五邑地區910例親子鑒定案件突變分析

關鍵詞 五邑地區 親子鑒定 突變 STR

作者簡介：麥柏盛，廣東天地方正司法鑒定中心，研究方向：法醫物證學。

中圖分類號：D919 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.19387/j.cnki.1009-0592.2020.06.021

親權關系鑒定在法醫鑒定實踐中較為常見，如何提高親權關系鑒定的科學性、權威性對法醫鑒定具有重要的意義。常染色體短串聯重復序列（STR）因其具有較高的擴增成功率，且具有極高的檢測靈敏度和可重復利用等優勢，在親權關系鑒定、個體差異化識別以及群體遺傳學研究等方面用途廣泛。目前，法醫親權關系與群體遺傳學研究已將常染色體短串聯重復序列（STR）作為重要的遺傳標記之一，廣泛應用于法醫鑒定實踐中。隨著現代科學技術的發展，相關研究發現，常染色體短串聯重復序列（STR）雖具有較高的擴增成功率，但其突變頻發，，如根據2008年美國血庫協會公布的相關研究數據顯示，父源基因突變率在美國人群中達到0.007%-0.371%。而國內相關研究報告顯示，國內父源基因突變率處于0.008%-0.344%之間，由此可見，在法醫鑒定實踐中，尤其是親權關系鑒定過程中，在利用常染色體短串聯重復序列（STR）作為遺傳標記使用過程中，需要考慮其突變事件發生率。為更好地研究不同地區常染色體短串聯重復序列（STR）突變現象和基礎遺傳學信息，本文以五邑地區910例親子鑒定案件作為研究對象，采用Chelex-100法提取樣本的DNA，并用熒光標記STR復合擴增試劑盒MicroreaderTM21Direct ID System進行復合PCR擴增。在此基礎上分析突變等位基因的類型以及基因突變發生情況，以此為親權關系等法醫鑒定實踐提供參考。現將具體研究報告匯報如下。

一、資料與方法

（一）一般資料

選取五邑地區910例親子鑒定樣本作為研究對象，910例樣本均為司法親子鑒定案件中收集獲得，其中895例案件為“支持”案件，單親鑒定有234例，雙親鑒定有661例，男性665例，女性230例，年齡主要分布在18-48歲，平均年齡（32？.1）歲。以上述樣本中的生物取樣為標本，具體包括肋軟骨、血斑、帶毛囊毛發、唾液以及唾液斑等等。

（二）檢驗儀器與試劑

ABI9700 PCR儀（Applied Biosystems美國應用生物系統公司）、ABI3130型基因分析儀（Applied Biosystems美國應用生物系統公司）、MicroreaderTM21Direct ID System（蘇州閱微基因技術有限公司）、MicroreaderTM 23sp ID System試劑盒作為補充試劑盒等。

（三）方法

1.DNA分型檢測

按照中華人民共和國公共安全行業標準《法庭科學DNA實驗室檢驗規范》（GA/T 383-2014）附錄A中的Chelex-100法提取上述樣本的DNA。取上述樣本的DNA提取產物適量，用熒光標記STR復合擴增試劑盒MicroreaderTM21Direct ID System（蘇州閱微基因技術有限公司，位點包括D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、D2S441、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA）進行復合PCR擴增（操作步驟按試劑盒說明），并設立陰性及陽性對照。擴增產物應用ABI3130型基因分析儀（Applied Biosystems美國應用生物系統公司）進行電泳分離，用Gene Mapper基因座分型軟件對電泳數據進行分析，得到上述樣本的基因分型。

2.突變基因座判別

采取平行驗證的方法，利用MicroreaderTM 21 Direct ID System試劑盒，使用MicroreaderTM 23sp ID System試劑盒為補充試劑盒以開展重復檢測對不符合遺傳規律的突變事件予以判定。若存在1-2個不符合遺傳規律基因座的突變案例，則按照GB/T37223-2018《親權鑒定技術規范》和GA/T965-2011《法庭科學DNA親子鑒定規范》中親權關系的標準方法，并利用不同廠家生產的試劑盒，對常染色體短串聯重復序列（STR）進行重復檢測，若常染色體短串聯重復序列（STR）符合遺傳規律時，當累積親權指數>10000時支持存在親權關系。其中突變基因座則認為為不符合遺傳規律的基因座。

