肺炎患者血清LTB4、ADA、內(nèi)毒素水平變化及其病原體鑒別診斷價(jià)值分析

任艷玲，劉芳，王靜

遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)阜新礦總醫(yī)院，遼寧阜新123000

肺炎是呼吸系統(tǒng)常見的疾病類型，致病病原體不同，患者的病情、臨床轉(zhuǎn)歸異質(zhì)性較大，給臨床鑒別病原體、評估病情、臨床決策和干預(yù)帶來困難[1]。白三烯B4(LTB4)是一種與炎癥反應(yīng)相關(guān)的白三烯類物質(zhì)，在細(xì)菌性肺炎患者中呈高表達(dá)，但在其他病原體肺炎中表達(dá)尚未闡明，是否有助于細(xì)菌性肺炎的鑒別亦不明確[2，3]。腺苷脫氨酶(ADA)在革蘭陰性菌與革蘭陽性菌導(dǎo)致的顱內(nèi)感染中表達(dá)差異顯著，故推測ADA的表達(dá)情況可能與病原體種類有關(guān)[4]。內(nèi)毒素(LPS)是革蘭陰性菌細(xì)胞壁中的一種成分，有助于鑒別細(xì)菌，但與ADA、LTB4等聯(lián)合能否提高鑒別價(jià)值仍有待探討[5]。鑒于此，我們檢測了不同病原體肺炎患者血清LTB4、ADA、LPS水平變化，分析其對病原體的鑒別診斷價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 經(jīng)遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)阜新礦總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2017年3月～2019年9月我院收治的肺炎患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合病原體所致肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②無肺結(jié)核或肺外結(jié)核；③入組前4周無抗生素等相關(guān)藥物應(yīng)用史；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①長期應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑；②支氣管異物繼發(fā)肺炎；③混合感染所致肺炎；④合并其他系統(tǒng)急慢性感染；⑤合并哮喘；⑥有認(rèn)知障礙、精神病；⑦合并惡性腫瘤。共收集肺炎患者126例，根據(jù)支氣管肺泡灌洗術(shù)采痰法或電動(dòng)低負(fù)壓氣管內(nèi)吸痰病原學(xué)培養(yǎng)結(jié)果分為細(xì)菌組46例、病毒組37例、支原體組43例。細(xì)菌組男25例、女21例，年齡(40.81±13.55)歲，合并慢性阻塞性肺疾病6例、慢性腎臟病5例、糖尿病3例、高脂血癥7例、高血壓2例、冠心病2例；病毒組男18例、女19例，年齡(38.76±14.32)歲，合并慢性阻塞性肺疾病4例、慢性腎臟病3例、糖尿病1例、高脂血癥6例、高血壓2例、冠心病1例；支原體組男20例、女23例，年齡(39.14±14.83)歲，合并慢性阻塞性肺疾病5例、慢性腎臟病6例、糖尿病5例、高脂血癥8例、高血壓3例、冠心病3例；選取同期50例無肺炎的體檢人群對作為照組，男24例、女26例，年齡(38.96±15.47)歲，合并慢性阻塞性肺疾病3例、慢性腎臟病4例、糖尿病6例、高脂血癥7例、高血壓2例、冠心病3例。各組性別、年齡、合并疾病具有可比性。

1.2 血清LTB4、ADA、LPS檢測方法 入院后取患者空腹靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心10 min，采用ELISA法檢測血清LTB4、ADA、LPS。LTB4試劑盒購自上海研生生物有限公司，ADA試劑盒購自上海恪敏生物科技有限公司，LPS試劑盒購自研域(上海)化學(xué)試劑有限公司，均嚴(yán)格按說明書操作。

1.3 肺炎病情評估方法 采用肺炎嚴(yán)重指數(shù)(PSI)[7]進(jìn)行評估，Ⅱ級為≤70分，Ⅲ級為71～90分，Ⅳ級為91～130分，Ⅴ級為>130分；分值越高，病情越嚴(yán)重。

