選取了抗CCP抗體與RF兩種檢測指標(biāo)對RA實(shí)驗室早期診斷進(jìn)行研究；只選用了酶免法等實(shí)驗方法，未采用更多實(shí)驗方法進(jìn)行檢測分析，存在一定的局限性，仍需后續(xù)更加完善細(xì)致的研究。