（四）統計學處理

采用統計學軟件SPSS22.0 和MicrosoftOf ficeExcel 2013進行數據統計分析，采用計量資料采用（ （-）眘）表示，以t檢測。其中P<0.05代表差異顯著，具有統計學意義。

二、結果

910例親子鑒定案例中，鑒定結論為“支持”的有895例，單親鑒定有234例，雙親鑒定有661例。其中32例案子發生33個STR基因位點突變，單親和雙親鑒定分別有11例和21例。其中有1例案子（2018年的第126號）有2個STR基因位點（D6S1043和D12S391）發生突變。僅有1例案子（2018年的第221號）為二步突變（D3S1358），其余31例案子均為一步突變。此外，在33例突變事件中，三聯體父源突變占23例，突變率為69.7%，母源突變占2例，突變率為6.1%;二連體父源突變4例，突變率為12.2%。其中父系與母系來源突變比例為13.5：1。具體結果詳見下表1.

表1：常染色體短串聯重復序列（STR）突變情況分析

三、討論

常染色體短串聯重復序列（STR）基因座突變發生率與其多態性具有緊密的聯系。常染色體短串聯重復序列（STR）多態性又與其核心重復單位數量呈正相關關系，因此在親子鑒定法醫實踐中，突變率越高，其違反遺傳規律發生數越多，親權指數的計算越發困難，也就增加了法醫鑒定的難度。為此，在親子鑒定中需要重視常染色體短串聯重復序列（STR）突變發生率。通常情況下，常染色體短串聯重復序列（STR）基因座突變遵循逐步突變模式，STR突變以1個核心重復單位上的增加或減少為主，2個以上的核心重復單位的變化不多。基因座突變步數的增加意味著常染色體短串聯重復序列（STR）突變概率的降低，本次研究顯示，910例親子鑒定案例中，鑒定結論為“支持”的有895例，單親鑒定有234例，雙親鑒定有661例。其中32例案子發生33個STR基因位點突變，單親和雙親鑒定分別有11例和21例。僅有1例案子（2018年的第126號）有2個STR基因位點（D6S1043和D12S391）發生突變。僅有1例案子（2018年的第221號）為二步突變（D3S1358），其余31例案子均為一步突變。此外，在33例突變事件中，三聯體父源突變占23例，突變率為69.7%，母源突變占2例，突變率為6.1%;二連體父源突變4例，突變率為12.2%。其中父系與母系來源突變比例為13.5：1。從常染色體短串聯重復序列（STR）基因座突變來源看，精原細胞演變為精子過程中DNA的復制次數要高于卵子成熟進程中的復制次數，而復制次數與滑動錯配發生率具有正相關聯。在相同檢測體系下，等位基因長度越長意味著常染色體短串聯重復序列（STR）突變率越高，這是由于基因座突變常發生在復制滑鏈錯配過程中串聯排列的正向重復序列。也即在DNA復制進程中，常染色體短串聯重復序列（STR）基因座在模版鏈與新生鏈發生分離是導致其核心重復區域出現堿基錯配。

法醫鑒定實踐表明，親子鑒定的準確性和權威性受基因突變的影響顯著。親緣關系的鑒定是基于人類的DNA長度多態性遺傳標記，在遵循孟德爾遺傳定律假設前提下，聯合應用確定的親子鑒定結果。因此，在法醫鑒定親緣關系實踐中，若忽視常染色體短串聯重復序列（STR）突變情況，則極易造成親緣關系鑒定的失敗。為提高親緣鑒定的準確性，必須在群體進化演變研究中，考慮常染色體短串聯重復序列（STR）突變在群體計算與群體歷史中的遺傳學問題。在不同國家、地區以及民族間，常染色體短串聯重復序列（STR）基因座突變率的計算，為親子鑒定的科學性、權威性和準確性提供了堅實的數據支持。本研究顯示，通過獲得五邑地區人群常染色體短串聯重復序列（STR）突變基礎數據，如常染色體短串聯重復序列（STR）突變點個數、三聯體和二聯體中父源與母源突變步數等等，為更加科學準確的判定親子關系，提供了客觀依據。綜上所述，為提高親緣鑒定的準確性，在法醫鑒定實踐中必須秉持嚴謹客觀的態度，通過重復檢測、不同檢測系統與檢測試劑多樣式平行檢測的檢測上，判定親緣關系。

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