2 結(jié)果

2.1 各組血清LTB4、ADA、LPS水平比較 見表1。

表1 各組血清LTB4、ADA、LPS水平比較

注：與對照組相比，aP<0.05；與細(xì)菌組比較，bP<0.05。

2.2 不同病情肺炎患者血清LTB4、ADA、LPS水平比較 肺炎病情評估Ⅱ級35例、Ⅲ級47例、Ⅳ級26例、Ⅴ級18例，其血清LTB4、ADA、LPS水平比較見表2。

表2 不同病情肺炎患者血清LTB4、ADA、LPS水平比較

注：與Ⅱ級比較，aP<0.05；與Ⅲ級比較，bP<0.05；與Ⅳ級比較，cP<0.05。

2.3 血清LTB4、ADA、LPS水平與肺炎病情的關(guān)系 血清LTB4、ADA、LPS水平均與肺炎PSI呈正相關(guān)(r分別為0.397、0.456、0.330，P均<0.05)。

2.4 血清LTB4、ADA、LPS鑒別肺炎病原體的價(jià)值 LPS鑒別細(xì)菌的AUC為0.904(95%CI：0.827～0.955)，截?cái)嘀禐?.12 EU/mL時(shí)，敏感度為84.78%，特異度為80.00%；LPS+LTB4鑒別細(xì)菌的AUC為0.964(95%CI：0.905～0.991)，敏感度為93.48%，特異度為96.00%。ADA鑒別病毒的AUC為0.739(95%CI：0.634～0.827)，截?cái)嘀禐?2.6 U/L時(shí)，敏感度為67.57%，特異度為74.00%；ADA+LTB4鑒別病毒的AUC為0.789(95%CI：0.688～0.869)，敏感度為91.89%，特異度為54.00%。ADA鑒別支原體的AUC為0.783(95%CI：0.686～0.862)，截?cái)嘀禐?5.0 U/L時(shí)，敏感度為69.77%，特異度為78.00%；ADA+LTB4鑒別支原體的AUC為0.862(95%CI：0.774～0.924)，敏感度為69.77%，特異度為90.00%。

3 討論

肺炎可發(fā)于任何年齡，發(fā)病率較高，早期病原微生物的確定存在一定困難。當(dāng)出現(xiàn)咳嗽等癥狀時(shí)，再行痰液等病原學(xué)培養(yǎng)可明確病原體種類，但存在時(shí)效性不足的缺點(diǎn)，可能貽誤治療時(shí)機(jī)；如根據(jù)經(jīng)驗(yàn)用藥，存在一定盲目性。因此，研究鑒定病原菌的方法具有重要意義。

LTB4由相應(yīng)炎癥介質(zhì)的白細(xì)胞產(chǎn)生，可使活化的白細(xì)胞依附于內(nèi)皮上，為其穿過組織提供便利，并能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、溶酶體酶、活性氧形成與釋放[8，9]。本研究結(jié)果顯示，細(xì)菌組、病毒組、支原體組血清LTB4水平均高于對照組，提示細(xì)菌、病毒、支原體肺炎均會(huì)上調(diào)LTB4表達(dá)。張少雨等[10]研究顯示，LTB4與肺炎患兒體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，在細(xì)菌、病毒、支原體肺炎中表達(dá)高于正常兒童，與本研究結(jié)論相似。但本研究發(fā)現(xiàn)，不同病原體肺炎患者血清LTB4水平無明顯差異；這提示LTB4可作為輔助指標(biāo)評估肺炎的發(fā)生，但不能判斷肺炎病原體的種類，需聯(lián)合其他指標(biāo)應(yīng)用。這可能是不同病原體引起肺炎時(shí)，存在類似的炎癥細(xì)胞浸潤，LTB4可能是炎癥發(fā)生的環(huán)節(jié)之一，而并非結(jié)果。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，血清LTB4水平隨肺炎病情分級增加而升高，提示LTB4可影響肺炎患者的病情。因此，從基因水平干擾LTB4的表達(dá)，可能為肺炎的治療提供了一個(gè)新靶點(diǎn)與思路。Zhao等[11]研究發(fā)現(xiàn)，降低LTB4表達(dá)，可減輕慢性阻塞性肺疾病合并肺炎患者肺部感染，證實(shí)靶向LTB4能改善肺炎患者病情，論證了本研究的結(jié)論。LTB4影響病情的機(jī)制可能是，其通過趨化中性粒細(xì)胞至肺部造成肺組織損傷，并釋放彈性蛋白酶、氧自由基等造成肺氧化應(yīng)激損傷，從而加重病情[12]。

ADA在人體中廣泛存在，是一種核酸代謝酶，外周血中主要存在于淋巴細(xì)胞，能誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為吞噬細(xì)胞，并能促進(jìn)CD4+T淋巴細(xì)胞增殖，參與機(jī)體細(xì)胞免疫過程[13，14]。本研究顯示，病毒組、支原體組血清ADA水平高于對照組，細(xì)菌組ADA與對照組間未見明顯差異，提示血清ADA可鑒別病毒、支原體肺炎。細(xì)菌中胞外菌較常見，多通過產(chǎn)生毒素、侵襲力致病，機(jī)體防御中細(xì)胞免疫不占主要地位；而病毒有胞內(nèi)寄生性，CD4+T淋巴細(xì)胞參與抗病毒的適應(yīng)性免疫過程，所以在病毒肺炎中ADA水平升高[15，16]。支原體雖為胞外寄生菌，但其致病機(jī)制涉及直接侵犯與免疫損傷；在抗支原體感染中，機(jī)體細(xì)胞免疫起到重要作用，故支原體肺炎中ADA水平亦升高[17]。ROC分析顯示，ADA鑒別病毒的AUC為0.739，截?cái)嘀禐?2.6 U/L時(shí)，鑒別支原體的AUC為0.783，截?cái)嘀禐?5.0 U/L時(shí)，可為臨床鑒別肺炎病毒與支原體肺炎提供量化參考。同時(shí)，血清ADA水平隨著肺炎病情分級增加而升高，提示ADA可影響肺炎患者病情；ADA水平越高提示病情較重，可為臨床干預(yù)提供理論參考，亦說明抑制ADA表達(dá)可能有助于肺炎患者病情的改善。

本研究結(jié)果顯示，細(xì)菌組血清LPS高于對照組，鑒別細(xì)菌的AUC為0.904，截?cái)嘀禐?.12 EU/mL，敏感度為84.78%，特異度為80.00%。這提示血清LPS鑒別細(xì)菌肺炎具有較高的價(jià)值，能為臨床判斷細(xì)菌肺炎提供可靠參考。LPS位于細(xì)胞壁的最外層并覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上，當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞細(xì)胞壁后可釋放出來，因此LPS對細(xì)菌具有較高的鑒別價(jià)值[18]。且本研究顯示，LPS+LTB4鑒別細(xì)菌的AUC為0.964，高于單一LPS，提示兩指標(biāo)聯(lián)合能提高對細(xì)菌病原菌的鑒別價(jià)值。同時(shí)LPS與PSI評分呈正相關(guān)，表明LPS越高，患者肺炎病情越嚴(yán)重;臨床應(yīng)重視此類患者的治療，以最大程度改善患者預(yù)后。此外本研究在以上研究基礎(chǔ)上首次探討了聯(lián)合指標(biāo)鑒別肺炎不同病原菌的價(jià)值，發(fā)現(xiàn)ADA+LTB4鑒別病毒的AUC為0.789，鑒別支原體的AUC為0.862，亦高于單一的ADA，說明ADA+LTB4能提高對病毒、支原體的鑒別能力，可為臨床選取合適指標(biāo)提供循證支持。

綜上所述，肺炎患者隨著病情加重，血清LTB4、ADA、LPS水平逐漸升高，與肺炎患者病情呈正相關(guān)；血清LTB4、ADA對病毒肺炎、支原體肺炎具有較高的鑒別價(jià)值，LPS對細(xì)菌性肺炎具有較高的鑒別價(jià)值。本研究不足之處在于病例數(shù)較少，有待后續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。